卵巢颗粒细胞Bcl-2、Fas、Fas-L的异常表达与多囊卵巢综合征的关系
【摘要】 目的 探讨Bcl-2、Fas、Fas-L的异常表达与多囊卵巢综合征的发病关系。方法 采用免疫组化方法测定20例PCOS患者及20例正常育龄妇女卵巢始基卵泡和窦卵泡中Bcl-2抗原、Fas抗原及Fas-L抗原的阳性表达情况。结果 在始基卵泡阶段，研究组和对照组Bcl-2的阳性表达数值差异无显著性，而Fas和Fas-L的表达研究组明显低于对照组(P<0.05);在窦卵泡阶段，研究组Bcl-2的阳性表达明显强于对照组(P<0.05)，Fas和Fas-L的表达在两组间差异无显著性。结论 细胞凋亡抑制基因Bcl-2与细胞凋亡促进基因Fas及配基Fas-L在卵泡发育过程中的异常表达是造成多囊卵巢的一个重要原因。
关键词 Bcl-2 Fas Fas-L 多囊卵巢综合征
【文献标识码】 A 【文章编号】 1684-2030(2003)01-0017-02
Relationship between the abnormal expression of Bcl-2，Fas，Fas-L
, http://www.100md.com
in granulosa cells and polycystic ovary syndrome
Wan Zhijian，Li Ju，Li Siyang
Dept.of Gynecology and Obsterics of NO.202Hospital of PLA110003.
【Abstract】 Objective To study the relationship between the abnormal expression of Bcl-2，Fas and Fas-L in granulosa cells and polycystic ovary syndrome.Methods The ovary tissue samples were collected from20patients with PCOS and20normal women in same age.Immunohistochemical analysis was employed to demonstrate the positive expression of the Bcl-2，Fas and Fas-L in granulosa cells of these samples.Results There was no difference of exˉpression Bcl-2in granulosa cells ofprimordial follicles between two groups，but it was significantly lower that the exˉpression of Fas and Fas-L in study group than that in control group(P<0.05).In other stages of follicles，the exˉpression of Bcl-2was significantly higher in study group than that in control group(P<0.05)，in addition，the exˉpression of Fas and Fas-L were no difference between two groups.Conclusion It is aimportant causation of PCOS that the abnormal expression of Bcl-2，Fas and Fas-L at course of follicles growth.
, 百拇医药
Key words Bcl-2 Fas Fas-L polycystic ovary syndrome(PCOS)
多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome，PCOS)是育龄妇女常见的内分泌疾病，是导致排卵障碍的常见原因之一，其病因未明。近年来，在其众多发病学说中，卵巢细胞凋亡调控机制异常学说日益受到重视，认为卵泡内颗粒细胞凋亡减少可能是其发病原因。细胞凋亡抑制基因Bcl-2与细胞凋亡促进基因Fas及其配体Fas-L在细胞的正常生长和凋亡中起着重要作用，他们之间表达平衡失调，可能导致细胞凋亡障碍。本研究通过对PCOS卵巢颗粒细胞上3种物质表达情况的研究，探讨Bcl-2、Fas、Fas-L的异常表达与多囊卵巢综合征的发病关系。
1 材料与方法
