胎盘巨细胞病毒感染在宫内传播中的意义探讨
【摘要】 目的 探讨胎盘人巨细胞病毒(HCMV)感染在宫内传播中的意义。方法 HCMV感染孕妇分娩时留胎盘对HCMV、IEA(即刻早期抗原)和EA(早期抗原)作免疫组织化学染色，并与母儿感染情况作对比。结果 HCMV感染孕妇胎盘感染率66.7%，显著高于胎儿感染率40.0%，其中胎儿感染组胎盘阳性率91.67%，显著高于胎儿未感染组胎盘阳性率50.00%，P<0.05。结论 HCMV可通过感染胎盘传播给胎儿。胎盘有可能在一定程度上对胎儿有保护作用。
关键词 巨细胞病毒感染 胎盘 免疫组织化学
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)01-0001-02
Immunocytochemical study on human placenta with cytomegalovirus infection
, http://www.100md.com Zhang Rui，Chen Zhiliao，Zhang Jianping，et al.
Department of Obstetric and Gynecology;Department of Pathology;
The Second Affiliated Hospital，Sun Yat-sen University，Guangzhou510120.
【Abstract】 Objective To study the role of placenta with human cytomegalovirus(HCMV)infection in the intrauterine transmission of HCMV.Methods Immunocytochemistry assay for HCMV immediate early antigen were used to characterize placental involvement in30mothers with HCMV infection.Results The infection rate ofplacenta of infected mothers was66.7%，significantly higher than that of40.0%oftheir fetuses.The positive rate of HCMV antigens in placentas of the infected fetuses was significantly higher than that of uninfected ones(91.67%vs.50.00%)，P<0.05.Conclusion HCMV can infect placenta and be transmitted to fetus through placenta.Placenta may protect fetus from HCMV infection in some degree.
, 百拇医药
Key words cytomegalovirus infection placental immunocytochemistry
人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus，HCMV)是最常见的致畸病毒之一。孕妇如果有活动性感染时，病毒可在宫内传播给胎儿。一般认为HCMV宫内感染主要是在母体病毒血症时通过胎盘发生。我们对HCMV感染孕妇分娩后的胎盘组织进行免疫组织化学分析，并与孕妇及胎儿的感染情况进行对比观察，以探讨HCMV感染宫内传播的机制。
1 材料和方法
1.1 标本来源 在我院分娩的部分HCMV感染孕妇30例，包括孕期肘静脉血检测血清HCMV-IgM抗体阳性10例，血HCMV DNA阳性12例，血清HCMV-IgM抗体和血HCMV DNA均阳性8例，作为实验组;非HCMV感染孕妇(血清HCMV-IgM抗体和血HCMV DNA均阴性)5例作为对照组。分娩时留取胎儿脐静脉血2ml，分别检测血清HCMV-IgM抗体和血HCMV DNA。留取胎盘中央由母面至子面组织，面积约2cm×2cm，生理盐水冲洗后置于10%甲醛溶液中固定24h，常规石蜡包埋。
, 百拇医药
