广州地区1999～2001年肠球菌耐药性监测分析
【摘要】 目的 观察广州地区肠球菌的耐药情况，以及3年间其耐药情况的动态改变。方法 采用K-B纸片法对广州地区12家医院从各种临床标本收集的491株肠球菌进行药敏试验，采用头孢硝基噻吩显色反应法测定其β-内酰胺酶，用浓度梯度法测定1999年收集的168株菌对万古霉素和替考拉宁的MIC值。结果 3年监测过程中，每年肠球菌的耐药情况基本一致，即对万古霉素、氨苄青霉素和青霉素的敏感率高，均为80%或以上，而对红霉素、环丙沙星和四环素的敏感率较低，对高剂量庆大霉素的敏感率为30%左右。3年间并没有发现所检测的抗生素中哪一种有明显的耐药性的改变，所有菌株的β-内酰胺酶均为阴性。1999年收集的168株菌用浓度梯度法测得其对万古霉素和替考拉宁的耐药率均为0。结论 广州地区肠球菌对万古霉素、青霉素、氨苄青霉素这3种抗生素的耐药率不高，这3种抗生素可作为临床经验用药的首选，广州地区肠球菌的耐药性3年间并没有明显的改变。
关键词 肠球菌 耐药性 微生物耐药性监测
【文献标识码】 B 【文章编号】 1609-6614(2003)01-0046-02
, 百拇医药
肠球菌是医院感染的一类很重要的病原菌，为了给临床治疗提供更准确的、更全面的资料，广州地区12家医院1999～2001年从各种临床标本中收集了491株肠球菌，在同样条件下进行药敏测定，现将结果报告如下。
1 材料
1.1 菌株 491株肠球菌由广州地区12家医院从各种临床标本分离，其中来自血液等无菌体液67株，尿液151株，分泌物130株，呼吸道标本85株，其他标本58株。
1.2 试剂 药敏纸片、M-H琼脂及β-内酰胺酶试剂均为OXOID公司产品。浓度梯度法用药物纸条为AB-BIODISK生产。
2 方法
K-B纸片法按照《全国临床检验操作规程》操作 [1] ，β-内酰胺酶按说明书操作和判读结果。用粪肠球菌ATCC29212、金黄色葡萄球菌ATCC25923和ATCC29213进行质量控制。按照NCCLS标准，选择抗生素为万古霉素、青 霉素、氨苄青霉素、高剂量庆大霉素、环丙沙星、四环素、红霉素、利福平和氯霉素。对1999年的168株肠球菌利用浓度梯度法测定其对万古霉素和替考拉宁的MIC值。所有数据用WHONET软件进行分析处理。
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3 结果
3.1 K-B纸片法测得491株肠球菌对各种抗生素的药敏结果 见表1。
3.2 1999年的168株肠球菌对万古霉素和替考拉宁的MIC值 见表2。
3.3 2001年176株肠球菌中屎肠球菌为18株，其药敏结果 见表3。
3.4 所有菌株的β-内酰胺酶均为阴性。所有491株肠球菌中发现有2株对万古霉素耐药，是广州市第一人民医院2001年从不同病人、不同时间的尿液标本中分离的进一步用浓度梯度法测定其对万古霉素的MIC均为256mg/L。表1 K-B法测得491株肠球菌对9种抗生素的药敏结果抗生素 表2 浓度梯度法测得168株肠球菌对万古霉素(VAN)和替考拉宁(TEI)的药敏结果 表3 K-B法测得2001年所有18株屎肠球菌的药敏结果:VAN-万古霉素，AMP-氨苄青霉素，PEN-青霉素，GEH-高剂量庆大霉素，CIP-环丙沙星，TET-四环素，ERY-红霉素，CHL-氯霉素，RIF-利福平
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4 讨论
通过3年的监测，我们发现广州地区肠球菌对万古霉素的耐药率为0～1.2%，对青霉素的耐药率为18.2%～20.8%，对氨苄青霉素的耐药率为10.8%～11.9%，肠球菌对这3种抗生素的耐药率并不高，这3种药物可作为临床经验用药的首选。而对环丙沙星的耐药率较高，为44.3%～47%，中介为24.7%～42.3%，对四环素和红霉素的耐药率更高，分别为66.2%～87.5%和78.1%～80.7%，所以，这些药物用于肠球菌引起的感染前最好进行准确的药敏试验。按照NCCLS建议，应用大剂量的氨基糖苷类筛选试验，能够预测氨苄青霉素、青霉素或者万古霉素和一种氨基糖苷类抗生素的协同效应，为此，本课题选用120μg/片的大剂量庆大霉素纸片筛选庆大霉素高水平耐药株，3年中491株肠球菌对大剂量庆大霉素的耐药率为55.7%～65.5%，说明庆大霉素联合用药的机会只有40%左右。
第九版NCCLS推荐，对于肠球菌感染，由于可选的药物有限，氯霉素、红霉素、四环素及利福平可用于万古霉素耐药的肠球菌，因此本课题2000～2001年的监测加测了氯霉素和利福平。从表1可知，总的来说利福平的耐药率分别为43.8%和50.9%，氯霉素的耐药率为35.9%和47.2%，耐药率均比较高，加上利福平单独应用很容易产生耐药以及氯霉素的毒副作用较大，临床上用此两类药物时应谨慎，不过，本课题发现2株耐万古霉素的肠球菌，其中一株尽管对万古霉素高度耐药，对氨苄青霉素和青霉素也耐药，但对利福平却是敏感的。