1.1 研究对象 选取2000年12月～2001年12月我院妇产科经腹腔镜和开腹探查病理证实为PCOS患者20例作为研究对象，年龄25～36岁，平均29.32岁;选取同期住院的月经正常、排除内分泌疾病、有排卵的育龄妇女20例为对照组，年龄23～35岁，平均28.86岁。两组患者3个月内未用过任何激素类药物。PCOS诊断标准参考乐杰主编《妇产科学》第五版 [1] 。
, 百拇医药
1.2 方法 楔形切取卵巢组织5mm 3 ，立即置于10%福尔马林溶液中固定，常规石蜡包埋，做4μm切片，采用SP免疫组化法观察始基卵泡和窦卵泡中Bcl-2抗原、Fas抗原及Fas-L抗原的阳性表达。鼠抗人Bcl-2单克隆抗体、鼠抗人Fas单克降抗体、兔抗人Fas-L多克隆抗体及免疫组化染色SP TM 试剂盒由福州迈新公司提供。结果判定:阳性颗粒细胞为细胞结构清晰，胞浆或胞膜内有棕黄色颗粒沉着，染色明显高于背景。采用广东华软公司图像分析系统测定阳性细胞颜色深浅，颜色越深，显示数值越大，强度越高。
1.3 统计学方法 采用t检验。
2 结果
表1 两组卵巢颗粒细胞Bcl-2 表达的阳性值比较 (X±s) 注:括号内为计数卵泡数
2.1 两组卵巢颗粒细胞Bcl-2的表达情况 在始基卵泡阶段，研究组和对照组Bcl-2的阳性表达数值差异无显著性，而在窦卵泡阶段，研究组的阳性表达明显强于对照组，两者间差异有显著性(P<0.05)，见表1。
, 百拇医药
2.2 两组卵巢颗粒细胞Fas和Fas-L的表达情况 研究 组始基卵泡颗粒细胞Fas、Fas-L的表达明显低于对照组，两者间差异有显著性(P<0.05);而在窦卵泡期，两组间的阳性表达差异无显著性。见表2。
表2 两组卵巢颗粒细胞Fas、Fas-L表达的阳性值比较 (X±s) 注:括号内为计数卵泡数
3 讨论
3.1 Bcl-2与Fas基因在细胞凋亡中的作用 Bcl-2是许多生理或病理性细胞凋亡的关键因素，它通过阻断程序性细胞死亡信号传递系统的最后共同通道而抑制细胞死亡 [2] ，是一种重要的细胞生存基因。Bcl-2广泛存在于组织中，包括卵巢组织。Nassauw L等 [3] 证实，在成长卵泡的颗粒细胞中存在Bcl-2的优势表达。1999年Morita等 [4] 在研究中发现，在Bcl-2转基因鼠的卵巢中，卵泡闭锁的数量比正常鼠明显减少，并且这种卵巢组织对自发性细胞凋亡和药物诱导的细胞凋亡均有抑制作用。
, 百拇医药
Fas基因则是促进细胞凋亡的基因。它诱导细胞凋亡的机制目前有两种解释:(1)Fas抗原与其配基Fas-L结合，通过信号传导，最终诱导凋亡;(2)Fas抗体是某种生长因子的受体，Fas抗体与之结合能阻断生长因子的作用。Ouirk等 [5] 研究发现，卵巢颗粒细胞和黄体细胞能够表达Fas抗原，并且对Fas抗体的细胞毒作用非常敏感，能够引起颗粒细胞凋亡。
另有研究表明，Bcl-2能够抑制Fas的细胞凋亡作用。Itoh将Fas和Bcl-2的cDNA同时转入白介素-2依赖性细胞系FDC-PI，在白介素去除后，Bcl-2表达的细胞不发生凋亡，表明Bcl-2干扰了Fas系统的细胞凋亡作用。
3.2 Bcl-2、Fas及Fas-L的异常表达与PCOS的关系 本研究结果显示，在PCOS卵巢和正常卵巢的颗粒细胞中都检测到了Bcl-2、Fas及Fas-L，但在始基卵泡期Fas及Fas-L的表达研究组明显低于对照组，在窦卵泡期两组没有 显著差异;Bcl-2的表达在始基卵泡期两组没有显著差异，而在窦卵泡期研究组表达明显高于对照组。这提示在始基卵泡阶段PCOS患者可能由于凋亡促进基因Fas及其配基Fas-L表达的减少，使颗粒细胞凋亡减少，与正常卵巢相比，有更多的始基卵泡同时向窦卵泡发育，从而为PCOS的发病奠定基础。在窦卵泡发育过程中，细胞凋亡抑制基因Bcl-2表达增强，而Fas及Fas-L未能相应增多，使卵泡闭锁发生障碍，卵泡堆积，卵巢呈多囊性改变。因此，我们认为，细胞凋亡抑制基因Bcl-2与细胞凋亡促进基因Fas及配基Fas-L在卵泡发育过程中的异常表达是造成多囊卵巢的一个重要原因。
, 百拇医药
参考文献
1 乐杰.妇产科学，第五版.北京:人民卫生出版社，2000，376-379.
2 姜泊.细胞凋亡基础与临床，北京:人民军医出版社，1999，248.
3 Nassauw L，Tao L，Harrissson F.Districbution of apoptosis related proˉteins in the quail ovary during folliculogengsis:Bcl-2，BAS，and CPP32.Acta-Histochem，1999，10(1):103-112.
