耐甲氧西林葡萄球菌三种常规检测方法的比较评价
【摘要】 目的 比较分析耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)三种临床常用检测方法对耐甲氧西林葡萄球菌的检出率。方法 同时采用普通M-H平板，1μg/ml苯唑西林药敏纸片扩散法，含4%NaCl的M-H平板、1μg/ml苯唑西林药敏纸片扩散法及含4%NaCl、6μg/ml苯唑西林琼脂筛选法对临床分离的51株葡萄球菌进行检测，比较三种方法对MRS的检出率。结果 对51株葡萄球菌(凝固酶阳性13株，凝固酶阴性38株)，三种方法对MRS的检出率分别为72.55%、70.59%和50.98%。普通M-H平板药敏纸片扩散法和含4%NaCl的M-H平板药敏纸片扩散法MRS检出率差异无显著性(P>0.05)，两种纸片扩散法与琼脂筛选法在MRS检出率差异均有显著性(P<0.05)。结论 纸片扩散法对MRS的检出率明显高于作为MRS检测推荐方法的含盐琼脂平板筛选法。
关键词 耐甲氧西林葡萄球菌 纸片扩散法 琼脂筛选法
【文献标识码】 B 【文章编号】 1606-8106(2004)03-0261-02
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耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)是医院内感染的常见病原菌之一，常散在或暴发流行，由于其多重耐药性，现已成为威胁健康的世界性难题。有效预防和控制其感染的关键是及时准确地检出MRS，为临床合理选择抗生素提供依据 [1] 。MRS的检测方法有苯唑西林纸片扩散法、微量肉汤稀释法、琼脂筛选法、琼脂稀释法及PCR检测mecA基因等 [2] ，我们对临床常用的普通M-H平板苯唑西林纸片扩散法，含4%NaCl的M-H平板苯唑西林纸片扩散法和琼脂筛选法进行了比较研究，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 (1)菌株来源:51株试验菌株来自临床标本，经常规分离鉴定得到。包括金黄色葡萄球菌(SA)13株，凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)38株。MRS阳性参考菌株ATCC (R) 43300，MRS阴性金黄色葡萄球菌ATCC25923，购自云南省临检中心。(2)M-H培养基:购自杭州天和生物制品有限公司。(3)抗菌药物:1μg/片苯唑西林药敏纸片购自北京天坛生物制品有限公司，苯唑西林标准品购自重庆药友制药有限公司(批号:010403)。(4)MRS琼脂筛选培养基:配制M-H琼脂平板时加入4%NaCl，经高压灭菌，冷却至50℃时 加入苯唑西林，使最终浓度为6μg/ml倾注平板。
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1.2 方法 按NCCLs相关文件执行。
1.2.1 普通M-H平板纸片扩散法 配制0.5麦氏单位菌液接种于普通M-H平板，贴1μg/片苯唑西林药敏纸片，35℃，24h观察结果(CNS孵育48h)，金黄色葡萄球菌抑菌圈≥13为敏感，11～12为中介，≤10为耐药，凝固酶阴性葡萄球菌≥18为敏感，≤17为耐药(48h观察结果)。
1.2.2 含4%NaCl的M-H平板纸片扩散法 在M-H培养基中加入4%NaCl倾注平板，实验方法和判读标准同普通M-H平板纸片扩散法。
1.2.3 琼脂筛选法 在含4%NaCl，6μg/ml苯唑西林M-H平板中点种0.5麦氏单位菌液，经35℃，24h(CNS48h)孵育，只要有一个菌落生长即判断为MRS。
1.2.4 质量控制 以金黄色葡萄球菌ATCC (R) 43300为MRS阳性参考菌株，金黄色葡萄球菌ATCC25923为MRS阴性参考菌株及药敏质控菌株与实验菌株同时进行检测。
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2 结果三种方法对MRS的检出率见表1。
表1 三种方法对MRS的检出率
三种方法检出率进行χ 2 检验，普通M-H平板药敏纸片扩散法耐药株检出率与琼脂筛选法耐药株检出率差异有显著性(χ 2 =5.02，P<0.05)。含4%NaCl的M-H平板药敏纸片扩散法检测的耐药率与琼脂筛选法所得的耐药率差异有显著性(χ 2 =4.25，P<0.05)。两种纸片法差异无显著性(χ 2 =0.18，P>0.05)。
3 讨论
由于纸片扩散法操作简便，可以和普通药敏试验同时进行，在多种MRS检测方法中，目前很多临床常规微生物实验室仍在采用这种方法，但从我们的实验结果看，无论是普通药敏纸片扩散法还是加入4%NaCl的M-H平板药敏纸片扩散法MRS的检出率都明显高于琼脂平板筛选法，结果势必造成过多的假阳性，给临床选择抗菌药物带来不便，也会对MRS的流行病学及耐药性统计造成一定的不准确性。这应引起微生物实验室工作人员应有的重视，加入4%NaCl可克服葡萄球菌生长的异质性，使纸片法抑菌圈明显，易于判断，但这并不能显著提高其准确性。因此，为了提高MRS检测结果的准确性，临床常规试验室中应以含盐琼脂平板筛选法取代纸片扩散法作为MRS的常规检测方法，为了提高准确性和快速性，目前商品化的几种mecA基因乳胶检测法也是较好的可采用方法 [3] 。
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参考文献
1 马纪平，苏建荣.耐甲氧苯青霉素葡萄球菌.中华检验医学杂 志，1996，19:187-189.
