LN和FN在大肠癌中的表达及临床意义
【摘要】 目的 探讨层粘蛋白(laminin，LN)和纤维连接蛋白(fibronectin，FN)在大肠癌中的表达与大肠癌临床病理因素的关系。方法 采用免疫组化方法检测大肠癌和正常大肠组织中LN和FN的表达和分布。结果 正常大肠粘膜有完整的基底膜，LN和FN强表达，间质中FN广泛表达。大肠癌组织基底膜中LN和FN有不同程度的减少，甚至完全缺失。间质中FN表达无明显变化。LN和FN在大肠癌组织中的表达与癌细胞分化程度一致(P<0.01，P<0.05)。LN表达随Dukes分期增高而减少(P<0.05)，而FN表达与Dukes分期无明显相关(P>0.05)。结论 基底膜中LN和FN的表达随大肠癌细胞分化程度降低而减少，基底膜中LN的表达与Dukes分期相关。
关键词 结肠直肠肿瘤 层粘蛋白 纤维连接蛋白
【文献标识码】 B 【文章编号】 1680-6115(2004)02-0169-02
, 百拇医药 浸润和转移是影响大肠癌临床治疗效果的主要因素 [1] 。基底膜作为宿主与癌细胞之间的重要屏障，在肿瘤浸润转移中的作用日益受到重视 [2] 。已知基底膜主要由Ⅳ型胶原、层粘蛋白(LN)和纤维连接蛋白(FN)等组成，FN还是间质的重要成分。LN和FN在调节细胞运动和生长、参与细胞信息传递等功能方面有十分重要的意义。了解大肠癌中LN和FN的表达和分布情况与临床分期、分化程度的关系，有助于揭示它们在大肠癌浸润和转移中的作用。
1 材料与方法
1.1 材料 收集解放军第81医院肿瘤外科1997年1月～1998年12月间行大肠癌根治性手术切除的标本70例，男39例，女31例，年龄25～70岁，平均年龄54.5岁。术前未经过任何化疗和放疗。标本均经福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，连续切片，常规HE染色。另取正常大肠组织10例作对照。70例大肠癌中乳头状腺癌14例，管状腺癌46例，粘液腺癌8例，印戒细胞癌2例;高分化癌13例，中分化癌35例，低分化癌22例;DukesA期12例(A1期3例，A2期7例，A3期2例)，DukesB期21例，DukesC期37例。
, 百拇医药
1.2 方法 免疫组化染色。LN和FN单克隆抗体为Santa Cruz公司产品，免疫组化采用SP法，SP试剂盒为Maxim公司产品(购自福建迈新生物公司)。染色步骤:石蜡切片常规脱蜡水化;1%H 2 O 2 作用15min，PBS洗;0.05%胰蛋白酶液37℃作用30min，PBS洗;10%正常山羊血清孵育15min抑制非特异性结合;滴加一抗，4℃过夜，PBS洗;滴加二抗(生物素化兔抗鼠IgG)，37℃孵育30min，PBS洗;滴加复合物(链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液)，37℃孵育30min;DAB显色，苏木素复染，透明封片。
1.3 结果判断 光学显微镜下观察，将基底膜处的LN和FN染色程度分为:(-):癌巢周围无着色或仅有细小着色;(+):癌巢周围可见中等量的阳性着色;(++):癌巢周围可见多量的阳性着色。间质中FN染色亦分为:(-):无或极少着色;(+):中等量着色;(++):多量着色。
1.4 统计学处理 用卡方检验比较LN和FN在各组大肠癌中的表达，统计工作在SPSS8.0分析软件上完成。
, 百拇医药
2 结果
正常大肠粘膜有完整的基底膜，LN和FN强表达，间质中FN广泛表达。大肠癌组织基底膜中LN和FN有不同程 度的减少，甚至完全缺失。间质中FN表达无明显变化。大肠癌组织基底膜中LN与FN的表达和大肠癌临床病理因素的关系见表1。
表1 基底膜中LN与FN染色和大肠癌临床病理因素的关系
注:在不同Dukes分期中，LN的表达差异有显著性，χ 2 =11.54，P<0.05;LN在不同分化的大肠癌中表达差异有非常显著性，χ 2 =14.08，P<0.01;FN在不同Dukes分期中表达差异无显著性，χ 2 =2.34，P>0.05;在不同分化的大肠癌中FN表达差异有显著性，χ 2 =10.67，P<0.05
3 讨论
, 百拇医药
肿瘤细胞广泛浸润和远处转移是造成大肠癌患者死亡的主要原因。基底膜是上皮细胞间或上皮细胞与临近结缔组织的分界面，为癌细胞侵袭过程中遇到的主要屏障。基底膜主要由Ⅳ型胶原形成一种三维网状结构，并与LN和FN等连接形成细胞外基质结构，其中LN和FN是高分子量的非胶原性糖蛋白。研究发现:肿瘤细胞粘附基底膜主要由LN介导，并且发现肿瘤细胞与LN接触后能分泌一些蛋白水解酶使局部基质降解，进而实现浸润;另外，蛋白水解片段不仅可以促进癌细胞分泌更多的蛋白水解酶，还能诱导细胞的迁移、增殖、血管形成等一系列生物效应 [3] ，有关癌组织中基底膜物质的来源尚无定论，一些研究表明癌组织中的基底膜成分可能是由癌细胞合成的，且活动性癌细胞低于静止性癌细胞。本组资料研究发现大肠癌细胞质中有FN的强表达，提示癌细胞具有合成基底膜成分的能力。