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国外有资料报道，1997年在综合病房对万古霉素耐药的肠球菌为15%，而ICU达到23% [2] 。另有资料报道，屎肠球菌对万古霉素的耐药率已达到50% [3] ，从表1可看出，广州地区肠球菌的耐药相对国外以及国内的北京地区来 说 [4] ，并不严重，特别是对万古霉素的耐药率在1999～2000年均为0，2001年为1.2%，而且所有检测菌株的β-内酰胺酶均为阴性，说明本地区的肠球菌的耐药情况有本地区的特异性。
3年的监测发现，所测试的抗生素对肠球菌的耐药性并没有明显的上升趋势，但是，1999～2000年没有发现耐万古霉素的肠球菌，可2001年发现有2株耐药株，所以为了给临床提供准确、全面的药敏资料，以及防止耐万古霉素的肠球菌暴发流行，加强肠球菌的耐药性监测是很有必要的。从表2可见，浓度梯度法测得1999年收集的168株肠球菌对万古霉素和替考拉宁的药敏结果，发现对万古霉素高度耐药的肠球菌，另外168株肠球菌对万古霉素的MIC 50 为3mg/L，替考拉宁的MIC 50 为0.38mg/L，表明替考拉宁的体外活性比万古霉素更强 [5] 。
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从表3可发现，所测试的2001年收集的屎肠球菌较其它肠球菌的耐药性更为严重，这与大量文献报道相一致。
参考文献
1 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程，南京:东南大学出版社，1997，553-562.
2 Bischoff W，Reynolds T，Hall G，et al.Molecular Epidemiology of Vanˉcomycin-Resistant Enterococcus facecium in a Large Urban Hosiptal over a5-Year Period.Journal of Clinical Microbiology，1999，3(12):3912-3916.
3 Donabedian S，Hershberger E，Thal L A，et al.PCR Fragment lenght polymorphism anaalysis of vancomycin-resistant enterococcus faecium.Journal of Clinical Microbiology，2000，38(8):2885-2888.
4 王清涛，徐英春.肠球菌耐药现状调查及抗感染用药探讨.中华医学检验杂志，1999，22(3):154-156.
5 张欣.万古霉素和替考拉宁.国外医学·抗生素分册，1999，20:67.
(收稿日期:2002-11-19)
作者单位:1510150广州医学院附属市二人民医院检验科
2广东省广州市第一人民医院检验科
(编辑梅 燕), 百拇医药(潘树根)
关键词 肠球菌 耐药性 微生物耐药性监测
【文献标识码】 B 【文章编号】 1609-6614(2003)01-0046-02
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肠球菌是医院感染的一类很重要的病原菌，为了给临床治疗提供更准确的、更全面的资料，广州地区12家医院1999～2001年从各种临床标本中收集了491株肠球菌，在同样条件下进行药敏测定，现将结果报告如下。
1 材料
1.1 菌株 491株肠球菌由广州地区12家医院从各种临床标本分离，其中来自血液等无菌体液67株，尿液151株，分泌物130株，呼吸道标本85株，其他标本58株。
1.2 试剂 药敏纸片、M-H琼脂及β-内酰胺酶试剂均为OXOID公司产品。浓度梯度法用药物纸条为AB-BIODISK生产。
2 方法
K-B纸片法按照《全国临床检验操作规程》操作 [1] ，β-内酰胺酶按说明书操作和判读结果。用粪肠球菌ATCC29212、金黄色葡萄球菌ATCC25923和ATCC29213进行质量控制。按照NCCLS标准，选择抗生素为万古霉素、青 霉素、氨苄青霉素、高剂量庆大霉素、环丙沙星、四环素、红霉素、利福平和氯霉素。对1999年的168株肠球菌利用浓度梯度法测定其对万古霉素和替考拉宁的MIC值。所有数据用WHONET软件进行分析处理。
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3 结果
3.1 K-B纸片法测得491株肠球菌对各种抗生素的药敏结果 见表1。
3.2 1999年的168株肠球菌对万古霉素和替考拉宁的MIC值 见表2。
3.3 2001年176株肠球菌中屎肠球菌为18株，其药敏结果 见表3。
