载脂蛋白E不同等位基因与绝经妇女血脂水平间的关系分析
【摘要】 目的 探讨载脂蛋白E(Apo E)基因多态性与绝经妇女血脂水平的相关关系，以了解载脂蛋白E(Apo E)不同基因型绝经妇女的血脂水平。方法 应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检查104例绝经妇女的Apo E基因，同时检测血脂水平进行比较。结果 Apo E基因多态性与绝经妇女血浆低密度脂蛋白(LDL-C)水平有相关性，ApoEε2等位基因的绝经后妇女的血浆LDL-C水平为(3.22±1.10mmol/L)，Apo Eε4等位基因的绝经后妇女血浆LDL-C水平为(4.03±0.63mmol/L)，二者之间差异有显著性(P<0.05)。结论 绝经妇女的LDL-C水平与Apo E基因多态性密切相关。ε2等位基因为低血浆LDL-C水平，ε4等位基因为高血浆LDL-C水平。Lp(a)的血浆水平与Apo E基因多态性无相关性。
关键词 绝经妇女 Apo E基因多态性 血脂水平
【文献标识码】 A 【文章编号】1609-6614(2003)19-1767-02
, http://www.100md.com
A prospective study on the serum lipids in different apolipoprotein
E allele postmenopausal women
Zhang Jiafang，Yang Jiuling，Xie Bin，et al.
Hanyang Railway Central Hospital of Wuhan Municipal，430050.
【Abstract】 Objective To detect the relationship between the postmenopausal women’s plasma lipoprotein level and the apolipoprotein gene E polymorphism.Methods Apo E gene was analyzed by a combination of polymersa chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP)and plasma lipoprotein level was inspected in104postmenopausal women.Results The apolipoprotein E gene polymorphism has relationship with the postˉmenopausal women’s plasma low-density lipoprotein(LDL-C).ApoEε 2 allele postmenopausal women have low plasˉma LDL-C level(3.22±1.10mmol/L)and ApoEε 4 allele postmenopausal women have high plasmaLDL-C level(4.03±0.63mmol/L).There is significant difference between the twoalleles(P<0.05).Conclusion The postˉmenopausal women’s LDL-C level has a near relationship with the the apolipoprotein E gene polymorphism.ε 2 allele postmenopausal women have low plasma LDL-C level.ε 4 allele postmenopausal women have high plasma LDL-C level.The Lp(a)plasma lipoprotein level wouldn’t be effected by the apolipoprotein gene polymorphism.
, 百拇医药
Key words postmenopausal women apolipoprotein E gene polymorphism plasma lipoprotein level
研究表明，载脂蛋白E(Apo E)等位基因对血浆中脂质含量有重要的作用。Frikke-Schmidt [1] 报道，血浆总胆固醇的变异中在女性大约5%～10%与Apo E基因多态性相关。而男性中则仅有2%～6%与Apo E基因多态性相关。因此我们应用PCR-RFLP的技术，分析了等位基因频率在绝经妇女中的分布。探讨绝经妇女Apo E基因多态性与血脂之间的相关关系。
1 对象与方法
1.1 对象 选择本院门诊和健康体检的绝经2年以上的妇女104名，均排除慢性肝病，糖尿病以及内分泌病史。
1.2 实验室检测 禁食12h以上，空腹取不抗凝静脉血4ml，放置后分离血清，置于-40℃冻存集中检测，另取静脉血2ml，置于EDTA管内，分离白细胞，检测Apo E表型。各项测定均由专人严格按规定方法操作。质控对照样品每次实验均进行，以保证准确和生化实验的精确。