2 赵玉坤，娄金丽，白华，等.耐甲氧西林葡萄球菌的临床检测.中华检验医学杂志，1996，19:361-363.
3 孔海深，徐根云，姜慧芬，等.乳胶凝集试验快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌.中华检验医学杂志，2003，26:695-696.
作者单位:650051云南省昆明市延安医院检验科
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关键词 耐甲氧西林葡萄球菌 纸片扩散法 琼脂筛选法
【文献标识码】 B 【文章编号】 1606-8106(2004)03-0261-02
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耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)是医院内感染的常见病原菌之一，常散在或暴发流行，由于其多重耐药性，现已成为威胁健康的世界性难题。有效预防和控制其感染的关键是及时准确地检出MRS，为临床合理选择抗生素提供依据 [1] 。MRS的检测方法有苯唑西林纸片扩散法、微量肉汤稀释法、琼脂筛选法、琼脂稀释法及PCR检测mecA基因等 [2] ，我们对临床常用的普通M-H平板苯唑西林纸片扩散法，含4%NaCl的M-H平板苯唑西林纸片扩散法和琼脂筛选法进行了比较研究，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 (1)菌株来源:51株试验菌株来自临床标本，经常规分离鉴定得到。包括金黄色葡萄球菌(SA)13株，凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)38株。MRS阳性参考菌株ATCC (R) 43300，MRS阴性金黄色葡萄球菌ATCC25923，购自云南省临检中心。(2)M-H培养基:购自杭州天和生物制品有限公司。(3)抗菌药物:1μg/片苯唑西林药敏纸片购自北京天坛生物制品有限公司，苯唑西林标准品购自重庆药友制药有限公司(批号:010403)。(4)MRS琼脂筛选培养基:配制M-H琼脂平板时加入4%NaCl，经高压灭菌，冷却至50℃时 加入苯唑西林，使最终浓度为6μg/ml倾注平板。
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1.2 方法 按NCCLs相关文件执行。
1.2.1 普通M-H平板纸片扩散法 配制0.5麦氏单位菌液接种于普通M-H平板，贴1μg/片苯唑西林药敏纸片，35℃，24h观察结果(CNS孵育48h)，金黄色葡萄球菌抑菌圈≥13为敏感，11～12为中介，≤10为耐药，凝固酶阴性葡萄球菌≥18为敏感，≤17为耐药(48h观察结果)。
1.2.2 含4%NaCl的M-H平板纸片扩散法 在M-H培养基中加入4%NaCl倾注平板，实验方法和判读标准同普通M-H平板纸片扩散法。
1.2.3 琼脂筛选法 在含4%NaCl，6μg/ml苯唑西林M-H平板中点种0.5麦氏单位菌液，经35℃，24h(CNS48h)孵育，只要有一个菌落生长即判断为MRS。
1.2.4 质量控制 以金黄色葡萄球菌ATCC (R) 43300为MRS阳性参考菌株，金黄色葡萄球菌ATCC25923为MRS阴性参考菌株及药敏质控菌株与实验菌株同时进行检测。
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2 结果三种方法对MRS的检出率见表1。
表1 三种方法对MRS的检出率
三种方法检出率进行χ 2 检验，普通M-H平板药敏纸片扩散法耐药株检出率与琼脂筛选法耐药株检出率差异有显著性(χ 2 =5.02，P<0.05)。含4%NaCl的M-H平板药敏纸片扩散法检测的耐药率与琼脂筛选法所得的耐药率差异有显著性(χ 2 =4.25，P<0.05)。两种纸片法差异无显著性(χ 2 =0.18，P>0.05)。
3 讨论
由于纸片扩散法操作简便，可以和普通药敏试验同时进行，在多种MRS检测方法中，目前很多临床常规微生物实验室仍在采用这种方法，但从我们的实验结果看，无论是普通药敏纸片扩散法还是加入4%NaCl的M-H平板药敏纸片扩散法MRS的检出率都明显高于琼脂平板筛选法，结果势必造成过多的假阳性，给临床选择抗菌药物带来不便，也会对MRS的流行病学及耐药性统计造成一定的不准确性。这应引起微生物实验室工作人员应有的重视，加入4%NaCl可克服葡萄球菌生长的异质性，使纸片法抑菌圈明显，易于判断，但这并不能显著提高其准确性。因此，为了提高MRS检测结果的准确性，临床常规试验室中应以含盐琼脂平板筛选法取代纸片扩散法作为MRS的常规检测方法，为了提高准确性和快速性，目前商品化的几种mecA基因乳胶检测法也是较好的可采用方法 [3] 。
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参考文献
1 马纪平，苏建荣.耐甲氧苯青霉素葡萄球菌.中华检验医学杂 志，1996，19:187-189.
2 赵玉坤，娄金丽，白华，等.耐甲氧西林葡萄球菌的临床检测.中华检验医学杂志，1996，19:361-363.
3 孔海深，徐根云，姜慧芬，等.乳胶凝集试验快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌.中华检验医学杂志，2003，26:695-696.
作者单位:650051云南省昆明市延安医院检验科
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