3.4 所有菌株的β-内酰胺酶均为阴性。所有491株肠球菌中发现有2株对万古霉素耐药，是广州市第一人民医院2001年从不同病人、不同时间的尿液标本中分离的进一步用浓度梯度法测定其对万古霉素的MIC均为256mg/L。表1 K-B法测得491株肠球菌对9种抗生素的药敏结果抗生素 表2 浓度梯度法测得168株肠球菌对万古霉素(VAN)和替考拉宁(TEI)的药敏结果 表3 K-B法测得2001年所有18株屎肠球菌的药敏结果:VAN-万古霉素，AMP-氨苄青霉素，PEN-青霉素，GEH-高剂量庆大霉素，CIP-环丙沙星，TET-四环素，ERY-红霉素，CHL-氯霉素，RIF-利福平
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4 讨论
通过3年的监测，我们发现广州地区肠球菌对万古霉素的耐药率为0～1.2%，对青霉素的耐药率为18.2%～20.8%，对氨苄青霉素的耐药率为10.8%～11.9%，肠球菌对这3种抗生素的耐药率并不高，这3种药物可作为临床经验用药的首选。而对环丙沙星的耐药率较高，为44.3%～47%，中介为24.7%～42.3%，对四环素和红霉素的耐药率更高，分别为66.2%～87.5%和78.1%～80.7%，所以，这些药物用于肠球菌引起的感染前最好进行准确的药敏试验。按照NCCLS建议，应用大剂量的氨基糖苷类筛选试验，能够预测氨苄青霉素、青霉素或者万古霉素和一种氨基糖苷类抗生素的协同效应，为此，本课题选用120μg/片的大剂量庆大霉素纸片筛选庆大霉素高水平耐药株，3年中491株肠球菌对大剂量庆大霉素的耐药率为55.7%～65.5%，说明庆大霉素联合用药的机会只有40%左右。
第九版NCCLS推荐，对于肠球菌感染，由于可选的药物有限，氯霉素、红霉素、四环素及利福平可用于万古霉素耐药的肠球菌，因此本课题2000～2001年的监测加测了氯霉素和利福平。从表1可知，总的来说利福平的耐药率分别为43.8%和50.9%，氯霉素的耐药率为35.9%和47.2%，耐药率均比较高，加上利福平单独应用很容易产生耐药以及氯霉素的毒副作用较大，临床上用此两类药物时应谨慎，不过，本课题发现2株耐万古霉素的肠球菌，其中一株尽管对万古霉素高度耐药，对氨苄青霉素和青霉素也耐药，但对利福平却是敏感的。
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国外有资料报道，1997年在综合病房对万古霉素耐药的肠球菌为15%，而ICU达到23% [2] 。另有资料报道，屎肠球菌对万古霉素的耐药率已达到50% [3] ，从表1可看出，广州地区肠球菌的耐药相对国外以及国内的北京地区来 说 [4] ，并不严重，特别是对万古霉素的耐药率在1999～2000年均为0，2001年为1.2%，而且所有检测菌株的β-内酰胺酶均为阴性，说明本地区的肠球菌的耐药情况有本地区的特异性。
3年的监测发现，所测试的抗生素对肠球菌的耐药性并没有明显的上升趋势，但是，1999～2000年没有发现耐万古霉素的肠球菌，可2001年发现有2株耐药株，所以为了给临床提供准确、全面的药敏资料，以及防止耐万古霉素的肠球菌暴发流行，加强肠球菌的耐药性监测是很有必要的。从表2可见，浓度梯度法测得1999年收集的168株肠球菌对万古霉素和替考拉宁的药敏结果，发现对万古霉素高度耐药的肠球菌，另外168株肠球菌对万古霉素的MIC 50 为3mg/L，替考拉宁的MIC 50 为0.38mg/L，表明替考拉宁的体外活性比万古霉素更强 [5] 。
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从表3可发现，所测试的2001年收集的屎肠球菌较其它肠球菌的耐药性更为严重，这与大量文献报道相一致。
参考文献
1 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程，南京:东南大学出版社，1997，553-562.
2 Bischoff W，Reynolds T，Hall G，et al.Molecular Epidemiology of Vanˉcomycin-Resistant Enterococcus facecium in a Large Urban Hosiptal over a5-Year Period.Journal of Clinical Microbiology，1999，3(12):3912-3916.
3 Donabedian S，Hershberger E，Thal L A，et al.PCR Fragment lenght polymorphism anaalysis of vancomycin-resistant enterococcus faecium.Journal of Clinical Microbiology，2000，38(8):2885-2888.
4 王清涛，徐英春.肠球菌耐药现状调查及抗感染用药探讨.中华医学检验杂志，1999，22(3):154-156.
5 张欣.万古霉素和替考拉宁.国外医学·抗生素分册，1999，20:67.
(收稿日期:2002-11-19)
作者单位:1510150广州医学院附属市二人民医院检验科
2广东省广州市第一人民医院检验科
(编辑梅 燕), 百拇医药(潘树根)