在小鼠活体内显示着色条带的实验研究
【摘要】 目的 在小鼠经络线上显示蛋白条带。方法 根据经脉线低阻抗的特点和本研究者关于经络实质是“蛋白桥接”假说的概念，采用特殊配方的染液，结合离子电泳技术，在小鼠活体内进行染液离子电泳示踪。结果 在小鼠的筋膜上、肠系膜上等器官组织处显示出蓝色的着色条带，而这些条带与经络路径大致吻合。结论 在小鼠体内可显示出类经络样分布的条带。
关键词 经络 离子电泳 循经感传 筋膜
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)08-0673-02
An experimentation study on exhibiting pigmentized
strips in intravital mouse
Meng Fanxun，Jing Rongfang
, 百拇医药
Dept of Biotechnology of Nan-tong Medical College，Jiang-Su Province，Jiang Su226001.
【Abstract】 Objective To exhibiting protein strips on the route of channels
and collaterals of the mouse.Methods Based on the low impedance characteristic of the channels and collaterals and the researchers’hypothesis that channels and
collaterals are in nature“protein bridging”，using a specially formulated dyesolution and with the technology of hydronium eletrophoresis，to trace the routes of dye solution hydronium eletrophoresis in intravital mouse.Results Blue pig mentized strips have been exhibited in the tissues and organs such as fascia and mesenterica of the mouse and these strips approximately agree are homologous to
, 百拇医药
the route of the channels and collaterals.Conclusion Strips distributed similar
to the route of the channels and coolaterals can be exhibited in the body of the mouse.
Key words channels and collaterals hydronium eletrophoresis fascia
对经络通路进行示踪，了解经络的物质构筑，是阐明经络实质和作用机理的一条重要途径。经络线低电阻、低流阻特性的发现，同位素、辣根过氧化物酶等物质的示踪都是这方面研究的具体进展。但低电阻、低流阻的物质基础和结构尚不甚了解，示踪物质具体循行的确切部位和
路径还是大体停留在古人云亦云的平台上。寻找其循行的客观依据，正是经络研究的瓶颈所在。我们在提出的经络实质是“蛋白桥接”假说概念的基础上 [1] ，结合低电阻等研究结果 [2] ，在ICR小鼠身上，采用特殊配方的染液，进行活体离子电泳示踪试验，获得可重复的着色条带，并与传统的经络线路大致吻合，现报告如下。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 新型示踪染色液 以曲利本蓝、硫堇和溴酚蓝等不同的染料组份，采用无水乙醇及生理盐水进行配制，并适量添加乙二胺四乙酸二钠、十二烷基磺酸钠，调pH至7.30。
1.2 ICR小鼠 体重(30±5)g/只，清洁级，雌雄不拘。由南通医学院实验动物中心提供，生产许可证:SCXK(苏)2003-0002;使用许可证:SCXK(苏)2002-0002。
1.3 DY-301S稳流稳压电泳仪 南京大学南达生物技术开发公司出品。
1.4 体内导入 电极头为本研究者自制。