, 百拇医药
胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)采用酶法测定，由上海长征医学科学有限公司提供试剂，用芬兰产KONE.SUPRA全自动生化 分析仪测定。LP(a)测定采用免疫比浊法。
Apo E基因型分析，用美国PE480扩增仪，采用PCR-RFLP技术从基因水平检测Apo E基因多态性 [2] 。
1.3 数据分析 Apo E基因频率的平衡估价检测用如下方法计算，如Apo Eε4(频率)=Apo Eε4/ε4+1/2(Apo Eε2/ε4+Apo Eε3/ε4)。数据均以X±s表示，应用ANOVA模型不同等位基因组内血脂变化，评价血脂与基因型相互关系。
2 结果
2.1 104名绝经妇女Apo E表型和基因频率 见表1。
, 百拇医药
表1 Apo E的表型分布和等位基因频率
104名绝经后妇女基因分型为3种等位基因和6种基因型。根据Apo E基因是共显性复等位基因，按照Hardy-Weinberg平衡定律计算复等位基因频率。1名ε2/4排除外，根据等位基因将103名绝经后妇女分为Apo Eε2(ε2/2ε2/3n=11)，Apo Eε3(ε3/3n=77)，Apo Eε4(ε3/4ε4/4n=15)。
2.2 绝经妇女不同等位基因的血脂水平比较 见表2。
表2 不同等位基因的血脂水平 (X±s)
注:组间比较ε2与ε4LDL-C差异有显著性， ˇ P<0.05 绝经妇女Apo Eε2、ε3、ε4等位基因之间仅表现在LDL-C有组间差异，经组与组之间两两比较，仅表现在ε2与ε4组之间LDL-C差异有显著性(P<0.05)，TG、TC、HDL-C以及LP(a)各组间比较差异均无显著性。
, 百拇医药
3 讨论
Apo E作为低密度脂蛋白(LDL-C)受体的配基在脂蛋白的代谢中起着重要的作用。Apo E基因多态性与脂质代谢异常有关，特别与血清LDL-C水平关系密切。Apo E表型对绝经后妇女LDL-C水平影响与绝经前妇女以及男性比较差异有显著性，Apo Eε2等位基因表现低血浆LDL-C水平，Apo Eε4等位基因表现高血浆LDL-C水平 [3] 。绝经妇女的Apo E基因型不同，血浆LDL-C水平不一样。本研究结果表明，在绝经妇女当中，Apo Eε4等位基因组LDL-C显著升高，而且组间有差异性，经两两比较，Apo Eε4组与ε2组二者之间差异有显著性(P<0.05)，TG在Apo Eε4等位基因组升高，但与Apo Eε2、ε3等位基因组比较差异无显著性，HDL-C组间比较差异无显著性。绝经妇女中血脂水平随Apo E表型不同而变化，这表明绝经后妇女中Apo E表型不同，与肝脏LDL受体和LDL受体相关蛋白(LRP)亲和力不同，因此必然影响脂代谢速率，产生机体血脂水平差异。Apo Eε2等位基因的绝经妇女无论是杂合子还是纯合子，可以显著促进LDL分解代谢，降低LDL-C和ApoB的水平，而Apo Eε3、ε4等位基因的妇女因雌激素减少后LDL-R作用下调，而无法弥补。因此绝经后妇女之间因Apo E基因的不同可以表现出LDL-C水平的显著差异。
, 百拇医药
血浆Lp(a)的水平与动脉粥样硬化密切相关，绝经期后妇女中Lp(a)水平升高，但血浆Lp(a)的水平与Apo E表 型的相关性还不太清楚，Deknijff [4] 研究观察了303例个体发现Apo E基因型对Lp(a)的水平有影响，而大多数研究报道Lp(a)的血浆水平与Apo E表型无直接相关关系 [3，5] 。本研究观察了103例绝经后妇女，在这103名妇女中Apo E各个表型之间Lp(a)的水平差异无显著性，这亦表明Lp(a)的血浆水平不受Apo E表型的直接影响。
本研究结果表明，绝经妇女的LDL-C水平与Apo E基因多态性密切相关。而且妇女冠心病发病率在绝经后升高，但并非所有的妇女都发病，因此有必要研究绝经期妇女Apo E基因多态性与冠心病的关系。
参考文献
1 Frikke-Schmidt R，Nordestgaard BG.Agerholm-Larsen B.Context-dependent andinvariant association between lipids，lipoprotein，and apolipoproteins and apolipoprotein E，Journal of Lipid Research，2000，41:1812-1822.
, 百拇医药
2 鄢盛恺，周新，哈黛文.聚合酶链反应限制性片段长度多态性检测载脂蛋白E基因多态性.中华医学检验杂志，1997，20(1):28-31.
3 Schaefer EJ，Lamon-Fava S，Ordovas JM，et al.Effects of gender and menopausal status on the association of apolipoprotein E phenotype with plasma lipoprotein levels.results form the framingham offspring study.Arterioscler Thromb，1994，14:1105-1113.
