健肝糖浆Ⅰ号质量标准的制定
【摘要】 目的 建立健肝糖浆Ⅰ号(大黄、虎杖、苦参、茵陈等)的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别大黄、苦参、茵陈;用HPLC法对制剂中的大黄素进行了定量分析;流动相:甲醇-水(45:55);流速0.8ml/min，检测波长270nm，灵敏度0.02AUFS。结果 大黄素在7.2μg～44.0μg范围内线性关系良好，平均回收率98.14%;RSD为0.97%。结论 本法操作简便，准确、可靠，可有效控制制剂的质量。
关键词 质量标准 大黄素 薄层色谱法 高效液相色谱法
【文献标识码】 A 【文章编号】1609-6614(2004)06-0518-02
Formulation on the quality standard of invigorating-liver syrup No.1
Tang Fenglei，Yu Zhongxing，Zhang Dong
, 百拇医药
Changzhou Municipal3rd People’s Hospital，Changzhou213001.
【Abstract】 Objective Establish the quality standard of Jian Gan No l.syrups.Methods TLC method was used to identify the drugs of Rhuhard，kusheng and capillaris and HPLC method was used to determinate the contents of Emodin.The mobile phase consisted of methanol-water(45:55);The flow rate was0.8ml/min，the detection wavelength was270nm.The sensibility was0.02AUFS.Results The Emodin revealed linearity in the range of7.2μg～44.0μg，the average recovery of Emodin was98.14%，RSD was0.97%.Conclusion This method was simple，accurate and reliable，and it was effective to control the quality of preparation.
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Key words quality standard emodin TLC HPLC
健肝糖浆Ⅰ号(简称样品)是我院的自制制剂，由茵陈、苦参、夏枯草、大黄、赤芍、虎杖等11味中药材组成，具有清热解毒，利湿退黄的功效，适用于急慢性黄疸型肝炎。该制剂已经临床长期应用，疗效确切。
1 仪器与试药
1.1 仪器 waters-510高效液相色谱仪，486紫外检测器，waters-510泵，WDL-95色谱工作站(大连物理化学研究所);紫外荧光仪(宜兴市和桥科静仪器厂)，分析天平(上海市第二天平仪器厂)。
1.2 试药 大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号0756-200110);大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号796-200107);苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号805-200005);健肝糖浆Ⅰ号样品由本院制剂室提供(批号000321，000408，000516);处方药材由镇江药材公司提供，经鉴定为正品。甲醇为色谱级，其它所用试剂均为分析纯。
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2 薄层色谱鉴别 [1]
2.1 大黄和虎杖的薄层色谱鉴别
2.1.1 样品和对照品溶液的制备 取样品5ml，加水10ml稀释，再加盐酸1ml，直火加热30min，放冷，用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚提取液，再用5%碳酸氢钠溶液萃取，直至萃取完全，弃去碳酸氢钠溶液，乙醚提取液再用5%氢氧化钠溶液萃取，直至萃取完全，弃去乙醚溶液，氢氧化钠溶液用盐酸调至ph=3，继续用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚提取液，水浴蒸干，残渣用1ml甲醇溶解，作为样品溶液。取大黄素和大黄酚对照品各1mg，用1ml甲醇溶解，作为对照品溶液。另按处方制备方法制备不含大黄和虎杖的空白对照液。