1.2 方法 采各标本时严格遵守无菌操作原则。血清HCMV-IgM抗体采用捕获酶联免疫吸附试验检测，血HCMV DNA采用聚合酶链反应检测 [1] 。小鼠抗HCMV单克隆抗体(第一抗体)及链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。第一抗体包括针对72-kd即刻早期抗原(IEA)和针对43-kd早期抗原(EA)的两种抗体，克隆号为DDG9和CCH2。每例胎盘组织切片2张，厚4μm，包括绒毛膜板至蜕膜板的胎盘全厚。作HCMV免疫组化染色，由专人盲法阅片。胎盘HCMV免疫组化染色按SP法常规操作:石蜡切片脱蜡和水化，加50μl过氧化酶室温下10min。胰蛋白酶在37℃消化10min。加50μl非免疫性动物血清室温下10min。加50μl第一抗体，4℃过夜。加50μl生物素标记的第二抗体室温下10min。加链亲和素-过氧化物酶溶液室温下10min。加100μl DAB溶液，显微镜下观察3～10min。苏木素复染，中性树脂封固。用已知阳性的组织(本院1984年分娩的1例因巨细胞包涵体病死亡的新生儿肾脏，光镜下可见CMV核内包涵体)作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。
, 百拇医药
1.3 结果判断 脐血HCMV-IgM抗体或HCMV DNA阳性为胎儿宫内感染。胎盘HCMV免疫组化染色:未感染HCMV的组织在光镜下呈浅黄色，着色均匀，胞浆内或核内有深棕黄色颗粒者为阳性，即HCMV感染。
1.4 统计学处理 实验数据采用SPSS10.0for windows进行X 2 检验。
2 结果
本组30例HCMV感染孕妇的胎儿感染12例，占40.0%，1例孕27周死胎引产，其余为足月活产(包括1例先天性心脏病室间隔缺损、1例小头畸形、1例唇裂、1例新生儿CMV肝炎)。胎盘感染20例，占66.7%。HCMV-IgM阳性孕妇胎盘感染率为60.0%(6/10)，胎儿感染率为40.0%(4/10);HCMV DNA阳性孕妇胎盘感染率为58.3%(7/12)，胎儿感染率为33.3%(4/12);HCMV-IgM和HCMV DNA均阳性孕妇胎盘感染率为87.5%(7/8)，胎儿感染率为50.0%(4/8)。HCMV-IgM阳性、HCMV DNA阳性、HCMV-IgM和HCMV DNA均阳性的3组孕妇之间，胎盘感染率和胎儿感染率差异无显著性(P>0.05)。HCMV感染孕妇胎盘感染率66.7(20/30)，显著高于胎儿感染率40.0%(12/30)，胎儿感染组胎盘阳性率91.67%(11/12)，显著高于胎儿未感染 组胎盘阳性率50.00%(9/18)，差异有显著性(P<0.05)。结果见表1。表1 孕妇及胎儿HCMV感染与胎盘HCMV感染的关系
, 百拇医药
3 讨论
胎盘是母胎之间物质交换的场所，也是宫内感染的主要途径。胎儿HCMV感染主要来源于流经胎盘绒毛煎隙的母血。本组结果证实HCMV可感染胎盘，进而传播给胎儿。提示在母体病毒血症期至特异性抗体出现后均可发生CMV胎盘感染和宫内传播。Griffith等给孕豚鼠接种CMV，也发现胎盘感染始于母体病毒血症期，至母体病毒血症终止和特异性抗体出现时胎盘中仍可检出病毒，而胎儿感染则始于病毒在母体血循环被抗体代替后，而且仅发生于胎盘可检出病毒者，提出胎儿感染是基于胎盘病毒感染而并非由母血直接播散，而胎盘却可能作为病毒库传播给胎儿 [2] 。本组中有1例无症状孕妇和胎儿HCMV DNA检测均阳性，胎盘免疫组化检测阴性。这可能是因为免疫组化检测是利用针对HCMV即刻早期抗原(IEA)和早期抗原(EA)的单克隆抗体对感染细胞进行染色，隐性感染者病毒无复制，故无病毒蛋白表达，抗原染色阴性 [3] ，但提示潜伏感染也可能通过胎盘传播给胎儿。另一方面，孕妇感染并非全部传播给胎儿，我们以往的 研究发现HCMV宫内传播率约为17.2% [4] 。本组20例胎盘感染病例中，11例发现有胎儿感染，9例胎盘HCMV抗原阳性，但胎儿未受感染。文献也曾报道过一些动物和人胎盘有高病毒感染滴度却不发生胎儿感染，胎盘感染病变与胎儿感染之间存在时间差 [2，5] ，这提示胎盘也可能在一定程度上延迟和限制了病毒的宫内传播从而对胎儿起保护作用。
, 百拇医药
参考文献
1 张睿，刘新质.应用聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验检测孕妇和胎儿巨细胞病毒感染.中华妇产科杂志，1998，33(9):529.
2 Griffith BP，McCormick SR，Fong GY，et al.The placenta as a site of cyˉtomegalovirus infection in guinea pigs.J Virol，1985，55(2):402.
3 郑克立，刘东，谭耀驹.半套式荧光定量聚合酶链反应检测肾移植前后人巨细胞病毒感染状态.中山医科大学学报，1999，20(2):130.
