超广谱β-内酰胺酶的检出情况及药物敏感试验分析
【摘要】 目的 监测产超广谱β-内酰胺酶(ESBL S )菌株的产生情况，指导临床合理使用抗生素，预防医院感染暴发。方法 用美国Microscan Walkway40细菌分析系统对分离菌株进行鉴定，用纸片扩散法对分离菌株进行ESBL S 确认试验及药物敏感试验。结果 在385株G - 菌中，ESBL S 总检出率为18.9%，主要见于大肠埃希氏菌19.5%，肺炎克雷伯氏菌26.8%，产酸克雷伯氏菌15.6%，阴沟肠杆菌14.5%。ESBL S 菌株对亚胺培南和头孢哌酮/舒巴坦，哌拉西林/他唑巴坦的敏感性最高。结论 医院内应注重ESBL S 的监测和报告，有效地控制ESBL S 菌株在院内的播散和流行，亚胺培南和头孢哌酮/舒巴坦，哌拉西林/他唑巴坦是治疗由产ESBL S 菌引起感染的有效抗生素。
关键词 超广谱β-内酰胺酶 纸片扩散法耐药
, 百拇医药
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)16-2440-02
The test and the drug sensitivity analysis
of extended-spectrumβ-lactamase
Li Fang
Beijing Chaoyang Hospital Alliliated to Capital University of Medical Sciences，Beijing100020.
【Abstract】 Objective To monitor the production of ESBL s and offer a rational suggestion to the use of antibiˉotics，and may be useful to prevent the break out of nosocomial infection.Methods The separated germs were apˉpraised with the American Microscan Walkway40bacterial analysis system.The affirmation of ESBL S and the drug sensitivity tests to the separated germs were processed withpaper diffusion method.Results In385gram-negative germs，ESBL S were18.9%.Among them，the ratio of Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae，K.oxytoca，Enterobacter colacae were19.5%，26.8%，15.6%，and14.5%respectively.The germs which produce ESBL S had a high sensitive to imipenem，cefoperazone/sulbactam，piperacillin/tazobactam.Conclusion The medical laboratory should pay great attention to monitor and to control the spread of ESBL S germs in hospital.Imipenem，cefoperazone/sulbactam and piperacillin/tazobactam are effective bacterins to ESBL S germs.
, 百拇医药
Key words extended-spectrumβ-lactamase plate dilution method resistance
近年来，随着超广谱头孢菌素在临床上的广泛应用，使细菌极易产生超广谱β-内酰胺酶。超广谱β-内酰胺酶是由质粒介导的耐药酶，它不仅能水解青霉素和第一、二代头孢菌素，还能水解第三代头孢菌素及氨曲南等，并且ESˉBL S 的耐药基因编码经常与其他的耐药基因连结，从而使耐药性更加复杂，常出现多重耐药 [1，2] 。其耐药基因随质粒可在同种或不同种革兰氏阳性细菌间迅速传播 [3] 。因此ESBL S 的监测对正确治疗和控制感染传播具有重要意义。
1 材料和方法
1.1 标本来源 所有菌株均来源于2001年8～2003年2月本院住院和门诊患者的血液、尿液、痰液、引流液、分泌物等标本。在385株G - 菌中，其中大肠埃希氏菌150株，肺炎克雷伯氏菌130株，产酸克雷伯氏菌30株，阴沟肠杆菌45株，其它G - 菌30株。质控菌株为大肠埃希氏菌(ATCC25922)，肺炎克雷伯氏菌(ATCC700603)。
, 百拇医药
1.2 方法 细菌的分离培养按
照《全国临床检验操作规程》进行。采用美国德灵公司Microscan Walkway40细菌分析仪进行菌株鉴定。药敏按1999版美国实验室标准委员会(NCCLS)推荐的标准纸片扩散法测定ESBL S[3] 。采用头孢他啶(CAZ30μg)及头孢他啶/克拉维酸(CAZ/CA30μg/10μg)组合，头孢噻肟(CTX30μg)及头孢噻肟/克拉维酸(CAZ/CA30μg/10μg)组合。任何一组药敏的抑菌环直径相差≥5mm时，判定ESBL S 阳性。
1.3 统计学处理 统计采用SPSS软件。所有计量资料以均数±标准差表示，计数资料用率表示，资料间的比较用χ 2 检验。
2 结果
2.1 ESBL S 菌株的检出 在385株G - 菌中，共检出产ESˉBL S 细菌73株，总检出率为18.9%。其中大肠埃希氏菌19.5%，肺炎克雷伯氏菌26.8%，产酸克雷伯氏菌15.6%，阴沟肠杆菌14.5%，其它G - 菌中ESBL S 的检出率为6.9%。
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2.2 抗生素的敏感情况 见表1。
表1 主要产ESBL S 细菌对抗生素的耐药率 (%)
3 讨论
ESBL S 大多数是质粒介导的β-内酰胺酶，ESBL S 主要发现于肠杆菌科，特别是大肠埃希氏菌和克雷伯氏菌。由于大量使用广谱的第三代头孢菌素等原因，近年来临床上产ESBL S 的细菌分离率逐渐增加，该菌具有多重耐药性和经质粒传播迅速的特点，因此给临床治疗带来了极大难度。ESBL S 的医院感染与ICU、呼吸科、肾内科、肿瘤科和新生儿病房大量使用抗生素有关。当临床分离株产ESBL S 时，不管体外药敏试验结果敏感与否，都应避免使用青霉素类，一、二、三代头孢菌素和氨曲南等β-内酰胺类抗生素。这是因为β-内酰胺类抗生素对这类菌株引起的感染治疗效果不好。我们对385株G - 菌进行ESBL S 检测，共检出产 ESBL S 菌株73株，检出率为18.9%。关于ESBL S 的检出问题，各地报道不一，相差较大 [4] ，可能是不同地区和医院使用抗生素的种类和数量不同，ESBL S 的检测方法不同，菌株的选择标准不同 [5]。
