AgNOR定量检测对乳腺疾病的诊断意义
【摘要】 目的 探讨AgNOR定量检测对乳腺疾病的诊断意义。方法 应用银染技术，对25例乳腺腺病、12例乳腺纤维腺瘤、12例囊肿病、2例管内癌、67例浸润癌进行银染核仁组成区(AgNOR)定量观察。结果 良、恶性病变细胞核内AgˉNOR颗粒的数目、分布、形态类型有明显差异;纤维腺瘤、囊肿病与腺病细胞核内的AgNOR颗粒数目有明显差异;乳腺癌分型分级各组间AgNOR数目无差异。结论 AgNOR技术有助于乳腺良、恶性疾病的鉴别诊断。
关键词 乳腺肿瘤 AgNOR 定量研究
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2004)02-0122-02
The diagnostic value of AgNOR in breast lesions
Gu Jirong，Luo Daizhen
, http://www.100md.com
Yichang Central Hospital，Yichang，Hubei443003.
【Abstract】 Objective To explore the diagnostic value of AgNOR technique for breast diseases.Methods Using a sliver staining technique nucleolar organizer region associated protein(AgNOR)have been studied quantiaˉtively in paraffic sections of25adenosis，12fibroadenoma，12Cystic disease，2intraduct carcinomas.Results In numbers，localization of the nucleolar，morphological typing of argyrophilic nucleolar organizer regions of benign and malignant lesions were demontrated(P<0.01)and a significant difference among fibroadenoma，cystic disease and adenosis was also found.Conclusion It suggested that AgNOR technique may be helpful in differentiating benign and malignant breast lesions and in the typing of tumors.
, 百拇医药
Key words breast tumor AgNOR quantitation study
银染核仁组成(AgNOR)技术近十几年来受到国内外学者的重视，已被广泛用于各种肿瘤的研究。笔者应用该技术对乳腺良、恶性疾病进行了定量检测，以探讨其临床意义。
1 材料与方法
1.1 标本 118例乳腺组织均取自我院手术切除、临床病理资料完整的存档标本。其中良性病变49例(腺病25例，纤维腺瘤12例，囊肿病12例)，恶性病变69例(管内癌2例，浸润性导管癌54例，特殊类型浸润癌13例)。均系女性，无年龄差异。
1.2 乳腺癌病理学分级 按Frierson等 [1] 采用的Nottingˉham方案，根据导管内癌所占比例、细胞核的多形性、核分裂数等因素分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级。
, 百拇医药
1.3 AgNOR染色及计数 切片采用银胶一步法AgNOR染色 [2] ，每例在油镜下观察100个细胞算出其平均AgNOR数/核。计数细胞的标准是恶性肿瘤应选取肿瘤细胞而不是间质细胞，良性病变应选取病变部位的细胞。每例均有HE染色切片作为对照。
1.4 AgNOR形态学类型 按许良中等的标准 [3] 分为核仁形、弥散型、聚集型、核仁内型、混合型5种类型。
1.5 统计学处理 各级间、分级指标间及颗粒类型之间的比较，均在微机上进行统计学处理。
2 结果
乳腺良恶性疾病各个细胞核内AgNOR均数及分级、分型分别见表1～3。
表1 乳腺良恶性病变的AgNOR数目 (数/核)
, 百拇医药
表2 乳腺癌各分级组的AgNOR数目
表3 118例乳腺疾患AgNOR形态分型
统计学处理结果表明:腺病与纤维腺病、囊肿病之间AgNOR数目差异均有非常显著性(P<0.01)，而乳腺纤维腺瘤与囊肿病之间的AgNOR数目差异无显著性(P>0.05);乳腺良性疾病的AgNOR数目与乳腺癌组有显著统计学意义(P<0.01);管内癌、浸润性导管癌、特殊类型浸润癌3组间AgNOR数目无统计学意义(P>0.05);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级3组间AgNOR数目无统计学意义(P>0.05)。本组118例乳腺疾患AgNOR颗粒形态学类型显示:乳腺癌以弥散型比例最高85.5%(59/69)，混合型次之7.3%(5/69)，核仁型和聚集型各占2.9%(2/69)，核仁内型仅占1.4%(1/69);良性病变以核仁型比例最高87.8%(43/49)，混合型次之6.1%(3/49)，弥散型占4.1%(2/49)，聚集型仅占2%(1/49)，良性病变未见单独的核仁内型的出现。恶性肿瘤之弥散型比例明显高于良性病变(P<0.001)，良性病变之核仁型的比例明显高于恶性肿瘤(P<0.001)，混合型在良恶性病变中的比例差异无显著性(P>0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