4 Morita Y，Perez GI，Maravl DV，et al.Targeted expression of Bcl-2in mouse occytes inhibits ovarian follicles atresie and prevents spontaneouse and chemotherapy induced occyte apoptosis in vitro.Mol-Endocrinol，1999，13(6):841-850.
5 Ouirk SM，Cowan RG，Joshi SG，et al.Fas antigen-mediated apoptosis in human granulose cells.Biol Reprod，1995，52:279-287.
(收稿日期:2002-09-12)
作者单位:110003解放军第202医院妇产科
(编辑梅 燕), 百拇医药(王志坚 李 巨 李思扬)
关键词 Bcl-2 Fas Fas-L 多囊卵巢综合征
【文献标识码】 A 【文章编号】 1684-2030(2003)01-0017-02
Relationship between the abnormal expression of Bcl-2，Fas，Fas-L
, http://www.100md.com
in granulosa cells and polycystic ovary syndrome
Wan Zhijian，Li Ju，Li Siyang
Dept.of Gynecology and Obsterics of NO.202Hospital of PLA110003.
【Abstract】 Objective To study the relationship between the abnormal expression of Bcl-2，Fas and Fas-L in granulosa cells and polycystic ovary syndrome.Methods The ovary tissue samples were collected from20patients with PCOS and20normal women in same age.Immunohistochemical analysis was employed to demonstrate the positive expression of the Bcl-2，Fas and Fas-L in granulosa cells of these samples.Results There was no difference of exˉpression Bcl-2in granulosa cells ofprimordial follicles between two groups，but it was significantly lower that the exˉpression of Fas and Fas-L in study group than that in control group(P<0.05).In other stages of follicles，the exˉpression of Bcl-2was significantly higher in study group than that in control group(P<0.05)，in addition，the exˉpression of Fas and Fas-L were no difference between two groups.Conclusion It is aimportant causation of PCOS that the abnormal expression of Bcl-2，Fas and Fas-L at course of follicles growth.
, 百拇医药
Key words Bcl-2 Fas Fas-L polycystic ovary syndrome(PCOS)
多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome，PCOS)是育龄妇女常见的内分泌疾病，是导致排卵障碍的常见原因之一，其病因未明。近年来，在其众多发病学说中，卵巢细胞凋亡调控机制异常学说日益受到重视，认为卵泡内颗粒细胞凋亡减少可能是其发病原因。细胞凋亡抑制基因Bcl-2与细胞凋亡促进基因Fas及其配体Fas-L在细胞的正常生长和凋亡中起着重要作用，他们之间表达平衡失调，可能导致细胞凋亡障碍。本研究通过对PCOS卵巢颗粒细胞上3种物质表达情况的研究，探讨Bcl-2、Fas、Fas-L的异常表达与多囊卵巢综合征的发病关系。
1 材料与方法
1.1 研究对象 选取2000年12月～2001年12月我院妇产科经腹腔镜和开腹探查病理证实为PCOS患者20例作为研究对象，年龄25～36岁，平均29.32岁;选取同期住院的月经正常、排除内分泌疾病、有排卵的育龄妇女20例为对照组，年龄23～35岁，平均28.86岁。两组患者3个月内未用过任何激素类药物。PCOS诊断标准参考乐杰主编《妇产科学》第五版 [1] 。
