铜离子对肛门内括约肌组织反应的实验研究
【摘要】 目的 为了验证铜离子对内括约肌无破坏作用，我们在白兔的括约肌上进行实验。方法 白兔50只，分5组，随机分组。在齿状线下0.3cm处，将特制的铜针刺入括约肌内，按人用治疗方式处理。局部治疗后不做任何处理，定时观察进食、排便情况。结果 肉眼观察:1周局部水肿明显，3周明显减轻，4周基本消失，6周完全消失，8周完全正常。病理观察:1周炎症浸润，以浆细胞和淋巴细胞为主。3周炎症减轻，淋巴细胞浸润为主，4～6周仍有部分淋巴细胞，8周完全正常。1～8周均未见括约肌炎症反应。结论 3周内浆细胞及淋巴细胞浸润，浆细胞是B细胞，是产生和释放抗体的细胞，并参与机体抵抗细菌感染的体液防御系统。它在一般疏松结缔组织中不多见，在构成胃肠道固有膜的结缔组织中多见，但在一般非特异性急性炎症反应中不多见，在慢性炎症反应中才出现。浆细胞的存在表明是一种自家免疫反应。铜离子可能作为一种特殊的抗原，可以激活B细胞，产生抗体，增强抵抗力，免受细菌感染。所以铜离子对括约肌无破坏作用。
关键词 肛门内括约肌 铜离子 实验研究
, 百拇医药
【文献标识码】 A 【文章编号】1609-6614(2003)19-1754-02
An experimental study on the effect of copper ions on sphineter ani
ChangBaozhi，Huang Tingting，Na Jia，et al.
First Hospital of Beijing University，Beijing100034.
【Abstract】 Objective We try this exprimentation on rabbits for proving whether Cu 2+ has destroying effect on internal sphincter ani.Methods Fifty rabbits were randomized to five groups.Firstly，the special copper needle was pierced into the internal sphincter under the dentate line with a distance of0.3cm，and secondly the experiment was treated by human method.Only with local therapy，we observed the eating and defecating on time.Results Obˉserved by naked eye:There was visible local edema in the first week.The edema alleviated in the third week obviousˉly，and mostly disappeared in the fourth week.In the sixth week theedema disappeared completely and in the eighth week there was no any abnormity.Pathology:in the first week，we observed inflammatory infiltration mainly including with plasma cell and lymphocytic cell.After three weeks the inflammation wasalleviated mainly with lymphocytic cell.In the4～6week there was still lymphocytic cell in part tissue.In the eighth week there was completely normal apperˉance.The inflammation of sphincter could not be observed among the8weeks.Conclusion Among the three weeks，we observed inflammatory infiltration mainly including with plasma cell and lymphocytic cell.plasma cell is B cell，which can produce and release antibody to take part in the body fluid defensive system for resistingbacterial infection.Plasma cell is often seen in connective tissue of gastrointestinal inherent membrane，but not in the normal loose conˉnective tissue.Plasma cells is often seen in chronic inflammation，but not in acute non-specific inflammation.The exˉisting of plasma cell proves that the inflammation is autoimmune reaction.Cu 2+ may be a special antigen to activate B cell and then produce antibody，which can improve resistance to avoid bacterial infection.So we can draw the concluˉsion that Cu 2+ has no destroying effect on internal sphincter.
