抗-M导致交叉配血不合1例研究
【摘要】 目的 寻找1例交叉配血试验不相容的原因。方法 用谱细胞在传统盐水法、抗球蛋白试验中，鉴定患者血清的不规则抗体特异性，并观察蛋白水解酶对该不规则抗体的影响，同时检测患者红细胞MN血型。结果 试验显示患者血清的不规则抗体为IgM和IgG性质的抗-M，在4℃～37℃中均有活性，且抗-M导致该病人的胎儿患新生儿溶血病。结论 本文提示抗-M同样存在临床重要性，有条件的实验室可开展孕妇血清不规则抗体筛查工作。
关键词 交叉配血试验 不规则抗体 抗-M
【文献标识码】 B 【文章编号】 1680-6115(2004)04-0365-02
引起交叉配血不合的原因有很多，笔者最近遇到1例患者血清中含有抗-M引起配血困难，经鉴定该抗-M来自妊娠免疫刺激产生，并导致新生儿溶血病。由于具有临床意义的抗-M较少见，故现总结报告如下。
, http://www.100md.com 1 病例介绍
患者，女，25岁，已婚。无输血史，曾第一胎流产，住院时T36.6℃，P80次/min，R20次/min，BP15/10kPa，其它生命体征正常。2003年10月23日当第二胎孕39周时，拟在本市某医院剖腹产而进行血型检查和术前备血。经正定型检测为O型，但在随后进行的交叉配血过程中出现了配血 不合的现象，故急送标本到本站进行检查。
2 血型血清学检查
2.1 ABO血型检测 正定型时患者红细胞与抗-A和抗-B及抗-AB不凝集，显示为O型;反定型时患者的血清与A、B、O红细胞都发生凝集，但与自身细胞不凝集。
2.2 直接抗球蛋白试验 用患者洗涤3遍后的RBC分别与广谱抗人球蛋白、抗-IgG、抗-C 3反应，结果均为阴性。
2.3 患者血清抗体检测 将患者血清与谱细胞分别在盐水、抗球蛋白试验(AGT)中反应，反应结果见表1，说明患者血清中有抗-M。
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表1 病人原始血清和经2-Me处理后的血清与谱细胞反应结果
注:阳性对照为IgG抗-D与O型Rh(D)阳性红细胞反应。谱细胞Rh、Kell、Duffy等抗原在表中已省略
2.4 患者血清经2-Me处理后的检测 取患者血清与2-Me等量混匀，在37℃孵浴30min再与谱细胞分别在室温、37℃、AGT等条件下反应，结果见表1，说明患者血清中有IgG和IgM性质抗-M。
2.5 患者血清抗-M效价测定 将患者血清稀释后与O、MM型红细胞分别在4℃、24℃、37℃反应，结果抗-M盐水效价为，4℃时256，室温24℃时64，37℃时32;患者血清经2-Me处理后再检测，抗-M盐水效价为4℃时64，室温24℃时16，37℃时8，AGT中为256。
2.6 患者红细胞上的MN血型检测 患者RBC与抗-M不凝集、与抗-N呈4+，反应结果表明为NN型。
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2.7 酶处理红细胞与患者血清反应 取O型RH(D)+、M+N-的RBC与1%菠萝酶等量混匀，37孵育15min。用生理盐水洗一遍，配成4%的RBC悬液，再分别与患者血清和IgG抗-D反应，结果前者为阴性，后者为阳性，表明菠萝酶破坏了红细胞上的M抗原，再次证明患者血清为抗-M抗体。
2.8 输血 为该患者提供了在盐水和AGT配血均相合的3单位O型M抗原阴性红细胞，输注后无不良反应。
3 讨论
1927年，Landsteiner和Levine用人红细胞免疫家兔获得特异性抗体，并由此发现了M和N抗原。抗M属不规则抗体，可出现在极少数正常人或免疫系统紊乱病人的血液中 [1]，通常是一种室温盐水凝集素。大多数情况下没有红细胞诱发自然产生，抗-M却很少有显著临床意义 [2] 。本例抗-M为IgM和IgG性质，由于在37℃或AGT中有活性可能有临床意义，因此，我们随后检查了该患者所分娩新生儿和患者配偶的血标本，试验显示新生儿和患者配偶红细胞分别为MN和MM型，该患者所分娩新生儿的直接抗球蛋白试验和放散试验及血清游离抗体试验均为阳性，新生儿的放散液和血清内存在IgG抗-M，实验证实该患者所分娩新生儿已由抗-M引起了新生儿溶血病(HDN)，随后的临床资料调查表明，患儿也出现了HDN相应的临床症状和高胆红素血症。
