执业药师考试辅导：黄酮类化合物——中药化学(十六)
9、如何用色谱法鉴别黄酮类化合物？
1.纸色谱(PC)：适用于分离各种天然黄酮类化合物及其苷类混合物。混合物的鉴定常采用双向色谱法。以黄酮苷类来说，一般第一向展开采用某种醇性溶剂，如正丁醇-醋酸-水(4：1：5，上层)等，主要是根据分配作用原理进行分离。第二向展开溶剂则用水或其他含水溶液，如2～6%醋酸等，主要是根据吸附作用原理进行分离。
黄酮类化合物苷元中，平面性分子如黄酮、黄酮醇、查耳酮等，用含水溶剂如3%～5%HOAC展开时，几乎停留在原点不动(Rf<0.02)；而非平面性分子如二氢黄酮、二氢黄酮醇、二氢查耳酮等，因亲水性较强，Rf
值较大( 0.10～0.30)。黄酮类化合物分子中羟基苷化后，极性随之增大，在醇性展开剂中Rf
值相应降低，同一类型苷元，Rf值依次为：苷元>单糖苷>双糖苷。但在用水或2～8%醋酸、3%氯化钠水溶液或1%盐酸展开时，则苷元几乎停留在原点不动，Rf
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值大小顺序为：苷元<单糖苷<双糖苷。
2.硅胶薄层色谱：用于分离和鉴定弱极性黄酮类化合物。分离黄酮苷元常用的展开剂是甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5：4：1)。
3.聚酰胺薄层色谱：特别适合于分离含游离酚羟基的黄酮及其苷类。展开剂中多含有醇、酸和水。
10、用紫外及可见光谱对黄酮类化合物进行结构测定的一般程序是什么？
(1)测定样品在甲醇溶液中的UV光谱。
(2)测定样品在甲醇中加入各种诊断试剂后得到的UV及可见光谱。常用的诊断试剂有甲醇钠(NaOMe)、醋酸钠(NaOAc)、醋酸钠-硼酸(NaOAc-H3BO3)、三氯化铝(AlCl3)、三氯化铝-盐酸(Al?鄄Cl3-HCl)等。
, http://www.100md.com (3)样品如为黄酮苷类，需先进行水解或甲基化后水解，得到苷元或甲基化苷元，再测定苷元或其衍生物的UV光谱。
11、黄酮类化合物在甲醇溶液中的UV光谱有何特征？
1.黄酮及黄酮醇类：黄酮、黄酮醇等多数黄酮类化合物，因分子中存在桂皮酰基及苯甲酰基组成的交叉共轭体系，故其甲醇溶液在200～400nm的区域内存在两个主要的紫外吸收带，称为峰带Ⅰ(300～400nm)及峰带Ⅱ(220～280nm)。黄酮、黄酮醇可通过带I的最大吸收峰波长予以鉴别，小于350nm者为黄酮，而大于350nm者为黄酮醇。
2.查耳酮及橙酮类：共同特征是带Ⅰ很强，为主峰，而带Ⅱ较弱，为次强峰。查耳酮中，带Ⅱ位于220～270nm，带Ⅰ位于340～390nm，有时分裂为Ⅰa (340～390nm)及Ⅰb(300～320nm)。
3.异黄酮、二氢黄酮及二氢黄酮醇：除有由A环苯甲酰基系统引起的带Ⅱ吸收(主峰)外，因B环不与吡喃酮环上的碳基共轭(或共轭很弱)，带Ⅰ很弱，常在主峰的长波方向处有一肩峰。根据主峰的位置，可以区别异黄酮与二氢黄酮及二氢黄酮醇。前者在245～270nm，后者在270～295nm。
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12、加入诊断试剂后黄酮及黄酮醇类化合物的紫外光谱位移及其在结构测定中的意义如何？
13、黄酮类化合物的1HMNR谱有何主要特征？
一、A环质子
1.5,7-二羟基黄酮：H-6及H-8将分别作为二重峰(J=2.5Hz)，出现在δ5.7～6.9区域内，且H-6总是比H-8位于高场。
2.7-羟基黄酮：A环上有H-5、H-6、H-8三个芳香质子。H-5因有C-4位羰基强烈的负屏蔽效应的影响，以及H-6的邻偶作用，将作为一个二重峰(J=9.0Hz)出现在δ8.0左右。H-6因有H-5的邻偶(J=9.0Hz)及H-8的间偶(J=2.5Hz)作用，将表现为一个双二重峰。H-8