1.5 实验方法 实验组:在戊巴比妥钠腹腔麻醉下(40mg/kg)，用鞋绳线固定四肢，将正负极导入电极头分别插入小鼠皮下(相当于任脉线上的关元—华盖穴，或者相当于肾经线上的大赫—神封穴)，注意正负电极极性，并用胶条适当固定防止脱落。在靠近负极导入电极头处皮下注射示踪染液0.05ml左右，输入直流电，11～12V/2mA，经过40min后，再调高至20V/5mA，20min后切断电源，处死小鼠，解剖观察。实验对照组:在偏离经络线的两端插入电极，其余步骤均与实验组相同。
, http://www.100md.com
2 结果
2.1 实验组 小鼠胸部筋膜正中线处(相当于任脉线)出现一道蓝色条带(见图1、2);在偏正中线5mm处(相当于部分肾经经脉线)出现一道蓝色条带(见图2);在肠系膜上和胃浆膜层上(相当于络脉线)出现蓝色条带(见图3、图4)。
图1略图2略图3-1略图3-2略图4 略
2.2 实验对照组 小鼠的筋膜上未能发现蓝色条带。
3 讨论
众多专家学者的临床实践及多年的基础研究表明，循经感传的现象是客观存在的，但循行的经络线却一直无法确切具体定位及客观地显示出来。本研究者在提出“蛋白桥接”的假说后，就在寻找可行的实验手段进行验证，根据具体的实验条件，首先在非特异性显示经络线研究方面进行探索。据研究资料报道 [3] ，经脉线在电、声、光、磁方面都有着差异性反应，同位素、辣根过氧化物酶能够循行示踪 [4] ，穴位给药、穴位针刺对靶组织(器官)产生不同的效应，甚至有研究者在上世纪70年代用电泳漆在人体肢干皮 肤上进行示踪 [5] 。这些研究结果启示我们，经络现象是客观存在的，经络现象也是有物质基础的。我们分析认为:经络线路，或者说是29kD蛋白或/和其它蛋白组成的“蛋白桥接”的通路，能够让药物、同位素等小分子或离子物质循经运行，并且在皮层上显示循经低电阻特性，就很有可能让某些染料离子在特定的条件下依附通行，并在通过的路径上留下染液离子踪迹。我们对公开发表的有关穴位给药论文中的药物品种进行收集、整理，深入分析其化学结构，分子量大小，电荷特性，晶体扩散系数、体内代谢特点等等，参照使用某些特性相对应的或相接近的染料进行配比优化试验。为了便于活体观察，采用以蓝色为配伍基调的示踪染液，依赖某种“蛋白桥接”通路的正常生理状态，让染液离子自然循行，可能难以达到肉眼能够识别区分的数量级，我们施加直流电场，进行体内离子电泳，企图让更多的染液离子在电场中附着蛋白通道由负极向正极泳动，并提高其泳动速度。
, 百拇医药
在体内染液离子电泳的实验中，由于小鼠四肢短小，只能选取胸腹部作为电泳部位，相当于任脉的着色条带出现率最高，相当于肾经的着色条带次之，相当于络脉的肠系膜和胃外表浆膜上的着色条带出现率也较高，而相当于腹侧部胆经和背部的膀胱经位置的着色条带未能显现出来，这既有我们技术上的欠缺，也有可能与循行部位肌肉的疏松和紧密以及经脉线循行曲直等因素有关，也不排除只是泳动的染液离子浓度较低、肉眼无法直接识别的可能。
在我们的实验条件下，体内示踪染液离子电泳的着色条带，并不以片状或云雾状向前弥漫，而是以连续的线状均匀着色分布，同时呈现出向心性和电流方向定向性的特点，并且所出现的着色条带均能在相同部位得到重复的实验验证。根据我们实验体会，电压高一些效果好，但考虑到小鼠的耐受疼痛的能力(虽然施加过麻醉)，分为前后给予两段电压为宜。
虽然我们在这方面进行了探索性的研究，取得了一些阶段性结果，但这只是初步尝试，许多问题有待进一步深入研究，并且这些着色条带未必就是经络实际线路，因为小鼠的经络和穴位只是比照人体投射而人为制定的，不一定完全和人体经络相符。尽管如此，小鼠体内着色条带所显示循经运行的特点，有助于我们拓展经络研究的思路。更重要的是客观显示经络线路并不是研究经络的目的所在，关键是以此为依据，对其物质基础进行深入研究，进而阐明其作用机理。因此，按照实验链接，我们对小鼠着色条带的物质构筑进行了观察、分析，其研究结果(另文报道)，极有可能为经络实质的研究提供一个新的技术平台。
, 百拇医药
参考文献
1 孟凡迅.从感觉神经特异蛋白29KD的分子生物学特性探讨经络实质及作用机理.中国针灸，2001，21(2):87-88.
2 祝总骧.动物循经低阻线的观察.针刺研究，1980，5(4):311-313.
3 朱兵.针灸的科学基础.青岛:青岛出版社，1998，552-560.
4 李瑞午/针刺对放射性核素沿经迁移的影响.针刺研究，1989，14:1-3.
