重组体pcDNA3.1(+)-tyr的构建及在小鼠NIH3T3细胞中的表达
黑色素瘤细胞|一元酚单氧酶,遗传学|质粒|PCDNa3|1(+)|基因表达,重组体PCDNa3.1(+)-TyR的构建及在小鼠NIH3T3细胞中的表达,关键词：
参见附件(685kb)。
吉琼梅；朱振宇；张海涛；李秀英；岳滔；李茜；马涧泉 中山大学中山医学院生物化学教研室 广东广州 510080 中山大学学报 2003 4
关键词：黑色素瘤细胞；一元酚单氧酶/遗传学；质粒；pcDNA3；1(+)；基因表达
[目的]克隆酪氨酸酶基因(tyr),构建pcDNA3.1(+)-tyr真核表达重组体,并导入NIH3T3细胞表达。[方法]用RT-PCR法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆tyr全长cDNA片段,利用DNA重组技术将其定向插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)的T7启动子下游,并用脂质体法导入NIH3T3细胞,RT-PCR,酪氨酸酶活性测定及多巴染色法检测tyr的表达。[结果]成功克隆1.74kb的全长tyr cDNA片段,经测序证实与GenBank所报道的序列完全一致,tyr准确克隆入pcDNA3.1(+)的多克隆位点,RT-PCR及酪氨酸酶活性测定等方法检测到转染了重组体的NIH3T3细胞中有tyr的表达。[结论]本实验成功构建了pcDNA3.1(+)-t ...
关键词：黑色素瘤细胞；一元酚单氧酶/遗传学；质粒；pcDNA3；1(+)；基因表达
[目的]克隆酪氨酸酶基因(tyr),构建pcDNA3.1(+)-tyr真核表达重组体,并导入NIH3T3细胞表达。[方法]用RT-PCR法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆tyr全长cDNA片段,利用DNA重组技术将其定向插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)的T7启动子下游,并用脂质体法导入NIH3T3细胞,RT-PCR,酪氨酸酶活性测定及多巴染色法检测tyr的表达。[结果]成功克隆1.74kb的全长tyr cDNA片段,经测序证实与GenBank所报道的序列完全一致,tyr准确克隆入pcDNA3.1(+)的多克隆位点,RT-PCR及酪氨酸酶活性测定等方法检测到转染了重组体的NIH3T3细胞中有tyr的表达。[结论]本实验成功构建了pcDNA3.1(+)-t ...
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