4 张睿，刘新质.孕妇巨细胞病毒感染及其宫内传播的探讨.中国实用妇科与产科杂志，1999，15(3):166.
5 刘佩莉，赵充，庄依亮，等.人类巨细胞病毒先天性致畸机理的研究.中国优生优育，1991，2(3):114.
(收稿日期:2002-11-08)
作者单位:510120广州中山大学附属第二医院
(编辑梅 燕), 百拇医药
关键词 巨细胞病毒感染 胎盘 免疫组织化学
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)01-0001-02
Immunocytochemical study on human placenta with cytomegalovirus infection
, http://www.100md.com Zhang Rui，Chen Zhiliao，Zhang Jianping，et al.
Department of Obstetric and Gynecology;Department of Pathology;
The Second Affiliated Hospital，Sun Yat-sen University，Guangzhou510120.
【Abstract】 Objective To study the role of placenta with human cytomegalovirus(HCMV)infection in the intrauterine transmission of HCMV.Methods Immunocytochemistry assay for HCMV immediate early antigen were used to characterize placental involvement in30mothers with HCMV infection.Results The infection rate ofplacenta of infected mothers was66.7%，significantly higher than that of40.0%oftheir fetuses.The positive rate of HCMV antigens in placentas of the infected fetuses was significantly higher than that of uninfected ones(91.67%vs.50.00%)，P<0.05.Conclusion HCMV can infect placenta and be transmitted to fetus through placenta.Placenta may protect fetus from HCMV infection in some degree.
, 百拇医药
Key words cytomegalovirus infection placental immunocytochemistry
人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus，HCMV)是最常见的致畸病毒之一。孕妇如果有活动性感染时，病毒可在宫内传播给胎儿。一般认为HCMV宫内感染主要是在母体病毒血症时通过胎盘发生。我们对HCMV感染孕妇分娩后的胎盘组织进行免疫组织化学分析，并与孕妇及胎儿的感染情况进行对比观察，以探讨HCMV感染宫内传播的机制。
1 材料和方法
1.1 标本来源 在我院分娩的部分HCMV感染孕妇30例，包括孕期肘静脉血检测血清HCMV-IgM抗体阳性10例，血HCMV DNA阳性12例，血清HCMV-IgM抗体和血HCMV DNA均阳性8例，作为实验组;非HCMV感染孕妇(血清HCMV-IgM抗体和血HCMV DNA均阴性)5例作为对照组。分娩时留取胎儿脐静脉血2ml，分别检测血清HCMV-IgM抗体和血HCMV DNA。留取胎盘中央由母面至子面组织，面积约2cm×2cm，生理盐水冲洗后置于10%甲醛溶液中固定24h，常规石蜡包埋。
, 百拇医药
1.2 方法 采各标本时严格遵守无菌操作原则。血清HCMV-IgM抗体采用捕获酶联免疫吸附试验检测，血HCMV DNA采用聚合酶链反应检测 [1] 。小鼠抗HCMV单克隆抗体(第一抗体)及链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。第一抗体包括针对72-kd即刻早期抗原(IEA)和针对43-kd早期抗原(EA)的两种抗体，克隆号为DDG9和CCH2。每例胎盘组织切片2张，厚4μm，包括绒毛膜板至蜕膜板的胎盘全厚。作HCMV免疫组化染色，由专人盲法阅片。胎盘HCMV免疫组化染色按SP法常规操作:石蜡切片脱蜡和水化，加50μl过氧化酶室温下10min。胰蛋白酶在37℃消化10min。加50μl非免疫性动物血清室温下10min。加50μl第一抗体，4℃过夜。加50μl生物素标记的第二抗体室温下10min。加链亲和素-过氧化物酶溶液室温下10min。加100μl DAB溶液，显微镜下观察3～10min。苏木素复染，中性树脂封固。用已知阳性的组织(本院1984年分娩的1例因巨细胞包涵体病死亡的新生儿肾脏，光镜下可见CMV核内包涵体)作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。