, 百拇医药
1.2 方法 楔形切取卵巢组织5mm 3 ，立即置于10%福尔马林溶液中固定，常规石蜡包埋，做4μm切片，采用SP免疫组化法观察始基卵泡和窦卵泡中Bcl-2抗原、Fas抗原及Fas-L抗原的阳性表达。鼠抗人Bcl-2单克隆抗体、鼠抗人Fas单克降抗体、兔抗人Fas-L多克隆抗体及免疫组化染色SP TM 试剂盒由福州迈新公司提供。结果判定:阳性颗粒细胞为细胞结构清晰，胞浆或胞膜内有棕黄色颗粒沉着，染色明显高于背景。采用广东华软公司图像分析系统测定阳性细胞颜色深浅，颜色越深，显示数值越大，强度越高。
1.3 统计学方法 采用t检验。
2 结果
表1 两组卵巢颗粒细胞Bcl-2 表达的阳性值比较 (X±s) 注:括号内为计数卵泡数
2.1 两组卵巢颗粒细胞Bcl-2的表达情况 在始基卵泡阶段，研究组和对照组Bcl-2的阳性表达数值差异无显著性，而在窦卵泡阶段，研究组的阳性表达明显强于对照组，两者间差异有显著性(P<0.05)，见表1。
, 百拇医药
2.2 两组卵巢颗粒细胞Fas和Fas-L的表达情况 研究 组始基卵泡颗粒细胞Fas、Fas-L的表达明显低于对照组，两者间差异有显著性(P<0.05);而在窦卵泡期，两组间的阳性表达差异无显著性。见表2。
表2 两组卵巢颗粒细胞Fas、Fas-L表达的阳性值比较 (X±s) 注:括号内为计数卵泡数
3 讨论
3.1 Bcl-2与Fas基因在细胞凋亡中的作用 Bcl-2是许多生理或病理性细胞凋亡的关键因素，它通过阻断程序性细胞死亡信号传递系统的最后共同通道而抑制细胞死亡 [2] ，是一种重要的细胞生存基因。Bcl-2广泛存在于组织中，包括卵巢组织。Nassauw L等 [3] 证实，在成长卵泡的颗粒细胞中存在Bcl-2的优势表达。1999年Morita等 [4] 在研究中发现，在Bcl-2转基因鼠的卵巢中，卵泡闭锁的数量比正常鼠明显减少，并且这种卵巢组织对自发性细胞凋亡和药物诱导的细胞凋亡均有抑制作用。
, 百拇医药
Fas基因则是促进细胞凋亡的基因。它诱导细胞凋亡的机制目前有两种解释:(1)Fas抗原与其配基Fas-L结合，通过信号传导，最终诱导凋亡;(2)Fas抗体是某种生长因子的受体，Fas抗体与之结合能阻断生长因子的作用。Ouirk等 [5] 研究发现，卵巢颗粒细胞和黄体细胞能够表达Fas抗原，并且对Fas抗体的细胞毒作用非常敏感，能够引起颗粒细胞凋亡。
另有研究表明，Bcl-2能够抑制Fas的细胞凋亡作用。Itoh将Fas和Bcl-2的cDNA同时转入白介素-2依赖性细胞系FDC-PI，在白介素去除后，Bcl-2表达的细胞不发生凋亡，表明Bcl-2干扰了Fas系统的细胞凋亡作用。
3.2 Bcl-2、Fas及Fas-L的异常表达与PCOS的关系 本研究结果显示，在PCOS卵巢和正常卵巢的颗粒细胞中都检测到了Bcl-2、Fas及Fas-L，但在始基卵泡期Fas及Fas-L的表达研究组明显低于对照组，在窦卵泡期两组没有 显著差异;Bcl-2的表达在始基卵泡期两组没有显著差异，而在窦卵泡期研究组表达明显高于对照组。这提示在始基卵泡阶段PCOS患者可能由于凋亡促进基因Fas及其配基Fas-L表达的减少，使颗粒细胞凋亡减少，与正常卵巢相比，有更多的始基卵泡同时向窦卵泡发育，从而为PCOS的发病奠定基础。在窦卵泡发育过程中，细胞凋亡抑制基因Bcl-2表达增强，而Fas及Fas-L未能相应增多，使卵泡闭锁发生障碍，卵泡堆积，卵巢呈多囊性改变。因此，我们认为，细胞凋亡抑制基因Bcl-2与细胞凋亡促进基因Fas及配基Fas-L在卵泡发育过程中的异常表达是造成多囊卵巢的一个重要原因。
, 百拇医药
参考文献
1 乐杰.妇产科学，第五版.北京:人民卫生出版社，2000，376-379.
2 姜泊.细胞凋亡基础与临床，北京:人民军医出版社，1999，248.
3 Nassauw L，Tao L，Harrissson F.Districbution of apoptosis related proˉteins in the quail ovary during folliculogengsis:Bcl-2，BAS，and CPP32.Acta-Histochem，1999，10(1):103-112.
4 Morita Y，Perez GI，Maravl DV，et al.Targeted expression of Bcl-2in mouse occytes inhibits ovarian follicles atresie and prevents spontaneouse and chemotherapy induced occyte apoptosis in vitro.Mol-Endocrinol，1999，13(6):841-850.
5 Ouirk SM，Cowan RG，Joshi SG，et al.Fas antigen-mediated apoptosis in human granulose cells.Biol Reprod，1995，52:279-287.
(收稿日期:2002-09-12)
作者单位:110003解放军第202医院妇产科
(编辑梅 燕), 百拇医药(王志坚 李 巨 李思扬)