, 百拇医药
Key words internal sphincter ani copper inos experimental study
痔是常见多发病，发病率很高，90%左右为内痔。内痔是以出血和脱出为主。长期出血和脱出影响工作和生活质量。痔的治疗方法很多，但都有不同程度的缺点和不足。北京计然电子科技有限公司研制成功的铜离子电化学治疗仪用于临床以后，在治疗内痔方面收到了很好的疗效。在操作过程中，有的医生在进针部位方面掌握不准难以避免地将铜针刺入内括约肌及铜离子扩散到括约肌内，是否会对括约肌造成损伤，这是我们所关心的问题。为了进一步证实铜离子对括约肌无破坏作用，我们在白兔的括约肌上做实验，通过肉眼及病理进行观察铜离子对兔括约肌组织是否产生破坏性的组织反应，以验证铜离子用于人体组织的安全性。
1 实验材料与方法
1.1 材料 选用白兔50只，均为雄性。分为5个组，每个组10只。体重在3～4kg之间，随机分组。
, http://www.100md.com
仪器设备:用含铜量99.9%的纯铜制成直径0.7mm的针型电极(简称铜针)，铜针分正负极，在治疗过程中正负极自动互换，它的作用范围是以刺入部位为中心周围10～15mm 3 ，铜针两极间距一般为7～10mm。使用CHAT-5302/MP铜离子电化学治疗仪(简称治疗仪)，选择治疗仪设定其治疗值(9V/90″、11.5V/60″、-11.5V/70″、6V/30″、-6V/30″)进行治疗。
1.2 实验方法 兔取仰卧位，将四肢固定在手术平台上，在兔耳静脉内用戊巴比妥按公斤体重麻醉。麻醉后，在肛门内滴入适量的石蜡油，用特制的兔用肛门镜扩开肛门，辨认齿状线，观察直肠粘膜、肛管表面的颜色、光泽及有无异常结节和肿物。检查无疑以后方被入选。在齿状线下0.3cm左右的部位，将特制的治疗用铜针呈45°角刺入括约肌内。选择45°角的目的是进针容易、作用组织的面积较大、铜离子扩散面积较广，损伤面较广以利于观察。进针时阻力较大，稍用力即可将铜针刺入括约肌内。确定铜针已刺入括约肌内以后，用铜离子治疗仪进行处理，处理方式与给人治疗方式相同，电流、电压、功率和用于临床治疗的条件完全相同。电压6-9-11.5V，电流是2-8-13mA。在处理过程中观察各治疗段的变化。处理后肉眼可见进针处表面轻度发白，但无出血及坏死现象。处理完毕，肛管局部不放置任何药物及止血剂，而后任大便通过，不做处理，定期观察局部组织的变化。
, 百拇医药
1.3 处理后观察 处理复苏后常规饲养，观察进食及排便情况。第一组处理后观察1周，第二组观察3周，第三组观察4周，第四组观察6周，第五组观察8周。经过不同时间的观察，兔进食及排便正常，大便无血迹，无变形，治疗部位无坏死现象。按时间分组情况进行解剖，做病理检查。
2 实验结果
经腹会阴切除直肠末端至肛门做标本，纵行切开直肠及肛管，进到进针部位，做好标记，用福尔马林固定。
2.1 肉眼观察 (1)第一组:(1周)肛管进针处颜色正常，进针部位清晰可见，有轻度水肿。(2)第二组:(3周)肛管进针处颜色正常，进针部位可见，水肿明显减轻。(3)第三组:(4周)肛管进针处颜色正常，进针部位不明显，水肿基本消退。(4)第四组:(6周)肛管进针处颜色正常，进针部位不明显，水肿完全消退。(5)第五组:(8周)肛管进针处颜色正常，进针部位水肿完全消退。
, 百拇医药
2.2 组织学检查 (1)1周:组织表面基本正常，10只均发现直肠末端粘膜下有炎细胞浸润，主要是浆细胞和淋巴细胞，小血管增生及扩张，组织疏松水肿，括约肌正常。(2)3周:组织表面基本正常，直肠末端粘膜下轻度水肿及炎症，粘膜下肌间灶状小血管及淋巴管增生，括约肌正常。(3)4周:组织表面基本正常，直肠末端粘膜下轻度水肿和慢性炎症，粘膜下仍有部分淋巴细胞及多核巨细胞浸润，括约肌正常。(4)6周:组织表面基本正常，直肠末端粘膜下轻度水肿和慢性炎症，括约肌正常。(5)8周:组织表面基本正常，各层组织学表现正常，括约肌正常。
3 讨论
通过对50只兔的动物实验，铜针刺入部位各层组织间 有轻度炎性反应，8周即完全消退。括约肌组织内仅有的极轻度的炎性反应，4周即完全消退恢复正常。实验结果表明铜离子对兔括约肌组织无明显影响，没有造成任何损伤，更没有引起坏死。值得提出的是治疗后直肠末端粘膜下出现的细胞反应是以浆细胞和淋巴细胞为主。
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浆细胞的前身是淋巴细胞，它来源于抗原刺激的淋巴细胞发育成的大淋巴细胞。在正常的结缔组织中，淋巴细胞含量较少，但在异种蛋白的初次侵入时发生免疫反应或在慢性炎症疾病中，淋巴细胞数量则显著增多。这说明它们在抵抗疾病方面具有十分重要的功能。浆细胞是产生抗体和释放抗体的主要细胞，它是经抗原刺激而致活的B细胞，B细胞系分化最终的效应细胞 [1] ，能分泌免疫球蛋白，抗体就是血液中的球蛋白，它们是参与机体抵抗细菌感染的体液防御系统，它们在血液中具有十分重要的作用。这些细胞不是自己从血液中游出来的，而是从结缔组织中的淋巴细胞分化而来的，它们在典型的疏松结缔组织中并不普遍存在，但是构成胃肠道固有膜的多细胞性结缔组织中含量相当多 [2] ，但它们在一般非特异性急性炎症反应中并不出现，只是在慢性炎症中和单核/巨噬细胞、成纤维细胞、淋巴细胞同时作为炎性细胞而存在。浆细胞是一种能产生特异性抗体的免疫细胞，本身的存在表明是一种自家免疫反应 [3] 。近几十年以来，陆续有人提出浆细胞参与抗体形成的证据，如大强度免疫接种的正常动物，几乎所有器官的结缔组织中浆细胞的数量均明显增多，这些事实已强力支持浆细胞是产生抗体的源泉 [2] 。本实验研究在处理后第一周即出现浆细胞和淋巴细胞浸润，是非常值得注意的现象。这一现象的出现，是否可以考虑铜离子是作为一种特殊的抗原而存在，激活了局部组织的B细胞而产生的。铜离子如果作为一种特殊抗原，能够激活局部组织中的免疫细胞，并随即产生抗体，显然对机体是有益的。它类似于进行了免疫接种，既进行了治疗又增强了抵抗力，产生了抗体。这样的结果是否可以说明铜离子可以增强肠道的抗病能力，使之免受细菌的感染，所以铜离子进入括约肌内不会产生化脓性炎症，更不会引起肌肉坏死。在临床上做治疗时如将铜针刺入括约肌内，无需采取任何措施，不会给病人造成不良后果。这一点值得我们进一步深入研究。