因有H-6的间位偶合作用，显现为一个裂距较小的二重峰(J=2.5Hz)。
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二、B环质子
1.4’-氧取代黄酮：B环质子分为H-3’，H-5’和H-2’，H-6’两组，各以相当于2个氢的双峰信号((J=8.5Hz)出现在δ6.5～7.9区域。H-3’，H-5’的化学位移总是比H-2’，H-6’的化学位移值小，原因是有4’-OR取代基的屏蔽作用，以及C环对H-2’，H-6’的负屏蔽效应。
2.3’,4’,5’-三氧取代黄酮类：当B环有3’,4’,5’-羟基时，则H-2’及H-6’将作为相当于两上质子的一个单峰，出现在δ6.50～7.50范围内。
三、C环质子
1.黄酮类：H-3常常作为一个尖锐的单峰信号出现在δ6.30处。
2.异黄酮类：异黄酮上的H-2，因正好位于羰基的β位，且通过碳和氧相接，故将作为一个单峰出现在比一般芳香质子较低的磁场区(δ7.60～7.80)。
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3.二氢黄酮及二氢黄酮醇类
①二氢黄酮类：H-2与两个磁不等同的H-3偶合(Jtrans=11.0Hz，Jcis=5.0Hz)，故作为一个双二重峰出现，中心位于δ5.2处。两个H-3，因有相互偕偶(J=17.0Hz)及H-2的邻偶，将分别作为一个双二重峰出现，中心位于δ2.80处，但往往相互重迭。
②二氢黄酮醇类：在天然存在的二氢黄酮醇中，H-2及H-3多为反式二直立键，故分别作为一个二重峰出现(J=11.0Hz)。H-2位于δ4.9前后，H-3则位于δ4.30左右。
14、如何利用13CMNR谱推断黄酮类化合物的骨架类型？
在黄酮类化合物的13CNMR谱中，可根据中央三个碳原子信号(C-2、C-3和C4=O)的波谱特征，推断黄酮类化合物的骨架类型.(刘 斌 北京中医药大学中药学院), http://www.100md.com
1.纸色谱(PC)：适用于分离各种天然黄酮类化合物及其苷类混合物。混合物的鉴定常采用双向色谱法。以黄酮苷类来说，一般第一向展开采用某种醇性溶剂，如正丁醇-醋酸-水(4：1：5，上层)等，主要是根据分配作用原理进行分离。第二向展开溶剂则用水或其他含水溶液，如2～6%醋酸等，主要是根据吸附作用原理进行分离。
黄酮类化合物苷元中，平面性分子如黄酮、黄酮醇、查耳酮等，用含水溶剂如3%～5%HOAC展开时，几乎停留在原点不动(Rf<0.02)；而非平面性分子如二氢黄酮、二氢黄酮醇、二氢查耳酮等，因亲水性较强，Rf
值较大( 0.10～0.30)。黄酮类化合物分子中羟基苷化后，极性随之增大，在醇性展开剂中Rf
值相应降低，同一类型苷元，Rf值依次为：苷元>单糖苷>双糖苷。但在用水或2～8%醋酸、3%氯化钠水溶液或1%盐酸展开时，则苷元几乎停留在原点不动，Rf
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值大小顺序为：苷元<单糖苷<双糖苷。
2.硅胶薄层色谱：用于分离和鉴定弱极性黄酮类化合物。分离黄酮苷元常用的展开剂是甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5：4：1)。
3.聚酰胺薄层色谱：特别适合于分离含游离酚羟基的黄酮及其苷类。展开剂中多含有醇、酸和水。
10、用紫外及可见光谱对黄酮类化合物进行结构测定的一般程序是什么？
(1)测定样品在甲醇溶液中的UV光谱。
(2)测定样品在甲醇中加入各种诊断试剂后得到的UV及可见光谱。常用的诊断试剂有甲醇钠(NaOMe)、醋酸钠(NaOAc)、醋酸钠-硼酸(NaOAc-H3BO3)、三氯化铝(AlCl3)、三氯化铝-盐酸(Al?鄄Cl3-HCl)等。