5 龚启华.经络和穴位显示法.科学通报，1976，21:425-427.
作者单位:1 226001江苏南通医学院生物技术系
2 江苏南通医学院附属海安医院
(编辑 李木), 百拇医药
关键词 经络 离子电泳 循经感传 筋膜
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)08-0673-02
An experimentation study on exhibiting pigmentized
strips in intravital mouse
Meng Fanxun，Jing Rongfang
, 百拇医药
Dept of Biotechnology of Nan-tong Medical College，Jiang-Su Province，Jiang Su226001.
【Abstract】 Objective To exhibiting protein strips on the route of channels
and collaterals of the mouse.Methods Based on the low impedance characteristic of the channels and collaterals and the researchers’hypothesis that channels and
collaterals are in nature“protein bridging”，using a specially formulated dyesolution and with the technology of hydronium eletrophoresis，to trace the routes of dye solution hydronium eletrophoresis in intravital mouse.Results Blue pig mentized strips have been exhibited in the tissues and organs such as fascia and mesenterica of the mouse and these strips approximately agree are homologous to
, 百拇医药
the route of the channels and collaterals.Conclusion Strips distributed similar
to the route of the channels and coolaterals can be exhibited in the body of the mouse.
Key words channels and collaterals hydronium eletrophoresis fascia
对经络通路进行示踪，了解经络的物质构筑，是阐明经络实质和作用机理的一条重要途径。经络线低电阻、低流阻特性的发现，同位素、辣根过氧化物酶等物质的示踪都是这方面研究的具体进展。但低电阻、低流阻的物质基础和结构尚不甚了解，示踪物质具体循行的确切部位和
路径还是大体停留在古人云亦云的平台上。寻找其循行的客观依据，正是经络研究的瓶颈所在。我们在提出的经络实质是“蛋白桥接”假说概念的基础上 [1] ，结合低电阻等研究结果 [2] ，在ICR小鼠身上，采用特殊配方的染液，进行活体离子电泳示踪试验，获得可重复的着色条带，并与传统的经络线路大致吻合，现报告如下。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 新型示踪染色液 以曲利本蓝、硫堇和溴酚蓝等不同的染料组份，采用无水乙醇及生理盐水进行配制，并适量添加乙二胺四乙酸二钠、十二烷基磺酸钠，调pH至7.30。
1.2 ICR小鼠 体重(30±5)g/只，清洁级，雌雄不拘。由南通医学院实验动物中心提供，生产许可证:SCXK(苏)2003-0002;使用许可证:SCXK(苏)2002-0002。
1.3 DY-301S稳流稳压电泳仪 南京大学南达生物技术开发公司出品。
1.4 体内导入 电极头为本研究者自制。