正常大肠组织中有完整的基底膜，腺细胞与基质交界处有完整的LN和FN沉积，而大肠癌组织中有不同程度的缺失。高分化癌大部分基底膜是连续完整的，而在低分化癌中多不完整，LN和FN在低分化癌的表达明显低于高、中分化者(P<0.05)，这与部分报道一致，可能是由于低分化癌细胞合成分泌LN及FN的能力减弱或低分化癌组织内 的细胞分泌蛋白水解酶的活性较高[4] 。这也从一个侧面说明为什么低分化癌恶性程度高，而高分化癌恶性程度低。
, 百拇医药
LN和FN是否与癌侵袭转移相关一直存在争论，如有学者认为基底膜LN的缺失与淋巴结转移密切相关，亦有研究表明LN及FN与癌的侵袭转移均无关。我们的研究显示，LN与Dukes分期有关，随Dukes分期增高LN表达减少(P<0.05)，但不同Dukes分期中FN的阳性表达差异无显著性(P>0.05)。LN作为基底膜的重要组成部分，可能在限制大肠癌细胞向周围的浸润转移方面起一定的作用，而FN在大肠癌的侵袭转移中不起主要作用。
参考文献
1 Tayor I.Liver metastases from colorectal cancer:lessons from past and present clinical studies.Br J Surg，1996，83(4):456-460.
2 Mignatti P，Rifkin DB.Biology and biochemistry of proteinase in tumor invasion.Physiol Rev，1993，73(1):161-195.
, 百拇医药
3 Terranova VP，Hujanen ES，Martin GR.Basement membrane and the inˉvasive activity of metastatic tumor cell.J Natl Cancer Inst，1986，77(2):311-316.
4 Garbett EA，ReedMWR，Brown NJ.Proteolysis in human breast and colˉorectalcancer.Br J Cancer，1999，81(2):287-293.
作者单位:213003江苏省常州市第一人民医院
210008江苏南京解放军第81医院
(收稿日期:2003-11-01)
(编辑维 兰), 百拇医药(顾)
关键词 结肠直肠肿瘤 层粘蛋白 纤维连接蛋白
【文献标识码】 B 【文章编号】 1680-6115(2004)02-0169-02
, 百拇医药 浸润和转移是影响大肠癌临床治疗效果的主要因素 [1] 。基底膜作为宿主与癌细胞之间的重要屏障，在肿瘤浸润转移中的作用日益受到重视 [2] 。已知基底膜主要由Ⅳ型胶原、层粘蛋白(LN)和纤维连接蛋白(FN)等组成，FN还是间质的重要成分。LN和FN在调节细胞运动和生长、参与细胞信息传递等功能方面有十分重要的意义。了解大肠癌中LN和FN的表达和分布情况与临床分期、分化程度的关系，有助于揭示它们在大肠癌浸润和转移中的作用。
1 材料与方法
1.1 材料 收集解放军第81医院肿瘤外科1997年1月～1998年12月间行大肠癌根治性手术切除的标本70例，男39例，女31例，年龄25～70岁，平均年龄54.5岁。术前未经过任何化疗和放疗。标本均经福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，连续切片，常规HE染色。另取正常大肠组织10例作对照。70例大肠癌中乳头状腺癌14例，管状腺癌46例，粘液腺癌8例，印戒细胞癌2例;高分化癌13例，中分化癌35例，低分化癌22例;DukesA期12例(A1期3例，A2期7例，A3期2例)，DukesB期21例，DukesC期37例。
, 百拇医药
1.2 方法 免疫组化染色。LN和FN单克隆抗体为Santa Cruz公司产品，免疫组化采用SP法，SP试剂盒为Maxim公司产品(购自福建迈新生物公司)。染色步骤:石蜡切片常规脱蜡水化;1%H 2 O 2 作用15min，PBS洗;0.05%胰蛋白酶液37℃作用30min，PBS洗;10%正常山羊血清孵育15min抑制非特异性结合;滴加一抗，4℃过夜，PBS洗;滴加二抗(生物素化兔抗鼠IgG)，37℃孵育30min，PBS洗;滴加复合物(链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液)，37℃孵育30min;DAB显色，苏木素复染，透明封片。