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11、黄酮类化合物在甲醇溶液中的UV光谱有何特征？
1.黄酮及黄酮醇类：黄酮、黄酮醇等多数黄酮类化合物，因分子中存在桂皮酰基及苯甲酰基组成的交叉共轭体系，故其甲醇溶液在200～400nm的区域内存在两个主要的紫外吸收带，称为峰带Ⅰ(300～400nm)及峰带Ⅱ(220～280nm)。黄酮、黄酮醇可通过带I的最大吸收峰波长予以鉴别，小于350nm者为黄酮，而大于350nm者为黄酮醇。
2.查耳酮及橙酮类：共同特征是带Ⅰ很强，为主峰，而带Ⅱ较弱，为次强峰。查耳酮中，带Ⅱ位于220～270nm，带Ⅰ位于340～390nm，有时分裂为Ⅰa (340～390nm)及Ⅰb(300～320nm)。
3.异黄酮、二氢黄酮及二氢黄酮醇：除有由A环苯甲酰基系统引起的带Ⅱ吸收(主峰)外，因B环不与吡喃酮环上的碳基共轭(或共轭很弱)，带Ⅰ很弱，常在主峰的长波方向处有一肩峰。根据主峰的位置，可以区别异黄酮与二氢黄酮及二氢黄酮醇。前者在245～270nm，后者在270～295nm。
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12、加入诊断试剂后黄酮及黄酮醇类化合物的紫外光谱位移及其在结构测定中的意义如何？
13、黄酮类化合物的1HMNR谱有何主要特征？
一、A环质子
1.5,7-二羟基黄酮：H-6及H-8将分别作为二重峰(J=2.5Hz)，出现在δ5.7～6.9区域内，且H-6总是比H-8位于高场。
2.7-羟基黄酮：A环上有H-5、H-6、H-8三个芳香质子。H-5因有C-4位羰基强烈的负屏蔽效应的影响，以及H-6的邻偶作用，将作为一个二重峰(J=9.0Hz)出现在δ8.0左右。H-6因有H-5的邻偶(J=9.0Hz)及H-8的间偶(J=2.5Hz)作用，将表现为一个双二重峰。H-8
因有H-6的间位偶合作用，显现为一个裂距较小的二重峰(J=2.5Hz)。
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二、B环质子
1.4’-氧取代黄酮：B环质子分为H-3’，H-5’和H-2’，H-6’两组，各以相当于2个氢的双峰信号((J=8.5Hz)出现在δ6.5～7.9区域。H-3’，H-5’的化学位移总是比H-2’，H-6’的化学位移值小，原因是有4’-OR取代基的屏蔽作用，以及C环对H-2’，H-6’的负屏蔽效应。
2.3’,4’,5’-三氧取代黄酮类：当B环有3’,4’,5’-羟基时，则H-2’及H-6’将作为相当于两上质子的一个单峰，出现在δ6.50～7.50范围内。
三、C环质子
1.黄酮类：H-3常常作为一个尖锐的单峰信号出现在δ6.30处。
2.异黄酮类：异黄酮上的H-2，因正好位于羰基的β位，且通过碳和氧相接，故将作为一个单峰出现在比一般芳香质子较低的磁场区(δ7.60～7.80)。
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3.二氢黄酮及二氢黄酮醇类
①二氢黄酮类：H-2与两个磁不等同的H-3偶合(Jtrans=11.0Hz，Jcis=5.0Hz)，故作为一个双二重峰出现，中心位于δ5.2处。两个H-3，因有相互偕偶(J=17.0Hz)及H-2的邻偶，将分别作为一个双二重峰出现，中心位于δ2.80处，但往往相互重迭。
②二氢黄酮醇类：在天然存在的二氢黄酮醇中，H-2及H-3多为反式二直立键，故分别作为一个二重峰出现(J=11.0Hz)。H-2位于δ4.9前后，H-3则位于δ4.30左右。
14、如何利用13CMNR谱推断黄酮类化合物的骨架类型？
在黄酮类化合物的13CNMR谱中，可根据中央三个碳原子信号(C-2、C-3和C4=O)的波谱特征，推断黄酮类化合物的骨架类型.(刘 斌 北京中医药大学中药学院), http://www.100md.com