2.1.2 薄层层析 分别用毛细管分别吸取样品溶液、对照品液及空白对照品溶液各约10μl点样，以氯仿-乙酸乙酯(8:2)的溶液为展开剂上行展开，展开距为15cm，烘干后即见样品溶液和对照品液在相应位置显相同的黄色斑点，而空白对照液在相应处无斑点。
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2.2 苦参的薄层色谱鉴别
2.2.1 样品溶液的制备 取本品5ml，用盐酸调至pH=3，振摇数分钟，用乙醚提取3次，每次20ml，弃去乙醚提取液，水溶液用碳酸氢钠调至pH=10，继续用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚提取液，水浴蒸干，残渣用1ml甲醇溶液，作为样品溶液。取苦参碱对照品1mg，用1ml甲醇溶解，作为对照品溶液。另按处方制备方法制备不含苦参的空白对照液。
2.2.2 薄层层析 分别用毛细管分别吸取样品溶液、对照品液及空白对照品溶液各约10μl点样，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2:4:2:1)的上层溶液为展开剂上行展开，展开距为15cm，烘干后依次喷以碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液，见样品溶液和标准品液在相应位置显相同的灰蓝色斑点，而空白对照液在相应处无斑点。
2.3 茵陈的薄层色谱鉴别
2.3.1 样品溶液的制备 取本品5ml，用氯仿提取3次，每次20ml，弃去氯仿液，继用乙酸乙酯萃取2次，每次30ml，乙酸乙酯提取液加入无水硫酸钠脱水，然后滤过，除去硫酸钠，水浴蒸干溶剂，残渣用2ml乙酸乙酯溶解，作为样品溶液。取茵陈2g，用水浸泡2h，然后直火煎煮，水煎煮液过滤，滤液同样品制备方法制备，得到的残渣用2ml乙酸乙酯溶解，作为对照品溶液。另按处方制备不含茵陈的空白对照液。
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2.3.2 薄层层析 分别用毛细血管分别吸取样品溶液、对照品液及空白对照品溶液各约10μl点样，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(4:4:2)为展开剂上行展开，展开距为15cm，烘干后见样品溶液和标准品液在相应位置至少有两个相同颜色的斑点。而空白对照液在相应处无斑点。
3 大黄素的含量测定
3.1 色谱条件 色谱柱waters Nova-PaK C 18 柱(3.9×150mm);流动相:甲醇-水(45:55);流速0.8ml/min;检测波长270nm;灵敏度0.02AUFS。柱温:20℃，对照品及样品的色谱图见图1。
3.2 标准溶液的制备 精密称取干燥至恒重的大黄素对照品10mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准品溶液。
3.3 标准曲线的绘制 精密量取标准溶液2ml，4ml，6ml，8ml，10ml，分别置50ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，各取10μl进样，以峰面积为纵坐标(Y)，浓度为横坐标(X)，进行线性回归，得回归方程:Y=0.1671X-0.0610(r=0.9997)，表明在7.2μg～44.0μg范围内，线性关系良好。
, 百拇医药
3.4 精密度试验 取对照品溶液，重复进样5次，每次进样10μl，RSD=2.03%(n=3)
3.5 加样回收率试验 取已知含量的样品液，加入一定量的大黄素对照品，以下按标准曲线项操作，10μl进样，得平均加样回收率为98.14%，结果见表1。
3.6 样品液的大黄素含量测定 取健肝糖浆Ⅰ号1ml，边振摇边加入无水乙醇约30ml，去沉淀，取浑浊液，继续加无水乙醇至50ml，超声混匀，过滤，取续滤液10ml，水浴蒸干溶液，残留物加甲醇溶解并定容至10ml，取10μl进样，按标准曲线项方法测定峰面积，计算样品浓度，结果见表2。
表1 回收率试验结果 (n=3)
表2 样品溶液大黄素含量 (n=3)
4 讨论
, 百拇医药
4.1 大黄、虎杖、苦参为处方中主要药材，因为这3味药材中的主要成分有明显的酸碱性，所以在其薄层色谱鉴别中，采用了多次酸碱萃取的方法，以达到尽可能的分离。试验表明，该方法提取分离效果明显，薄层板上成分分离也很清晰。
4.2 本制剂为糖浆剂，为避免糖分对大黄素含量测定产生影响，故先用醇沉法将样品中大量糖分沉淀分离除去。
4.3 本文检测波长采用270nm，而没有采用通常的蒽醌检测波长254nm [2] ，主要是由于在此波长处可基本排除共存药物和杂质的干扰，分离度较好。
4.4 健肝糖浆Ⅰ号为纯中药制剂，活性成分多。本文以大黄和虎杖中大黄素为质量质控标准，HPLC试验方法可靠，操作简单，结果准确。
参考文献
1 唐廷国.中成药薄层色谱鉴别.北京:人民卫生出版社，1995，6.