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参考文献
1 Lin Ki，Tunyaplin C，Calame K.Transcriptional regulator Notohara casˉcades controlling B Cell differentiation.Immunol Rev，2003，194:19-28.
2 W.布卢姆，DW福西特主编，江启源等译.组织学，北京:科学出版社，1984，177-179.
3 Notohara K，Burgard LJ，Yadav D，et al.Idiopathic chronic pancreatitis weith periductal Lymphoplasmacytic infiltration:clinicopathologic feaˉturew of35cases.Am J Surg Pathol，2003，27:1119-1127.
(收稿日期:2003-09-20)
作者单位:100034北京大学第一医院
北京大学基础医学院药理教研组
北京计然电子科技有限公司
(编辑晓 勇), http://www.100md.com(常宝志 黄筵庭 那加 林志彬 胡章顺 李卫东 满)
关键词 肛门内括约肌 铜离子 实验研究
, 百拇医药
【文献标识码】 A 【文章编号】1609-6614(2003)19-1754-02
An experimental study on the effect of copper ions on sphineter ani
ChangBaozhi，Huang Tingting，Na Jia，et al.
First Hospital of Beijing University，Beijing100034.
【Abstract】 Objective We try this exprimentation on rabbits for proving whether Cu 2+ has destroying effect on internal sphincter ani.Methods Fifty rabbits were randomized to five groups.Firstly，the special copper needle was pierced into the internal sphincter under the dentate line with a distance of0.3cm，and secondly the experiment was treated by human method.Only with local therapy，we observed the eating and defecating on time.Results Obˉserved by naked eye:There was visible local edema in the first week.The edema alleviated in the third week obviousˉly，and mostly disappeared in the fourth week.In the sixth week theedema disappeared completely and in the eighth week there was no any abnormity.Pathology:in the first week，we observed inflammatory infiltration mainly including with plasma cell and lymphocytic cell.After three weeks the inflammation wasalleviated mainly with lymphocytic cell.In the4～6week there was still lymphocytic cell in part tissue.In the eighth week there was completely normal apperˉance.The inflammation of sphincter could not be observed among the8weeks.Conclusion Among the three weeks，we observed inflammatory infiltration mainly including with plasma cell and lymphocytic cell.plasma cell is B cell，which can produce and release antibody to take part in the body fluid defensive system for resistingbacterial infection.Plasma cell is often seen in connective tissue of gastrointestinal inherent membrane，but not in the normal loose conˉnective tissue.Plasma cells is often seen in chronic inflammation，but not in acute non-specific inflammation.The exˉisting of plasma cell proves that the inflammation is autoimmune reaction.Cu 2+ may be a special antigen to activate B cell and then produce antibody，which can improve resistance to avoid bacterial infection.So we can draw the concluˉsion that Cu 2+ has no destroying effect on internal sphincter.