, 百拇医药
M和N抗原是一对等位基因的产物，具有明显的对偶 关系。除罕见病例外，红细胞型为M+N-，M-N+或M+N+。这些表现型分别代表M和N两个基因纯合子和杂合子。抗-M和抗-N的一些个别例子有剂量效应，即与纯合子红细胞的反应强度和效价明显比杂合子红细胞强，本例抗-N由于浓度高，其剂量效应在室温不明显而在37℃明显。有些检查M和N抗原的血清试剂是通过人红细胞免疫家兔产生的。得到的血清混合后吸收掉除抗N或抗M以外的其他抗体。我们在为本例患者红细胞进行MN抗原检测时，发现来自动物源的三份厂商的抗-M或抗-N血清中均含“意外抗体”———人种族凝集素，孵育时间一长(如超过5min)，竟然和所有人M-或N-红细胞出现假凝集反应，而人源抗-M或抗-N血清在检测时未出现假凝集反应，提示动物源试剂的人种族凝集素难吸收干净。也有用小鼠单克隆和植物凝集素制备的试剂，使用最广泛的植物凝集素试剂是从禾豆(Vicia graminea)种子中提取的抗-M，多数情况，不同来源的试剂反应结果一致，但偶尔特异性的细微差别也给出不一致的结果，所以选择合格的试剂很重要。
, http://www.100md.com
因为蛋白水解酶如无花果蛋白酶或木瓜蛋白酶裂解红细胞膜唾液糖蛋白(SGP)，酶技术可消除其与抗-M及抗-N的反应性，故常用于抗体检查及鉴定试验 [2] 。这些特异性有时有助于鉴定这些抗体，如本例抗-M也有此特性。我们在实际工作中发现N+或-红细胞经酶处理后，均与动物源抗-M和抗-N立即出现强凝集，这种凝集应为未吸收干净的人种族凝集素引起的。本例抗-M可能由于第一胎免疫刺激，第二胎机体回忆反应产生，并引起新生儿溶血病，本文提示抗-M同样存在临床重要性，有条件的实验室可开展孕妇血清不规则抗体筛查工作。
参考文献
1 孙爱农，鲍自谦，查勇，等.自身免疫性溶血性贫血伴同种抗-M和抗-E一例.中华血液学杂志，1992，13(4):212.
2 Judd WJ.Methods in Immunohematology.2nd edition.USA，Montgomery scientificpublication，1994，300-303.
作者单位:512026广东省韶关市中心血站
(收稿日期:2003-12-20)
(编辑小 川), http://www.100md.com
关键词 交叉配血试验 不规则抗体 抗-M
【文献标识码】 B 【文章编号】 1680-6115(2004)04-0365-02
引起交叉配血不合的原因有很多，笔者最近遇到1例患者血清中含有抗-M引起配血困难，经鉴定该抗-M来自妊娠免疫刺激产生，并导致新生儿溶血病。由于具有临床意义的抗-M较少见，故现总结报告如下。
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患者，女，25岁，已婚。无输血史，曾第一胎流产，住院时T36.6℃，P80次/min，R20次/min，BP15/10kPa，其它生命体征正常。2003年10月23日当第二胎孕39周时，拟在本市某医院剖腹产而进行血型检查和术前备血。经正定型检测为O型，但在随后进行的交叉配血过程中出现了配血 不合的现象，故急送标本到本站进行检查。
2 血型血清学检查
2.1 ABO血型检测 正定型时患者红细胞与抗-A和抗-B及抗-AB不凝集，显示为O型;反定型时患者的血清与A、B、O红细胞都发生凝集，但与自身细胞不凝集。
2.2 直接抗球蛋白试验 用患者洗涤3遍后的RBC分别与广谱抗人球蛋白、抗-IgG、抗-C 3反应，结果均为阴性。
2.3 患者血清抗体检测 将患者血清与谱细胞分别在盐水、抗球蛋白试验(AGT)中反应，反应结果见表1，说明患者血清中有抗-M。
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表1 病人原始血清和经2-Me处理后的血清与谱细胞反应结果
注:阳性对照为IgG抗-D与O型Rh(D)阳性红细胞反应。谱细胞Rh、Kell、Duffy等抗原在表中已省略
2.4 患者血清经2-Me处理后的检测 取患者血清与2-Me等量混匀，在37℃孵浴30min再与谱细胞分别在室温、37℃、AGT等条件下反应，结果见表1，说明患者血清中有IgG和IgM性质抗-M。