1.5 实验方法 实验组:在戊巴比妥钠腹腔麻醉下(40mg/kg)，用鞋绳线固定四肢，将正负极导入电极头分别插入小鼠皮下(相当于任脉线上的关元—华盖穴，或者相当于肾经线上的大赫—神封穴)，注意正负电极极性，并用胶条适当固定防止脱落。在靠近负极导入电极头处皮下注射示踪染液0.05ml左右，输入直流电，11～12V/2mA，经过40min后，再调高至20V/5mA，20min后切断电源，处死小鼠，解剖观察。实验对照组:在偏离经络线的两端插入电极，其余步骤均与实验组相同。
, http://www.100md.com
2 结果
2.1 实验组 小鼠胸部筋膜正中线处(相当于任脉线)出现一道蓝色条带(见图1、2);在偏正中线5mm处(相当于部分肾经经脉线)出现一道蓝色条带(见图2);在肠系膜上和胃浆膜层上(相当于络脉线)出现蓝色条带(见图3、图4)。
图1略图2略图3-1略图3-2略图4 略
2.2 实验对照组 小鼠的筋膜上未能发现蓝色条带。
3 讨论
众多专家学者的临床实践及多年的基础研究表明，循经感传的现象是客观存在的，但循行的经络线却一直无法确切具体定位及客观地显示出来。本研究者在提出“蛋白桥接”的假说后，就在寻找可行的实验手段进行验证，根据具体的实验条件，首先在非特异性显示经络线研究方面进行探索。据研究资料报道 [3] ，经脉线在电、声、光、磁方面都有着差异性反应，同位素、辣根过氧化物酶能够循行示踪 [4] ，穴位给药、穴位针刺对靶组织(器官)产生不同的效应，甚至有研究者在上世纪70年代用电泳漆在人体肢干皮 肤上进行示踪 [5] 。这些研究结果启示我们，经络现象是客观存在的，经络现象也是有物质基础的。我们分析认为:经络线路，或者说是29kD蛋白或/和其它蛋白组成的“蛋白桥接”的通路，能够让药物、同位素等小分子或离子物质循经运行，并且在皮层上显示循经低电阻特性，就很有可能让某些染料离子在特定的条件下依附通行，并在通过的路径上留下染液离子踪迹。我们对公开发表的有关穴位给药论文中的药物品种进行收集、整理，深入分析其化学结构，分子量大小，电荷特性，晶体扩散系数、体内代谢特点等等，参照使用某些特性相对应的或相接近的染料进行配比优化试验。为了便于活体观察，采用以蓝色为配伍基调的示踪染液，依赖某种“蛋白桥接”通路的正常生理状态，让染液离子自然循行，可能难以达到肉眼能够识别区分的数量级，我们施加直流电场，进行体内离子电泳，企图让更多的染液离子在电场中附着蛋白通道由负极向正极泳动，并提高其泳动速度。
, 百拇医药
在体内染液离子电泳的实验中，由于小鼠四肢短小，只能选取胸腹部作为电泳部位，相当于任脉的着色条带出现率最高，相当于肾经的着色条带次之，相当于络脉的肠系膜和胃外表浆膜上的着色条带出现率也较高，而相当于腹侧部胆经和背部的膀胱经位置的着色条带未能显现出来，这既有我们技术上的欠缺，也有可能与循行部位肌肉的疏松和紧密以及经脉线循行曲直等因素有关，也不排除只是泳动的染液离子浓度较低、肉眼无法直接识别的可能。
在我们的实验条件下，体内示踪染液离子电泳的着色条带，并不以片状或云雾状向前弥漫，而是以连续的线状均匀着色分布，同时呈现出向心性和电流方向定向性的特点，并且所出现的着色条带均能在相同部位得到重复的实验验证。根据我们实验体会，电压高一些效果好，但考虑到小鼠的耐受疼痛的能力(虽然施加过麻醉)，分为前后给予两段电压为宜。
虽然我们在这方面进行了探索性的研究，取得了一些阶段性结果，但这只是初步尝试，许多问题有待进一步深入研究，并且这些着色条带未必就是经络实际线路，因为小鼠的经络和穴位只是比照人体投射而人为制定的，不一定完全和人体经络相符。尽管如此，小鼠体内着色条带所显示循经运行的特点，有助于我们拓展经络研究的思路。更重要的是客观显示经络线路并不是研究经络的目的所在，关键是以此为依据，对其物质基础进行深入研究，进而阐明其作用机理。因此，按照实验链接，我们对小鼠着色条带的物质构筑进行了观察、分析，其研究结果(另文报道)，极有可能为经络实质的研究提供一个新的技术平台。
, 百拇医药
参考文献
1 孟凡迅.从感觉神经特异蛋白29KD的分子生物学特性探讨经络实质及作用机理.中国针灸，2001，21(2):87-88.
2 祝总骧.动物循经低阻线的观察.针刺研究，1980，5(4):311-313.
3 朱兵.针灸的科学基础.青岛:青岛出版社，1998，552-560.
4 李瑞午/针刺对放射性核素沿经迁移的影响.针刺研究，1989，14:1-3.
5 龚启华.经络和穴位显示法.科学通报，1976，21:425-427.
作者单位:1 226001江苏南通医学院生物技术系
2 江苏南通医学院附属海安医院
(编辑 李木), 百拇医药