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产ESBL S 细菌对碳青霉烯类抗生素亚胺培南的敏感率高达100%，是治疗产ESBL S 菌引起感染的最佳药物。头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的敏感率分别为87%和89%，也是治疗产ESBL S 菌引起感染的理想药物。本试验还显示，ESBL S 菌还具有对抗大部分β-内酰胺类、耐氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药物、氯霉素、环丙沙星及复方新诺明等药物。
产ESBL S 菌对青霉素类抗生素阿莫西林、哌拉西林和二、三代头孢菌素的耐药率也很高。产ESBL S 细菌对常用抗生素均呈较高的耐药性，这与其在携带有ESBL S 的质粒上可同时携带对其他抗生素的耐药基因有关。目前发现产ESBL S 菌株的种类越来越多，不仅局限在肠杆菌科，还在非发酵菌也有检出，我们必须加强实验室检测，掌握ESBL S 的耐药特性及分布，及时准确地报告临床，指导临床合理应用抗生素，控制ESBL S 菌株在医院内的播散和流行。
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参考文献
1 Rahal JJ，Urban C，Horn D，et al.Class restriction of cephalosporin use to control total cephalosporin resistance in nosocomial Klebsiella.JAMA，1998，280(14):1233-1237.
2 Meyer KS，Urban C，Eagen JA，et al.Nosocomial outbreak of Klebsiella infection resistant to generation cepholosporins.Ann Intern Med，1993，119(5):353-358.
3 Bingen EH，Desjards P，Arlet G，et al.Molecular epidemionlogy of plasˉmidspread among extended broad-spectrum-β-lactamase-producˉing Klebsiella pneumoniae isolates in a pediatric hospita.ClinMicrobiol，1993，31:179.
4 熊自忠，朱德妹，胡付品，等.上海地区产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌的实验和临床研究.中国抗感染化疗杂志，2001，1(3):150-154.
5 苏维奇，李莉，陈华波，等.产超广谱β-内酰胺酶阳性率及药物敏感试验.中华医院感染学杂志，2003，13(7):381-383.
(编辑李年令)
作者单位:100020首都医科大学附属北京朝阳医院检验科, http://www.100md.com(栗)
关键词 超广谱β-内酰胺酶 纸片扩散法耐药
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【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)16-2440-02
The test and the drug sensitivity analysis
of extended-spectrumβ-lactamase
Li Fang
Beijing Chaoyang Hospital Alliliated to Capital University of Medical Sciences，Beijing100020.
【Abstract】 Objective To monitor the production of ESBL s and offer a rational suggestion to the use of antibiˉotics，and may be useful to prevent the break out of nosocomial infection.Methods The separated germs were apˉpraised with the American Microscan Walkway40bacterial analysis system.The affirmation of ESBL S and the drug sensitivity tests to the separated germs were processed withpaper diffusion method.Results In385gram-negative germs，ESBL S were18.9%.Among them，the ratio of Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae，K.oxytoca，Enterobacter colacae were19.5%，26.8%，15.6%，and14.5%respectively.The germs which produce ESBL S had a high sensitive to imipenem，cefoperazone/sulbactam，piperacillin/tazobactam.Conclusion The medical laboratory should pay great attention to monitor and to control the spread of ESBL S germs in hospital.Imipenem，cefoperazone/sulbactam and piperacillin/tazobactam are effective bacterins to ESBL S germs.