2.5 患者血清抗-M效价测定 将患者血清稀释后与O、MM型红细胞分别在4℃、24℃、37℃反应，结果抗-M盐水效价为，4℃时256，室温24℃时64，37℃时32;患者血清经2-Me处理后再检测，抗-M盐水效价为4℃时64，室温24℃时16，37℃时8，AGT中为256。
2.6 患者红细胞上的MN血型检测 患者RBC与抗-M不凝集、与抗-N呈4+，反应结果表明为NN型。
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2.7 酶处理红细胞与患者血清反应 取O型RH(D)+、M+N-的RBC与1%菠萝酶等量混匀，37孵育15min。用生理盐水洗一遍，配成4%的RBC悬液，再分别与患者血清和IgG抗-D反应，结果前者为阴性，后者为阳性，表明菠萝酶破坏了红细胞上的M抗原，再次证明患者血清为抗-M抗体。
2.8 输血 为该患者提供了在盐水和AGT配血均相合的3单位O型M抗原阴性红细胞，输注后无不良反应。
3 讨论
1927年，Landsteiner和Levine用人红细胞免疫家兔获得特异性抗体，并由此发现了M和N抗原。抗M属不规则抗体，可出现在极少数正常人或免疫系统紊乱病人的血液中 [1]，通常是一种室温盐水凝集素。大多数情况下没有红细胞诱发自然产生，抗-M却很少有显著临床意义 [2] 。本例抗-M为IgM和IgG性质，由于在37℃或AGT中有活性可能有临床意义，因此，我们随后检查了该患者所分娩新生儿和患者配偶的血标本，试验显示新生儿和患者配偶红细胞分别为MN和MM型，该患者所分娩新生儿的直接抗球蛋白试验和放散试验及血清游离抗体试验均为阳性，新生儿的放散液和血清内存在IgG抗-M，实验证实该患者所分娩新生儿已由抗-M引起了新生儿溶血病(HDN)，随后的临床资料调查表明，患儿也出现了HDN相应的临床症状和高胆红素血症。
, 百拇医药
M和N抗原是一对等位基因的产物，具有明显的对偶 关系。除罕见病例外，红细胞型为M+N-，M-N+或M+N+。这些表现型分别代表M和N两个基因纯合子和杂合子。抗-M和抗-N的一些个别例子有剂量效应，即与纯合子红细胞的反应强度和效价明显比杂合子红细胞强，本例抗-N由于浓度高，其剂量效应在室温不明显而在37℃明显。有些检查M和N抗原的血清试剂是通过人红细胞免疫家兔产生的。得到的血清混合后吸收掉除抗N或抗M以外的其他抗体。我们在为本例患者红细胞进行MN抗原检测时，发现来自动物源的三份厂商的抗-M或抗-N血清中均含“意外抗体”———人种族凝集素，孵育时间一长(如超过5min)，竟然和所有人M-或N-红细胞出现假凝集反应，而人源抗-M或抗-N血清在检测时未出现假凝集反应，提示动物源试剂的人种族凝集素难吸收干净。也有用小鼠单克隆和植物凝集素制备的试剂，使用最广泛的植物凝集素试剂是从禾豆(Vicia graminea)种子中提取的抗-M，多数情况，不同来源的试剂反应结果一致，但偶尔特异性的细微差别也给出不一致的结果，所以选择合格的试剂很重要。
, http://www.100md.com
因为蛋白水解酶如无花果蛋白酶或木瓜蛋白酶裂解红细胞膜唾液糖蛋白(SGP)，酶技术可消除其与抗-M及抗-N的反应性，故常用于抗体检查及鉴定试验 [2] 。这些特异性有时有助于鉴定这些抗体，如本例抗-M也有此特性。我们在实际工作中发现N+或-红细胞经酶处理后，均与动物源抗-M和抗-N立即出现强凝集，这种凝集应为未吸收干净的人种族凝集素引起的。本例抗-M可能由于第一胎免疫刺激，第二胎机体回忆反应产生，并引起新生儿溶血病，本文提示抗-M同样存在临床重要性，有条件的实验室可开展孕妇血清不规则抗体筛查工作。
参考文献
1 孙爱农，鲍自谦，查勇，等.自身免疫性溶血性贫血伴同种抗-M和抗-E一例.中华血液学杂志，1992，13(4):212.
2 Judd WJ.Methods in Immunohematology.2nd edition.USA，Montgomery scientificpublication，1994，300-303.
作者单位:512026广东省韶关市中心血站
(收稿日期:2003-12-20)
(编辑小 川), http://www.100md.com