细胞核中的核仁组成区是核糖体DNA(rDNA)的环，它具有核糖体基因。银染技术既不与rRNA也不与rDNA结合，但与rRNA相关的酸性蛋白结合，这些蛋白被称为B 23 、C 23“AgNOR”蛋白与RNA多聚酶Ⅰ。这些蛋白将使DNA维持一种伸展的结构状态或具有某些控制rRNA基因转录的调节功能。Underwood等 [4] 认为AgNOR数目的增加可能与细胞的增殖、染色体的倍体数、转录活力的增加有关。因此，AgNOR的检测可以区分细胞的分化程度，并可作为判断细胞良恶性的标准。
1987年以来，Crocker等 [5] 开辟了AgNOR技术在诊断肿瘤病理学上的应用。他们用AgNOR计数对非何杰氏淋巴瘤进行测定，发现恶性淋巴瘤的AgNOR计数明显高于良性淋巴疾患组。学者们相继对胃 [6] 、肝 [7] 、蜘蛛膜 [8] 等组织良恶性病变的AgNOR进行研究，均显示明显差异。我们的结果提示AgNOR数目在乳腺良性疾患腺病、纤维腺瘤、囊肿病分别为2.37/核、2.80/核、2.96/核，而恶性病变的AgNOR计数多在5.98/核以上，最高者可达8.25/核，两者比较乳腺恶性疾患细胞AgNOR数目显著高于良性疾患细胞，与Smith等 [9，10] 报告一致。本文结果还显示良恶性疾患Agˉ NOR颗粒类型差异有显著性，癌以弥散型比例最高(85.5%)，良性病变以核仁型比例最高(87.8%)，与许良中等[3] 报道相似。由此可见，AgNOR颗粒类型与计数同样重要，特别是病变介于良恶性之间或细胞增生活跃者更应该注意形态类型，二者结合，更有利于良恶性疾患的鉴别诊断。我们的结果还显示出纤维腺瘤、囊肿病与乳腺腺病细胞的AgNOR数目之间差异有非常显著性(P<0.001)。以临床角度，纤维腺瘤、囊肿病被视为癌前病变，多施行手术。故AgNOR数目和颗粒类型综合分析，可为临床医师决策治疗方案提供一个新的参数。
, 百拇医药
参考文献
1 Frierson HF Jr，Wolber RA，Bercnn KW，et al.Interobserver reproˉducibility of the Nottingham Modification of the Bloom and Richardson histologic gradingscheme for infiltrating ductal carcinoma.Am J Clin Pathol，1955，103:195.
2 Xu LZ，Wang LF.Nucleolap organizer regions in aspirates of malignant lymphomas and benign disorders of lymph mades.Anal and Quant cytolˉogy and Histology，1992，14:148.
, http://www.100md.com
3 许良中，朱伟萍.AgNOR形态学分型的研究.实用肿瘤杂志，1995，10:216.
4 Vnder word JCE，Giri DD.Nucleolar organizer regions as diagnostic disˉcriminates for malignancy.J Pathol，1988，155:95.
5 Crocker J，Nar P.Nucleolar orgnizer regions in lymphomas.J Pathol，1987，151:111.
6 Suarez V.The value of NOR numbers in neoplastic and non-neoplastiˉcepithelium of stomach.Histopathology，1988，14:16.
, http://www.100md.com
7 Crocker J，Mcgovern J.Nucleolar organizer regions in normal，cirrhotic andcarci-nomatous liver.J Clin Pathol，1988，41:1044.
8 Centenco RA，Louis DN，Kupsky WJ，et al.The AgNOR technique，PCˉNA immunohistochemistry，and DNA ploidy in the evaluation if choroids plexus biopsy specimens.Am J Clin Pathol，1993，100:690.
9 Snith R，Crocker J.Evaluation of nucleolar orgnizer region associated protein in breast malignancy.Histopathology，1988，12:13.