4 De knijff P，Kaptein A，Schulte H，et al.Apolipoprotein E polymorphism affects plasma leves of lipoproteins(a).Atherosclerosis，1991，90:169-174.
5 Ritter R W，Gewitsch W O，Richter H C，et al.Apolipoproteins E polyˉmorphism has no independent effect on plasma levels of lipoprotein.Atherosclerosis，1997，131:243-248.
(编辑罗 彬)
作者单位:430050武汉市汉阳铁路中心医院, 百拇医药(张加芳)
关键词 绝经妇女 Apo E基因多态性 血脂水平
【文献标识码】 A 【文章编号】1609-6614(2003)19-1767-02
, http://www.100md.com
A prospective study on the serum lipids in different apolipoprotein
E allele postmenopausal women
Zhang Jiafang，Yang Jiuling，Xie Bin，et al.
Hanyang Railway Central Hospital of Wuhan Municipal，430050.
【Abstract】 Objective To detect the relationship between the postmenopausal women’s plasma lipoprotein level and the apolipoprotein gene E polymorphism.Methods Apo E gene was analyzed by a combination of polymersa chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP)and plasma lipoprotein level was inspected in104postmenopausal women.Results The apolipoprotein E gene polymorphism has relationship with the postˉmenopausal women’s plasma low-density lipoprotein(LDL-C).ApoEε 2 allele postmenopausal women have low plasˉma LDL-C level(3.22±1.10mmol/L)and ApoEε 4 allele postmenopausal women have high plasmaLDL-C level(4.03±0.63mmol/L).There is significant difference between the twoalleles(P<0.05).Conclusion The postˉmenopausal women’s LDL-C level has a near relationship with the the apolipoprotein E gene polymorphism.ε 2 allele postmenopausal women have low plasma LDL-C level.ε 4 allele postmenopausal women have high plasma LDL-C level.The Lp(a)plasma lipoprotein level wouldn’t be effected by the apolipoprotein gene polymorphism.
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Key words postmenopausal women apolipoprotein E gene polymorphism plasma lipoprotein level
研究表明，载脂蛋白E(Apo E)等位基因对血浆中脂质含量有重要的作用。Frikke-Schmidt [1] 报道，血浆总胆固醇的变异中在女性大约5%～10%与Apo E基因多态性相关。而男性中则仅有2%～6%与Apo E基因多态性相关。因此我们应用PCR-RFLP的技术，分析了等位基因频率在绝经妇女中的分布。探讨绝经妇女Apo E基因多态性与血脂之间的相关关系。
1 对象与方法
1.1 对象 选择本院门诊和健康体检的绝经2年以上的妇女104名，均排除慢性肝病，糖尿病以及内分泌病史。
1.2 实验室检测 禁食12h以上，空腹取不抗凝静脉血4ml，放置后分离血清，置于-40℃冻存集中检测，另取静脉血2ml，置于EDTA管内，分离白细胞，检测Apo E表型。各项测定均由专人严格按规定方法操作。质控对照样品每次实验均进行，以保证准确和生化实验的精确。
, 百拇医药
胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)采用酶法测定，由上海长征医学科学有限公司提供试剂，用芬兰产KONE.SUPRA全自动生化 分析仪测定。LP(a)测定采用免疫比浊法。
Apo E基因型分析，用美国PE480扩增仪，采用PCR-RFLP技术从基因水平检测Apo E基因多态性 [2] 。