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近年来，随着超广谱头孢菌素在临床上的广泛应用，使细菌极易产生超广谱β-内酰胺酶。超广谱β-内酰胺酶是由质粒介导的耐药酶，它不仅能水解青霉素和第一、二代头孢菌素，还能水解第三代头孢菌素及氨曲南等，并且ESˉBL S 的耐药基因编码经常与其他的耐药基因连结，从而使耐药性更加复杂，常出现多重耐药 [1，2] 。其耐药基因随质粒可在同种或不同种革兰氏阳性细菌间迅速传播 [3] 。因此ESBL S 的监测对正确治疗和控制感染传播具有重要意义。
1 材料和方法
1.1 标本来源 所有菌株均来源于2001年8～2003年2月本院住院和门诊患者的血液、尿液、痰液、引流液、分泌物等标本。在385株G - 菌中，其中大肠埃希氏菌150株，肺炎克雷伯氏菌130株，产酸克雷伯氏菌30株，阴沟肠杆菌45株，其它G - 菌30株。质控菌株为大肠埃希氏菌(ATCC25922)，肺炎克雷伯氏菌(ATCC700603)。
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1.2 方法 细菌的分离培养按
照《全国临床检验操作规程》进行。采用美国德灵公司Microscan Walkway40细菌分析仪进行菌株鉴定。药敏按1999版美国实验室标准委员会(NCCLS)推荐的标准纸片扩散法测定ESBL S[3] 。采用头孢他啶(CAZ30μg)及头孢他啶/克拉维酸(CAZ/CA30μg/10μg)组合，头孢噻肟(CTX30μg)及头孢噻肟/克拉维酸(CAZ/CA30μg/10μg)组合。任何一组药敏的抑菌环直径相差≥5mm时，判定ESBL S 阳性。
1.3 统计学处理 统计采用SPSS软件。所有计量资料以均数±标准差表示，计数资料用率表示，资料间的比较用χ 2 检验。
2 结果
2.1 ESBL S 菌株的检出 在385株G - 菌中，共检出产ESˉBL S 细菌73株，总检出率为18.9%。其中大肠埃希氏菌19.5%，肺炎克雷伯氏菌26.8%，产酸克雷伯氏菌15.6%，阴沟肠杆菌14.5%，其它G - 菌中ESBL S 的检出率为6.9%。
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2.2 抗生素的敏感情况 见表1。
表1 主要产ESBL S 细菌对抗生素的耐药率 (%)
3 讨论
ESBL S 大多数是质粒介导的β-内酰胺酶，ESBL S 主要发现于肠杆菌科，特别是大肠埃希氏菌和克雷伯氏菌。由于大量使用广谱的第三代头孢菌素等原因，近年来临床上产ESBL S 的细菌分离率逐渐增加，该菌具有多重耐药性和经质粒传播迅速的特点，因此给临床治疗带来了极大难度。ESBL S 的医院感染与ICU、呼吸科、肾内科、肿瘤科和新生儿病房大量使用抗生素有关。当临床分离株产ESBL S 时，不管体外药敏试验结果敏感与否，都应避免使用青霉素类，一、二、三代头孢菌素和氨曲南等β-内酰胺类抗生素。这是因为β-内酰胺类抗生素对这类菌株引起的感染治疗效果不好。我们对385株G - 菌进行ESBL S 检测，共检出产 ESBL S 菌株73株，检出率为18.9%。关于ESBL S 的检出问题，各地报道不一，相差较大 [4] ，可能是不同地区和医院使用抗生素的种类和数量不同，ESBL S 的检测方法不同，菌株的选择标准不同 [5]。
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产ESBL S 细菌对碳青霉烯类抗生素亚胺培南的敏感率高达100%，是治疗产ESBL S 菌引起感染的最佳药物。头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的敏感率分别为87%和89%，也是治疗产ESBL S 菌引起感染的理想药物。本试验还显示，ESBL S 菌还具有对抗大部分β-内酰胺类、耐氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药物、氯霉素、环丙沙星及复方新诺明等药物。
产ESBL S 菌对青霉素类抗生素阿莫西林、哌拉西林和二、三代头孢菌素的耐药率也很高。产ESBL S 细菌对常用抗生素均呈较高的耐药性，这与其在携带有ESBL S 的质粒上可同时携带对其他抗生素的耐药基因有关。目前发现产ESBL S 菌株的种类越来越多，不仅局限在肠杆菌科，还在非发酵菌也有检出，我们必须加强实验室检测，掌握ESBL S 的耐药特性及分布，及时准确地报告临床，指导临床合理应用抗生素，控制ESBL S 菌株在医院内的播散和流行。
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参考文献
1 Rahal JJ，Urban C，Horn D，et al.Class restriction of cephalosporin use to control total cephalosporin resistance in nosocomial Klebsiella.JAMA，1998，280(14):1233-1237.
2 Meyer KS，Urban C，Eagen JA，et al.Nosocomial outbreak of Klebsiella infection resistant to generation cepholosporins.Ann Intern Med，1993，119(5):353-358.
3 Bingen EH，Desjards P，Arlet G，et al.Molecular epidemionlogy of plasˉmidspread among extended broad-spectrum-β-lactamase-producˉing Klebsiella pneumoniae isolates in a pediatric hospita.ClinMicrobiol，1993，31:179.
4 熊自忠，朱德妹，胡付品，等.上海地区产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌的实验和临床研究.中国抗感染化疗杂志，2001，1(3):150-154.
5 苏维奇，李莉，陈华波，等.产超广谱β-内酰胺酶阳性率及药物敏感试验.中华医院感染学杂志，2003，13(7):381-383.
(编辑李年令)
作者单位:100020首都医科大学附属北京朝阳医院检验科, http://www.100md.com(栗)