10 Meehan SM，Magee MH，Fimls，et al.The diagnostic value of silver nuˉcleolar organizer region assessment in breast cytology.Am J Clin Pathol，1994，101:689.
作者单位:443003三峡大学第一临床医学院 湖北省宜昌市中心人民医院
(收稿日期:2003-10-25)
(编辑李年令), 百拇医药(顾纪容)
关键词 乳腺肿瘤 AgNOR 定量研究
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2004)02-0122-02
The diagnostic value of AgNOR in breast lesions
Gu Jirong，Luo Daizhen
, http://www.100md.com
Yichang Central Hospital，Yichang，Hubei443003.
【Abstract】 Objective To explore the diagnostic value of AgNOR technique for breast diseases.Methods Using a sliver staining technique nucleolar organizer region associated protein(AgNOR)have been studied quantiaˉtively in paraffic sections of25adenosis，12fibroadenoma，12Cystic disease，2intraduct carcinomas.Results In numbers，localization of the nucleolar，morphological typing of argyrophilic nucleolar organizer regions of benign and malignant lesions were demontrated(P<0.01)and a significant difference among fibroadenoma，cystic disease and adenosis was also found.Conclusion It suggested that AgNOR technique may be helpful in differentiating benign and malignant breast lesions and in the typing of tumors.
, 百拇医药
Key words breast tumor AgNOR quantitation study
银染核仁组成(AgNOR)技术近十几年来受到国内外学者的重视，已被广泛用于各种肿瘤的研究。笔者应用该技术对乳腺良、恶性疾病进行了定量检测，以探讨其临床意义。
1 材料与方法
1.1 标本 118例乳腺组织均取自我院手术切除、临床病理资料完整的存档标本。其中良性病变49例(腺病25例，纤维腺瘤12例，囊肿病12例)，恶性病变69例(管内癌2例，浸润性导管癌54例，特殊类型浸润癌13例)。均系女性，无年龄差异。
1.2 乳腺癌病理学分级 按Frierson等 [1] 采用的Nottingˉham方案，根据导管内癌所占比例、细胞核的多形性、核分裂数等因素分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级。
, 百拇医药
1.3 AgNOR染色及计数 切片采用银胶一步法AgNOR染色 [2] ，每例在油镜下观察100个细胞算出其平均AgNOR数/核。计数细胞的标准是恶性肿瘤应选取肿瘤细胞而不是间质细胞，良性病变应选取病变部位的细胞。每例均有HE染色切片作为对照。
1.4 AgNOR形态学类型 按许良中等的标准 [3] 分为核仁形、弥散型、聚集型、核仁内型、混合型5种类型。
1.5 统计学处理 各级间、分级指标间及颗粒类型之间的比较，均在微机上进行统计学处理。
2 结果
乳腺良恶性疾病各个细胞核内AgNOR均数及分级、分型分别见表1～3。
表1 乳腺良恶性病变的AgNOR数目 (数/核)
, 百拇医药
表2 乳腺癌各分级组的AgNOR数目
表3 118例乳腺疾患AgNOR形态分型
统计学处理结果表明:腺病与纤维腺病、囊肿病之间AgNOR数目差异均有非常显著性(P<0.01)，而乳腺纤维腺瘤与囊肿病之间的AgNOR数目差异无显著性(P>0.05);乳腺良性疾病的AgNOR数目与乳腺癌组有显著统计学意义(P<0.01);管内癌、浸润性导管癌、特殊类型浸润癌3组间AgNOR数目无统计学意义(P>0.05);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级3组间AgNOR数目无统计学意义(P>0.05)。本组118例乳腺疾患AgNOR颗粒形态学类型显示:乳腺癌以弥散型比例最高85.5%(59/69)，混合型次之7.3%(5/69)，核仁型和聚集型各占2.9%(2/69)，核仁内型仅占1.4%(1/69);良性病变以核仁型比例最高87.8%(43/49)，混合型次之6.1%(3/49)，弥散型占4.1%(2/49)，聚集型仅占2%(1/49)，良性病变未见单独的核仁内型的出现。恶性肿瘤之弥散型比例明显高于良性病变(P<0.001)，良性病变之核仁型的比例明显高于恶性肿瘤(P<0.001)，混合型在良恶性病变中的比例差异无显著性(P>0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