2 曹红，刘云.高效液相色谱法测定几种中成药中大黄素的含量.药物分析杂志，1998，18(1):3.
作者单位:213001江苏省常州市第三人民医院
(编辑罗 彬), 百拇医药
关键词 质量标准 大黄素 薄层色谱法 高效液相色谱法
【文献标识码】 A 【文章编号】1609-6614(2004)06-0518-02
Formulation on the quality standard of invigorating-liver syrup No.1
Tang Fenglei，Yu Zhongxing，Zhang Dong
, 百拇医药
Changzhou Municipal3rd People’s Hospital，Changzhou213001.
【Abstract】 Objective Establish the quality standard of Jian Gan No l.syrups.Methods TLC method was used to identify the drugs of Rhuhard，kusheng and capillaris and HPLC method was used to determinate the contents of Emodin.The mobile phase consisted of methanol-water(45:55);The flow rate was0.8ml/min，the detection wavelength was270nm.The sensibility was0.02AUFS.Results The Emodin revealed linearity in the range of7.2μg～44.0μg，the average recovery of Emodin was98.14%，RSD was0.97%.Conclusion This method was simple，accurate and reliable，and it was effective to control the quality of preparation.
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Key words quality standard emodin TLC HPLC
健肝糖浆Ⅰ号(简称样品)是我院的自制制剂，由茵陈、苦参、夏枯草、大黄、赤芍、虎杖等11味中药材组成，具有清热解毒，利湿退黄的功效，适用于急慢性黄疸型肝炎。该制剂已经临床长期应用，疗效确切。
1 仪器与试药
1.1 仪器 waters-510高效液相色谱仪，486紫外检测器，waters-510泵，WDL-95色谱工作站(大连物理化学研究所);紫外荧光仪(宜兴市和桥科静仪器厂)，分析天平(上海市第二天平仪器厂)。
1.2 试药 大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号0756-200110);大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号796-200107);苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号805-200005);健肝糖浆Ⅰ号样品由本院制剂室提供(批号000321，000408，000516);处方药材由镇江药材公司提供，经鉴定为正品。甲醇为色谱级，其它所用试剂均为分析纯。
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2 薄层色谱鉴别 [1]
2.1 大黄和虎杖的薄层色谱鉴别
2.1.1 样品和对照品溶液的制备 取样品5ml，加水10ml稀释，再加盐酸1ml，直火加热30min，放冷，用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚提取液，再用5%碳酸氢钠溶液萃取，直至萃取完全，弃去碳酸氢钠溶液，乙醚提取液再用5%氢氧化钠溶液萃取，直至萃取完全，弃去乙醚溶液，氢氧化钠溶液用盐酸调至ph=3，继续用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚提取液，水浴蒸干，残渣用1ml甲醇溶解，作为样品溶液。取大黄素和大黄酚对照品各1mg，用1ml甲醇溶解，作为对照品溶液。另按处方制备方法制备不含大黄和虎杖的空白对照液。
2.1.2 薄层层析 分别用毛细管分别吸取样品溶液、对照品液及空白对照品溶液各约10μl点样，以氯仿-乙酸乙酯(8:2)的溶液为展开剂上行展开，展开距为15cm，烘干后即见样品溶液和对照品液在相应位置显相同的黄色斑点，而空白对照液在相应处无斑点。
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2.2 苦参的薄层色谱鉴别