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1.3 结果判断 脐血HCMV-IgM抗体或HCMV DNA阳性为胎儿宫内感染。胎盘HCMV免疫组化染色:未感染HCMV的组织在光镜下呈浅黄色，着色均匀，胞浆内或核内有深棕黄色颗粒者为阳性，即HCMV感染。
1.4 统计学处理 实验数据采用SPSS10.0for windows进行X 2 检验。
2 结果
本组30例HCMV感染孕妇的胎儿感染12例，占40.0%，1例孕27周死胎引产，其余为足月活产(包括1例先天性心脏病室间隔缺损、1例小头畸形、1例唇裂、1例新生儿CMV肝炎)。胎盘感染20例，占66.7%。HCMV-IgM阳性孕妇胎盘感染率为60.0%(6/10)，胎儿感染率为40.0%(4/10);HCMV DNA阳性孕妇胎盘感染率为58.3%(7/12)，胎儿感染率为33.3%(4/12);HCMV-IgM和HCMV DNA均阳性孕妇胎盘感染率为87.5%(7/8)，胎儿感染率为50.0%(4/8)。HCMV-IgM阳性、HCMV DNA阳性、HCMV-IgM和HCMV DNA均阳性的3组孕妇之间，胎盘感染率和胎儿感染率差异无显著性(P>0.05)。HCMV感染孕妇胎盘感染率66.7(20/30)，显著高于胎儿感染率40.0%(12/30)，胎儿感染组胎盘阳性率91.67%(11/12)，显著高于胎儿未感染 组胎盘阳性率50.00%(9/18)，差异有显著性(P<0.05)。结果见表1。表1 孕妇及胎儿HCMV感染与胎盘HCMV感染的关系
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3 讨论
胎盘是母胎之间物质交换的场所，也是宫内感染的主要途径。胎儿HCMV感染主要来源于流经胎盘绒毛煎隙的母血。本组结果证实HCMV可感染胎盘，进而传播给胎儿。提示在母体病毒血症期至特异性抗体出现后均可发生CMV胎盘感染和宫内传播。Griffith等给孕豚鼠接种CMV，也发现胎盘感染始于母体病毒血症期，至母体病毒血症终止和特异性抗体出现时胎盘中仍可检出病毒，而胎儿感染则始于病毒在母体血循环被抗体代替后，而且仅发生于胎盘可检出病毒者，提出胎儿感染是基于胎盘病毒感染而并非由母血直接播散，而胎盘却可能作为病毒库传播给胎儿 [2] 。本组中有1例无症状孕妇和胎儿HCMV DNA检测均阳性，胎盘免疫组化检测阴性。这可能是因为免疫组化检测是利用针对HCMV即刻早期抗原(IEA)和早期抗原(EA)的单克隆抗体对感染细胞进行染色，隐性感染者病毒无复制，故无病毒蛋白表达，抗原染色阴性 [3] ，但提示潜伏感染也可能通过胎盘传播给胎儿。另一方面，孕妇感染并非全部传播给胎儿，我们以往的 研究发现HCMV宫内传播率约为17.2% [4] 。本组20例胎盘感染病例中，11例发现有胎儿感染，9例胎盘HCMV抗原阳性，但胎儿未受感染。文献也曾报道过一些动物和人胎盘有高病毒感染滴度却不发生胎儿感染，胎盘感染病变与胎儿感染之间存在时间差 [2，5] ，这提示胎盘也可能在一定程度上延迟和限制了病毒的宫内传播从而对胎儿起保护作用。
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参考文献
1 张睿，刘新质.应用聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验检测孕妇和胎儿巨细胞病毒感染.中华妇产科杂志，1998，33(9):529.
2 Griffith BP，McCormick SR，Fong GY，et al.The placenta as a site of cyˉtomegalovirus infection in guinea pigs.J Virol，1985，55(2):402.
3 郑克立，刘东，谭耀驹.半套式荧光定量聚合酶链反应检测肾移植前后人巨细胞病毒感染状态.中山医科大学学报，1999，20(2):130.
4 张睿，刘新质.孕妇巨细胞病毒感染及其宫内传播的探讨.中国实用妇科与产科杂志，1999，15(3):166.
5 刘佩莉，赵充，庄依亮，等.人类巨细胞病毒先天性致畸机理的研究.中国优生优育，1991，2(3):114.
(收稿日期:2002-11-08)
作者单位:510120广州中山大学附属第二医院
(编辑梅 燕), 百拇医药