1.3 数据分析 Apo E基因频率的平衡估价检测用如下方法计算，如Apo Eε4(频率)=Apo Eε4/ε4+1/2(Apo Eε2/ε4+Apo Eε3/ε4)。数据均以X±s表示，应用ANOVA模型不同等位基因组内血脂变化，评价血脂与基因型相互关系。
2 结果
2.1 104名绝经妇女Apo E表型和基因频率 见表1。
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表1 Apo E的表型分布和等位基因频率
104名绝经后妇女基因分型为3种等位基因和6种基因型。根据Apo E基因是共显性复等位基因，按照Hardy-Weinberg平衡定律计算复等位基因频率。1名ε2/4排除外，根据等位基因将103名绝经后妇女分为Apo Eε2(ε2/2ε2/3n=11)，Apo Eε3(ε3/3n=77)，Apo Eε4(ε3/4ε4/4n=15)。
2.2 绝经妇女不同等位基因的血脂水平比较 见表2。
表2 不同等位基因的血脂水平 (X±s)
注:组间比较ε2与ε4LDL-C差异有显著性， ˇ P<0.05 绝经妇女Apo Eε2、ε3、ε4等位基因之间仅表现在LDL-C有组间差异，经组与组之间两两比较，仅表现在ε2与ε4组之间LDL-C差异有显著性(P<0.05)，TG、TC、HDL-C以及LP(a)各组间比较差异均无显著性。
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3 讨论
Apo E作为低密度脂蛋白(LDL-C)受体的配基在脂蛋白的代谢中起着重要的作用。Apo E基因多态性与脂质代谢异常有关，特别与血清LDL-C水平关系密切。Apo E表型对绝经后妇女LDL-C水平影响与绝经前妇女以及男性比较差异有显著性，Apo Eε2等位基因表现低血浆LDL-C水平，Apo Eε4等位基因表现高血浆LDL-C水平 [3] 。绝经妇女的Apo E基因型不同，血浆LDL-C水平不一样。本研究结果表明，在绝经妇女当中，Apo Eε4等位基因组LDL-C显著升高，而且组间有差异性，经两两比较，Apo Eε4组与ε2组二者之间差异有显著性(P<0.05)，TG在Apo Eε4等位基因组升高，但与Apo Eε2、ε3等位基因组比较差异无显著性，HDL-C组间比较差异无显著性。绝经妇女中血脂水平随Apo E表型不同而变化，这表明绝经后妇女中Apo E表型不同，与肝脏LDL受体和LDL受体相关蛋白(LRP)亲和力不同，因此必然影响脂代谢速率，产生机体血脂水平差异。Apo Eε2等位基因的绝经妇女无论是杂合子还是纯合子，可以显著促进LDL分解代谢，降低LDL-C和ApoB的水平，而Apo Eε3、ε4等位基因的妇女因雌激素减少后LDL-R作用下调，而无法弥补。因此绝经后妇女之间因Apo E基因的不同可以表现出LDL-C水平的显著差异。
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血浆Lp(a)的水平与动脉粥样硬化密切相关，绝经期后妇女中Lp(a)水平升高，但血浆Lp(a)的水平与Apo E表 型的相关性还不太清楚，Deknijff [4] 研究观察了303例个体发现Apo E基因型对Lp(a)的水平有影响，而大多数研究报道Lp(a)的血浆水平与Apo E表型无直接相关关系 [3，5] 。本研究观察了103例绝经后妇女，在这103名妇女中Apo E各个表型之间Lp(a)的水平差异无显著性，这亦表明Lp(a)的血浆水平不受Apo E表型的直接影响。
本研究结果表明，绝经妇女的LDL-C水平与Apo E基因多态性密切相关。而且妇女冠心病发病率在绝经后升高，但并非所有的妇女都发病，因此有必要研究绝经期妇女Apo E基因多态性与冠心病的关系。
参考文献
1 Frikke-Schmidt R，Nordestgaard BG.Agerholm-Larsen B.Context-dependent andinvariant association between lipids，lipoprotein，and apolipoproteins and apolipoprotein E，Journal of Lipid Research，2000，41:1812-1822.
, 百拇医药
2 鄢盛恺，周新，哈黛文.聚合酶链反应限制性片段长度多态性检测载脂蛋白E基因多态性.中华医学检验杂志，1997，20(1):28-31.
3 Schaefer EJ，Lamon-Fava S，Ordovas JM，et al.Effects of gender and menopausal status on the association of apolipoprotein E phenotype with plasma lipoprotein levels.results form the framingham offspring study.Arterioscler Thromb，1994，14:1105-1113.
4 De knijff P，Kaptein A，Schulte H，et al.Apolipoprotein E polymorphism affects plasma leves of lipoproteins(a).Atherosclerosis，1991，90:169-174.
5 Ritter R W，Gewitsch W O，Richter H C，et al.Apolipoproteins E polyˉmorphism has no independent effect on plasma levels of lipoprotein.Atherosclerosis，1997，131:243-248.
(编辑罗 彬)
作者单位:430050武汉市汉阳铁路中心医院, 百拇医药(张加芳)