2.2.1 样品溶液的制备 取本品5ml，用盐酸调至pH=3，振摇数分钟，用乙醚提取3次，每次20ml，弃去乙醚提取液，水溶液用碳酸氢钠调至pH=10，继续用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚提取液，水浴蒸干，残渣用1ml甲醇溶液，作为样品溶液。取苦参碱对照品1mg，用1ml甲醇溶解，作为对照品溶液。另按处方制备方法制备不含苦参的空白对照液。
2.2.2 薄层层析 分别用毛细管分别吸取样品溶液、对照品液及空白对照品溶液各约10μl点样，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2:4:2:1)的上层溶液为展开剂上行展开，展开距为15cm，烘干后依次喷以碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液，见样品溶液和标准品液在相应位置显相同的灰蓝色斑点，而空白对照液在相应处无斑点。
2.3 茵陈的薄层色谱鉴别
2.3.1 样品溶液的制备 取本品5ml，用氯仿提取3次，每次20ml，弃去氯仿液，继用乙酸乙酯萃取2次，每次30ml，乙酸乙酯提取液加入无水硫酸钠脱水，然后滤过，除去硫酸钠，水浴蒸干溶剂，残渣用2ml乙酸乙酯溶解，作为样品溶液。取茵陈2g，用水浸泡2h，然后直火煎煮，水煎煮液过滤，滤液同样品制备方法制备，得到的残渣用2ml乙酸乙酯溶解，作为对照品溶液。另按处方制备不含茵陈的空白对照液。
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2.3.2 薄层层析 分别用毛细血管分别吸取样品溶液、对照品液及空白对照品溶液各约10μl点样，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(4:4:2)为展开剂上行展开，展开距为15cm，烘干后见样品溶液和标准品液在相应位置至少有两个相同颜色的斑点。而空白对照液在相应处无斑点。
3 大黄素的含量测定
3.1 色谱条件 色谱柱waters Nova-PaK C 18 柱(3.9×150mm);流动相:甲醇-水(45:55);流速0.8ml/min;检测波长270nm;灵敏度0.02AUFS。柱温:20℃，对照品及样品的色谱图见图1。
3.2 标准溶液的制备 精密称取干燥至恒重的大黄素对照品10mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准品溶液。
3.3 标准曲线的绘制 精密量取标准溶液2ml，4ml，6ml，8ml，10ml，分别置50ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，各取10μl进样，以峰面积为纵坐标(Y)，浓度为横坐标(X)，进行线性回归，得回归方程:Y=0.1671X-0.0610(r=0.9997)，表明在7.2μg～44.0μg范围内，线性关系良好。
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3.4 精密度试验 取对照品溶液，重复进样5次，每次进样10μl，RSD=2.03%(n=3)
3.5 加样回收率试验 取已知含量的样品液，加入一定量的大黄素对照品，以下按标准曲线项操作，10μl进样，得平均加样回收率为98.14%，结果见表1。
3.6 样品液的大黄素含量测定 取健肝糖浆Ⅰ号1ml，边振摇边加入无水乙醇约30ml，去沉淀，取浑浊液，继续加无水乙醇至50ml，超声混匀，过滤，取续滤液10ml，水浴蒸干溶液，残留物加甲醇溶解并定容至10ml，取10μl进样，按标准曲线项方法测定峰面积，计算样品浓度，结果见表2。
表1 回收率试验结果 (n=3)
表2 样品溶液大黄素含量 (n=3)
4 讨论
, 百拇医药
4.1 大黄、虎杖、苦参为处方中主要药材，因为这3味药材中的主要成分有明显的酸碱性，所以在其薄层色谱鉴别中，采用了多次酸碱萃取的方法，以达到尽可能的分离。试验表明，该方法提取分离效果明显，薄层板上成分分离也很清晰。
4.2 本制剂为糖浆剂，为避免糖分对大黄素含量测定产生影响，故先用醇沉法将样品中大量糖分沉淀分离除去。
4.3 本文检测波长采用270nm，而没有采用通常的蒽醌检测波长254nm [2] ，主要是由于在此波长处可基本排除共存药物和杂质的干扰，分离度较好。
4.4 健肝糖浆Ⅰ号为纯中药制剂，活性成分多。本文以大黄和虎杖中大黄素为质量质控标准，HPLC试验方法可靠，操作简单，结果准确。
参考文献
1 唐廷国.中成药薄层色谱鉴别.北京:人民卫生出版社，1995，6.
2 曹红，刘云.高效液相色谱法测定几种中成药中大黄素的含量.药物分析杂志，1998，18(1):3.
作者单位:213001江苏省常州市第三人民医院
(编辑罗 彬), 百拇医药