1.3 结果判断 光学显微镜下观察，将基底膜处的LN和FN染色程度分为:(-):癌巢周围无着色或仅有细小着色;(+):癌巢周围可见中等量的阳性着色;(++):癌巢周围可见多量的阳性着色。间质中FN染色亦分为:(-):无或极少着色;(+):中等量着色;(++):多量着色。
1.4 统计学处理 用卡方检验比较LN和FN在各组大肠癌中的表达，统计工作在SPSS8.0分析软件上完成。
, 百拇医药
2 结果
正常大肠粘膜有完整的基底膜，LN和FN强表达，间质中FN广泛表达。大肠癌组织基底膜中LN和FN有不同程 度的减少，甚至完全缺失。间质中FN表达无明显变化。大肠癌组织基底膜中LN与FN的表达和大肠癌临床病理因素的关系见表1。
表1 基底膜中LN与FN染色和大肠癌临床病理因素的关系
注:在不同Dukes分期中，LN的表达差异有显著性，χ 2 =11.54，P<0.05;LN在不同分化的大肠癌中表达差异有非常显著性，χ 2 =14.08，P<0.01;FN在不同Dukes分期中表达差异无显著性，χ 2 =2.34，P>0.05;在不同分化的大肠癌中FN表达差异有显著性，χ 2 =10.67，P<0.05
3 讨论
, 百拇医药
肿瘤细胞广泛浸润和远处转移是造成大肠癌患者死亡的主要原因。基底膜是上皮细胞间或上皮细胞与临近结缔组织的分界面，为癌细胞侵袭过程中遇到的主要屏障。基底膜主要由Ⅳ型胶原形成一种三维网状结构，并与LN和FN等连接形成细胞外基质结构，其中LN和FN是高分子量的非胶原性糖蛋白。研究发现:肿瘤细胞粘附基底膜主要由LN介导，并且发现肿瘤细胞与LN接触后能分泌一些蛋白水解酶使局部基质降解，进而实现浸润;另外，蛋白水解片段不仅可以促进癌细胞分泌更多的蛋白水解酶，还能诱导细胞的迁移、增殖、血管形成等一系列生物效应 [3] ，有关癌组织中基底膜物质的来源尚无定论，一些研究表明癌组织中的基底膜成分可能是由癌细胞合成的，且活动性癌细胞低于静止性癌细胞。本组资料研究发现大肠癌细胞质中有FN的强表达，提示癌细胞具有合成基底膜成分的能力。
正常大肠组织中有完整的基底膜，腺细胞与基质交界处有完整的LN和FN沉积，而大肠癌组织中有不同程度的缺失。高分化癌大部分基底膜是连续完整的，而在低分化癌中多不完整，LN和FN在低分化癌的表达明显低于高、中分化者(P<0.05)，这与部分报道一致，可能是由于低分化癌细胞合成分泌LN及FN的能力减弱或低分化癌组织内 的细胞分泌蛋白水解酶的活性较高[4] 。这也从一个侧面说明为什么低分化癌恶性程度高，而高分化癌恶性程度低。
, 百拇医药
LN和FN是否与癌侵袭转移相关一直存在争论，如有学者认为基底膜LN的缺失与淋巴结转移密切相关，亦有研究表明LN及FN与癌的侵袭转移均无关。我们的研究显示，LN与Dukes分期有关，随Dukes分期增高LN表达减少(P<0.05)，但不同Dukes分期中FN的阳性表达差异无显著性(P>0.05)。LN作为基底膜的重要组成部分，可能在限制大肠癌细胞向周围的浸润转移方面起一定的作用，而FN在大肠癌的侵袭转移中不起主要作用。
参考文献
1 Tayor I.Liver metastases from colorectal cancer:lessons from past and present clinical studies.Br J Surg，1996，83(4):456-460.
2 Mignatti P，Rifkin DB.Biology and biochemistry of proteinase in tumor invasion.Physiol Rev，1993，73(1):161-195.
, 百拇医药
3 Terranova VP，Hujanen ES，Martin GR.Basement membrane and the inˉvasive activity of metastatic tumor cell.J Natl Cancer Inst，1986，77(2):311-316.
4 Garbett EA，ReedMWR，Brown NJ.Proteolysis in human breast and colˉorectalcancer.Br J Cancer，1999，81(2):287-293.
作者单位:213003江苏省常州市第一人民医院
210008江苏南京解放军第81医院
(收稿日期:2003-11-01)
(编辑维 兰), 百拇医药(顾)