狼疮性肾炎患者补体调节蛋白的检测及意义
【摘要】 目的 研究狼疮性肾炎患者治疗前后尿中补体调节蛋白的变化及意义。方法利用改良的CH50试验检测尿中补体调节蛋白的活性。结果 狼疮性肾炎患者尿中补体调节蛋白活性明显高于正常人，且治疗后尿中补体调节蛋白明显降低。结论 狼疮性肾炎患者尿中补体调节蛋白的检测有助于加深对SLE发病机制的认识，具有一定的临床应用价值。
关键词
狼疮性肾炎 补体调节蛋白
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2004)02-0101-02
A study of the urinary complement regulatory protein in
lupus nephritis patients
, http://www.100md.com
Wang Xun，Li Xuejun.
Department of Nephrology，454Hospital of PLA，Nanjing210002.
【Abstract】 Objective To investigate the role of complement regulatory protein in Lupus nephritis.Methods The detecting of the urinary complement regulatory protein was established by the modification of CH50assay and used in the study of the LN patients.Results A significantly increased complement regulatory protein was found in urine from LN patients as compared with those from normal control and treated LN.Conclusion This study might be helpful in deeping our understanding of pathogenesis of SLE，and the detection of urinary complement regulatory proˉtein could have clinical values.
, 百拇医药
Key words lupus nephritis complement reguatory protein
补体及补体调节蛋白在狼疮性肾炎(lupus nephritis，LN)的发病过程中发挥了重要作用 [1] 。补体调节蛋白可通过调控补体的激活及其激活后产生的变态反应来达到保护机体的作用。肾脏细胞能够表达和分泌多种补体调节蛋白，这种表达受到细胞因子、炎性介质的调控 [2～3] 。我们利用改良的CH50实验检测了22例狼疮性肾炎患者激素及环磷酰胺治疗前后尿中补体调节蛋白的活性并分析其意义。
1 材料和方法
1.1 实验对象 22例LN患者，均为女性，全部符合美国风湿学会1982年修订的诊断标准，均为女性，年龄18～45岁，平均30.8岁。正常人15例，年龄21～39岁，平均28.1岁。所有LN患者入院后均予强的松1mg/(kg·d)口服及环磷酰胺1g静滴。
, 百拇医药
1.2 标本收集 收集LN患者治疗前及治疗后1月的尿液及正常人尿液10ml，离心去沉渣后置透析袋(可截留分子量为6000D)中透析24h。为排除尿中可能存在的补体成分对检测的影响，所有尿标本均经56℃30min加热处理，然后用于检测。
1.3 检测方法 用改良的CH50实验检测尿液补体抑制蛋白的活性 96孔平底培养板中分别依次加入1:480稀释的新鲜豚鼠血清(补体)50μl、待检测标本(对照孔为巴比妥缓冲液)200μl、2%溶血素致敏的羊红细胞50μl。培养板置37℃2h，离心后收集上清100μl，移至另一96孔板中，用酶联免疫检测仪读取波长410nm处各孔的OD值。补体调节蛋白的活性按下列公
式计算:补体调节蛋白活性(%)=(1-测定孔OD/对照孔OD)×100%。
1.4 统计学处理 两组间数据的比较采用t检验。
, 百拇医药 2 结果
2.1 狼疮性肾炎患者治疗前后24h尿蛋白定量的变化 见表1。
表1 LN患者治疗前后24h尿蛋白定量的变化 略
2.2 正常人与LN患者治疗前后尿中补体调节蛋白活性比较 见表2。
表2 正常人与LN患者治疗前后尿补体调节蛋白活性 略
正常人与LN患者尿中均存在着补体抑制蛋白。LN患者治疗前尿中补体抑制蛋白较正常人明显增高，差异非常显著(P<0.01)。治疗后患者尿中补体抑制蛋白活性显著下降(P<0.05)。