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Key words internal sphincter ani copper inos experimental study
痔是常见多发病，发病率很高，90%左右为内痔。内痔是以出血和脱出为主。长期出血和脱出影响工作和生活质量。痔的治疗方法很多，但都有不同程度的缺点和不足。北京计然电子科技有限公司研制成功的铜离子电化学治疗仪用于临床以后，在治疗内痔方面收到了很好的疗效。在操作过程中，有的医生在进针部位方面掌握不准难以避免地将铜针刺入内括约肌及铜离子扩散到括约肌内，是否会对括约肌造成损伤，这是我们所关心的问题。为了进一步证实铜离子对括约肌无破坏作用，我们在白兔的括约肌上做实验，通过肉眼及病理进行观察铜离子对兔括约肌组织是否产生破坏性的组织反应，以验证铜离子用于人体组织的安全性。
1 实验材料与方法
1.1 材料 选用白兔50只，均为雄性。分为5个组，每个组10只。体重在3～4kg之间，随机分组。
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仪器设备:用含铜量99.9%的纯铜制成直径0.7mm的针型电极(简称铜针)，铜针分正负极，在治疗过程中正负极自动互换，它的作用范围是以刺入部位为中心周围10～15mm 3 ，铜针两极间距一般为7～10mm。使用CHAT-5302/MP铜离子电化学治疗仪(简称治疗仪)，选择治疗仪设定其治疗值(9V/90″、11.5V/60″、-11.5V/70″、6V/30″、-6V/30″)进行治疗。
1.2 实验方法 兔取仰卧位，将四肢固定在手术平台上，在兔耳静脉内用戊巴比妥按公斤体重麻醉。麻醉后，在肛门内滴入适量的石蜡油，用特制的兔用肛门镜扩开肛门，辨认齿状线，观察直肠粘膜、肛管表面的颜色、光泽及有无异常结节和肿物。检查无疑以后方被入选。在齿状线下0.3cm左右的部位，将特制的治疗用铜针呈45°角刺入括约肌内。选择45°角的目的是进针容易、作用组织的面积较大、铜离子扩散面积较广，损伤面较广以利于观察。进针时阻力较大，稍用力即可将铜针刺入括约肌内。确定铜针已刺入括约肌内以后，用铜离子治疗仪进行处理，处理方式与给人治疗方式相同，电流、电压、功率和用于临床治疗的条件完全相同。电压6-9-11.5V，电流是2-8-13mA。在处理过程中观察各治疗段的变化。处理后肉眼可见进针处表面轻度发白，但无出血及坏死现象。处理完毕，肛管局部不放置任何药物及止血剂，而后任大便通过，不做处理，定期观察局部组织的变化。
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1.3 处理后观察 处理复苏后常规饲养，观察进食及排便情况。第一组处理后观察1周，第二组观察3周，第三组观察4周，第四组观察6周，第五组观察8周。经过不同时间的观察，兔进食及排便正常，大便无血迹，无变形，治疗部位无坏死现象。按时间分组情况进行解剖，做病理检查。
2 实验结果
经腹会阴切除直肠末端至肛门做标本，纵行切开直肠及肛管，进到进针部位，做好标记，用福尔马林固定。
2.1 肉眼观察 (1)第一组:(1周)肛管进针处颜色正常，进针部位清晰可见，有轻度水肿。(2)第二组:(3周)肛管进针处颜色正常，进针部位可见，水肿明显减轻。(3)第三组:(4周)肛管进针处颜色正常，进针部位不明显，水肿基本消退。(4)第四组:(6周)肛管进针处颜色正常，进针部位不明显，水肿完全消退。(5)第五组:(8周)肛管进针处颜色正常，进针部位水肿完全消退。
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2.2 组织学检查 (1)1周:组织表面基本正常，10只均发现直肠末端粘膜下有炎细胞浸润，主要是浆细胞和淋巴细胞，小血管增生及扩张，组织疏松水肿，括约肌正常。(2)3周:组织表面基本正常，直肠末端粘膜下轻度水肿及炎症，粘膜下肌间灶状小血管及淋巴管增生，括约肌正常。(3)4周:组织表面基本正常，直肠末端粘膜下轻度水肿和慢性炎症，粘膜下仍有部分淋巴细胞及多核巨细胞浸润，括约肌正常。(4)6周:组织表面基本正常，直肠末端粘膜下轻度水肿和慢性炎症，括约肌正常。(5)8周:组织表面基本正常，各层组织学表现正常，括约肌正常。