细胞核中的核仁组成区是核糖体DNA(rDNA)的环，它具有核糖体基因。银染技术既不与rRNA也不与rDNA结合，但与rRNA相关的酸性蛋白结合，这些蛋白被称为B 23 、C 23“AgNOR”蛋白与RNA多聚酶Ⅰ。这些蛋白将使DNA维持一种伸展的结构状态或具有某些控制rRNA基因转录的调节功能。Underwood等 [4] 认为AgNOR数目的增加可能与细胞的增殖、染色体的倍体数、转录活力的增加有关。因此，AgNOR的检测可以区分细胞的分化程度，并可作为判断细胞良恶性的标准。
1987年以来，Crocker等 [5] 开辟了AgNOR技术在诊断肿瘤病理学上的应用。他们用AgNOR计数对非何杰氏淋巴瘤进行测定，发现恶性淋巴瘤的AgNOR计数明显高于良性淋巴疾患组。学者们相继对胃 [6] 、肝 [7] 、蜘蛛膜 [8] 等组织良恶性病变的AgNOR进行研究，均显示明显差异。我们的结果提示AgNOR数目在乳腺良性疾患腺病、纤维腺瘤、囊肿病分别为2.37/核、2.80/核、2.96/核，而恶性病变的AgNOR计数多在5.98/核以上，最高者可达8.25/核，两者比较乳腺恶性疾患细胞AgNOR数目显著高于良性疾患细胞，与Smith等 [9，10] 报告一致。本文结果还显示良恶性疾患Agˉ NOR颗粒类型差异有显著性，癌以弥散型比例最高(85.5%)，良性病变以核仁型比例最高(87.8%)，与许良中等[3] 报道相似。由此可见，AgNOR颗粒类型与计数同样重要，特别是病变介于良恶性之间或细胞增生活跃者更应该注意形态类型，二者结合，更有利于良恶性疾患的鉴别诊断。我们的结果还显示出纤维腺瘤、囊肿病与乳腺腺病细胞的AgNOR数目之间差异有非常显著性(P<0.001)。以临床角度，纤维腺瘤、囊肿病被视为癌前病变，多施行手术。故AgNOR数目和颗粒类型综合分析，可为临床医师决策治疗方案提供一个新的参数。
, 百拇医药
参考文献
1 Frierson HF Jr，Wolber RA，Bercnn KW，et al.Interobserver reproˉducibility of the Nottingham Modification of the Bloom and Richardson histologic gradingscheme for infiltrating ductal carcinoma.Am J Clin Pathol，1955，103:195.
2 Xu LZ，Wang LF.Nucleolap organizer regions in aspirates of malignant lymphomas and benign disorders of lymph mades.Anal and Quant cytolˉogy and Histology，1992，14:148.
, http://www.100md.com
3 许良中，朱伟萍.AgNOR形态学分型的研究.实用肿瘤杂志，1995，10:216.
4 Vnder word JCE，Giri DD.Nucleolar organizer regions as diagnostic disˉcriminates for malignancy.J Pathol，1988，155:95.
5 Crocker J，Nar P.Nucleolar orgnizer regions in lymphomas.J Pathol，1987，151:111.
6 Suarez V.The value of NOR numbers in neoplastic and non-neoplastiˉcepithelium of stomach.Histopathology，1988，14:16.
, http://www.100md.com
7 Crocker J，Mcgovern J.Nucleolar organizer regions in normal，cirrhotic andcarci-nomatous liver.J Clin Pathol，1988，41:1044.
8 Centenco RA，Louis DN，Kupsky WJ，et al.The AgNOR technique，PCˉNA immunohistochemistry，and DNA ploidy in the evaluation if choroids plexus biopsy specimens.Am J Clin Pathol，1993，100:690.
9 Snith R，Crocker J.Evaluation of nucleolar orgnizer region associated protein in breast malignancy.Histopathology，1988，12:13.
10 Meehan SM，Magee MH，Fimls，et al.The diagnostic value of silver nuˉcleolar organizer region assessment in breast cytology.Am J Clin Pathol，1994，101:689.
作者单位:443003三峡大学第一临床医学院 湖北省宜昌市中心人民医院
(收稿日期:2003-10-25)
(编辑李年令), 百拇医药(顾纪容)