3 讨论补体及其活性片断所致的免疫损伤是SLE患者肾脏损伤的主要因素。补体的激活在体内受到补体调节蛋白的调控 [3] 。研究表明，肾小球系膜细胞、上皮细胞可表达、分泌补体调节蛋白如DAF、CR1、HRF等。多种肾脏细胞产生的细胞外基质成分decorin本身就是一种补体调节蛋白 [4，5] 。因此我们认为正常人及LN患者尿中补体抑制活性可能来源于肾脏，其免疫调节活性是多种补体调节蛋白共同作用的结果。
, 百拇医药
改良的CH50实验用于尿中补体抑制活性的检测，是利用溶血素致敏的羊红细胞激活补体，导致补体活性产物的产生(如C5b-9)，补体激活及补体活性产物的生物学作用又受到补体调节蛋白的调控，因此，根据溶血程度的不同，可以推算出尿中补体调节蛋白水平的高低。
本研究显示，LN患者治疗前尿中补体抑制蛋白的活性(64.9±20.3)显著高于正常人(26.2±16.4)。LN患者尿中补体抑制蛋白的增加可能与肾脏炎性损害有关。在得到有效治疗后随着病情的缓解，患者尿中的补体抑制蛋白的活 性也显著下降(41.0±26.5)。因此，尿中补体抑制蛋白活性的检测可能有助于LN的辅助诊断及治疗效果的判断。补体抑制蛋白的产生是机体防御补体损伤的主要机理，进一步研究尿中补体抑制蛋白的性质可能有一定的临床意义。同时，本方法简单易行，不需特殊设备及试剂，在大多数基层医院均可开展。
参考文献
1 Kinoshita.Bioligy of complement:the overture.Immunol today，1991，12(9):291.
, 百拇医药
2 Ichida S，Yuzawa Y，Okada H，et al.Comparative immunohisochemical location of three membrane associated complement reguatory protein in normal human kidney.JASN，1993，3(3):620.
3 洪新如，陈新民.补体调节蛋白及其在肾脏疾病中的应用.国外医学·泌尿系统分册，2002，22(2):105.
4 Hansch GN.The role of complement in mesangial cell damage.Nephrol Dial Transplant，1993，8:4.
5 Pascual M，Steiger G，Sadallah S，et al.Identification of CR1(CD35)in human urine.JASN，1993，4(3):687.
作者单位: 210002 南京解放军四五四医院肾内科
(编辑 使臻), http://www.100md.com
关键词
狼疮性肾炎 补体调节蛋白
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2004)02-0101-02
A study of the urinary complement regulatory protein in
lupus nephritis patients
, http://www.100md.com
Wang Xun，Li Xuejun.
Department of Nephrology，454Hospital of PLA，Nanjing210002.
【Abstract】 Objective To investigate the role of complement regulatory protein in Lupus nephritis.Methods The detecting of the urinary complement regulatory protein was established by the modification of CH50assay and used in the study of the LN patients.Results A significantly increased complement regulatory protein was found in urine from LN patients as compared with those from normal control and treated LN.Conclusion This study might be helpful in deeping our understanding of pathogenesis of SLE，and the detection of urinary complement regulatory proˉtein could have clinical values.