3 讨论
通过对50只兔的动物实验，铜针刺入部位各层组织间 有轻度炎性反应，8周即完全消退。括约肌组织内仅有的极轻度的炎性反应，4周即完全消退恢复正常。实验结果表明铜离子对兔括约肌组织无明显影响，没有造成任何损伤，更没有引起坏死。值得提出的是治疗后直肠末端粘膜下出现的细胞反应是以浆细胞和淋巴细胞为主。
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浆细胞的前身是淋巴细胞，它来源于抗原刺激的淋巴细胞发育成的大淋巴细胞。在正常的结缔组织中，淋巴细胞含量较少，但在异种蛋白的初次侵入时发生免疫反应或在慢性炎症疾病中，淋巴细胞数量则显著增多。这说明它们在抵抗疾病方面具有十分重要的功能。浆细胞是产生抗体和释放抗体的主要细胞，它是经抗原刺激而致活的B细胞，B细胞系分化最终的效应细胞 [1] ，能分泌免疫球蛋白，抗体就是血液中的球蛋白，它们是参与机体抵抗细菌感染的体液防御系统，它们在血液中具有十分重要的作用。这些细胞不是自己从血液中游出来的，而是从结缔组织中的淋巴细胞分化而来的，它们在典型的疏松结缔组织中并不普遍存在，但是构成胃肠道固有膜的多细胞性结缔组织中含量相当多 [2] ，但它们在一般非特异性急性炎症反应中并不出现，只是在慢性炎症中和单核/巨噬细胞、成纤维细胞、淋巴细胞同时作为炎性细胞而存在。浆细胞是一种能产生特异性抗体的免疫细胞，本身的存在表明是一种自家免疫反应 [3] 。近几十年以来，陆续有人提出浆细胞参与抗体形成的证据，如大强度免疫接种的正常动物，几乎所有器官的结缔组织中浆细胞的数量均明显增多，这些事实已强力支持浆细胞是产生抗体的源泉 [2] 。本实验研究在处理后第一周即出现浆细胞和淋巴细胞浸润，是非常值得注意的现象。这一现象的出现，是否可以考虑铜离子是作为一种特殊的抗原而存在，激活了局部组织的B细胞而产生的。铜离子如果作为一种特殊抗原，能够激活局部组织中的免疫细胞，并随即产生抗体，显然对机体是有益的。它类似于进行了免疫接种，既进行了治疗又增强了抵抗力，产生了抗体。这样的结果是否可以说明铜离子可以增强肠道的抗病能力，使之免受细菌的感染，所以铜离子进入括约肌内不会产生化脓性炎症，更不会引起肌肉坏死。在临床上做治疗时如将铜针刺入括约肌内，无需采取任何措施，不会给病人造成不良后果。这一点值得我们进一步深入研究。
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参考文献
1 Lin Ki，Tunyaplin C，Calame K.Transcriptional regulator Notohara casˉcades controlling B Cell differentiation.Immunol Rev，2003，194:19-28.
2 W.布卢姆，DW福西特主编，江启源等译.组织学，北京:科学出版社，1984，177-179.
3 Notohara K，Burgard LJ，Yadav D，et al.Idiopathic chronic pancreatitis weith periductal Lymphoplasmacytic infiltration:clinicopathologic feaˉturew of35cases.Am J Surg Pathol，2003，27:1119-1127.
(收稿日期:2003-09-20)
作者单位:100034北京大学第一医院
北京大学基础医学院药理教研组
北京计然电子科技有限公司
(编辑晓 勇), http://www.100md.com(常宝志 黄筵庭 那加 林志彬 胡章顺 李卫东 满)