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Key words lupus nephritis complement reguatory protein
补体及补体调节蛋白在狼疮性肾炎(lupus nephritis，LN)的发病过程中发挥了重要作用 [1] 。补体调节蛋白可通过调控补体的激活及其激活后产生的变态反应来达到保护机体的作用。肾脏细胞能够表达和分泌多种补体调节蛋白，这种表达受到细胞因子、炎性介质的调控 [2～3] 。我们利用改良的CH50实验检测了22例狼疮性肾炎患者激素及环磷酰胺治疗前后尿中补体调节蛋白的活性并分析其意义。
1 材料和方法
1.1 实验对象 22例LN患者，均为女性，全部符合美国风湿学会1982年修订的诊断标准，均为女性，年龄18～45岁，平均30.8岁。正常人15例，年龄21～39岁，平均28.1岁。所有LN患者入院后均予强的松1mg/(kg·d)口服及环磷酰胺1g静滴。
, 百拇医药
1.2 标本收集 收集LN患者治疗前及治疗后1月的尿液及正常人尿液10ml，离心去沉渣后置透析袋(可截留分子量为6000D)中透析24h。为排除尿中可能存在的补体成分对检测的影响，所有尿标本均经56℃30min加热处理，然后用于检测。
1.3 检测方法 用改良的CH50实验检测尿液补体抑制蛋白的活性 96孔平底培养板中分别依次加入1:480稀释的新鲜豚鼠血清(补体)50μl、待检测标本(对照孔为巴比妥缓冲液)200μl、2%溶血素致敏的羊红细胞50μl。培养板置37℃2h，离心后收集上清100μl，移至另一96孔板中，用酶联免疫检测仪读取波长410nm处各孔的OD值。补体调节蛋白的活性按下列公
式计算:补体调节蛋白活性(%)=(1-测定孔OD/对照孔OD)×100%。
1.4 统计学处理 两组间数据的比较采用t检验。
, 百拇医药 2 结果
2.1 狼疮性肾炎患者治疗前后24h尿蛋白定量的变化 见表1。
表1 LN患者治疗前后24h尿蛋白定量的变化 略
2.2 正常人与LN患者治疗前后尿中补体调节蛋白活性比较 见表2。
表2 正常人与LN患者治疗前后尿补体调节蛋白活性 略
正常人与LN患者尿中均存在着补体抑制蛋白。LN患者治疗前尿中补体抑制蛋白较正常人明显增高，差异非常显著(P<0.01)。治疗后患者尿中补体抑制蛋白活性显著下降(P<0.05)。
3 讨论补体及其活性片断所致的免疫损伤是SLE患者肾脏损伤的主要因素。补体的激活在体内受到补体调节蛋白的调控 [3] 。研究表明，肾小球系膜细胞、上皮细胞可表达、分泌补体调节蛋白如DAF、CR1、HRF等。多种肾脏细胞产生的细胞外基质成分decorin本身就是一种补体调节蛋白 [4，5] 。因此我们认为正常人及LN患者尿中补体抑制活性可能来源于肾脏，其免疫调节活性是多种补体调节蛋白共同作用的结果。
, 百拇医药
改良的CH50实验用于尿中补体抑制活性的检测，是利用溶血素致敏的羊红细胞激活补体，导致补体活性产物的产生(如C5b-9)，补体激活及补体活性产物的生物学作用又受到补体调节蛋白的调控，因此，根据溶血程度的不同，可以推算出尿中补体调节蛋白水平的高低。
本研究显示，LN患者治疗前尿中补体抑制蛋白的活性(64.9±20.3)显著高于正常人(26.2±16.4)。LN患者尿中补体抑制蛋白的增加可能与肾脏炎性损害有关。在得到有效治疗后随着病情的缓解，患者尿中的补体抑制蛋白的活 性也显著下降(41.0±26.5)。因此，尿中补体抑制蛋白活性的检测可能有助于LN的辅助诊断及治疗效果的判断。补体抑制蛋白的产生是机体防御补体损伤的主要机理，进一步研究尿中补体抑制蛋白的性质可能有一定的临床意义。同时，本方法简单易行，不需特殊设备及试剂，在大多数基层医院均可开展。
参考文献
1 Kinoshita.Bioligy of complement:the overture.Immunol today，1991，12(9):291.
, 百拇医药
2 Ichida S，Yuzawa Y，Okada H，et al.Comparative immunohisochemical location of three membrane associated complement reguatory protein in normal human kidney.JASN，1993，3(3):620.
3 洪新如，陈新民.补体调节蛋白及其在肾脏疾病中的应用.国外医学·泌尿系统分册，2002，22(2):105.
4 Hansch GN.The role of complement in mesangial cell damage.Nephrol Dial Transplant，1993，8:4.
5 Pascual M，Steiger G，Sadallah S，et al.Identification of CR1(CD35)in human urine.JASN，1993，4(3):687.
作者单位: 210002 南京解放军四五四医院肾内科
(编辑 使臻), http://www.100md.com