不同试剂盒测定LDL-C方法对实验结果的影响
【摘要】 目的 选用三种匀相法试剂盒测定LDL-C，探讨试剂盒之间的可比性及与用F公式计算LDL-C，比较两者结果差异。方法 收集合适范围、高TC、高TG血症200例，测定LDL-C、TC、TG、HDL-C，并用F公式计算LDL-C。结果 对照组匀相测定法之间LDL-C浓度均数差异有显著性(P<0.01或P<0.05)，计算法之间LDL-C浓度均数差异无显著性(P>0.05)。病理组匀相测定法之间LDL-C浓度均数差异有显著性(P<0.01或P<0.05)，计算法之间LDL-C浓度均数差异有显著性(P<0.01或P<0.05)。结论 匀相法是目前检测LDL-C的首选方法。F公式计算法不适用于高TC、高TG的样本，提示实验室选用方法及试剂对临床上推广的治疗指针和目标值的方案意义重大。
关键词 匀相测定法 F公式计算法 LDL-C
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)08-0682-03
, 百拇医药
The influence of different methods on the results of LDL-C detection
Tao Meihua，Zhang Guanghui，Shen Xia
Department of Clinical Laboratory，Xinhua Hospital，Shanghai Second Medical
University，Shanghai200092.
【Abstract】 Objective To discuss the comparability among three kinds of homogeneous methods in assaying LDL-C，the comparability between two kinds of fried
, 百拇医药
ewald-calculation(F-calculation for short in below)and the comparability between homogeneous method and F-calculation.Methods Samples from healthy group，blended hyˉperlipemia patient，hypercholesterolmia patient and hypertriglyceridemiapatient are respectively collected in order to assay LDL-C，TC，TG，HDL-C，Meanwhile the F-calculation is also used to test LDL-C.Results Contrast group:there is marked difference in the results of three homogeneous methods(P<0.01，P<0.05)but there is no difference in that of the F-calculations(P>0.05).Pathological group:there is marked difference of concentration mean of hypercholesterolmia patient in using homogeneous methods(P<0.01or P<0.05).While there is marked difference in that of F-calculation(P<0.01or P<0.05).Conclusion Currently，homogeneous methods is preˉferred option in assaying LDL-C.And there is difference in the results of three homogeneouos methods that means there is no comparability among these3kinds.Meanwhile F-calculation is not adaptive in hypertotalcholesterol
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and hypertreglyceridemia patient，which suggest laboratory method and reagent have great significance while generalizing the clinical standard of indication and objective result.And laboratory reference value should also be set in selected reagent boxes.
Key words homogeneous method friedewald-calculation
LDL-C 血脂分析对动脉粥样硬化(AS)、冠心病(CHD)的防治具有重要意义，其中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)与心血管病发病关系密切。目前公认LDL-C属于致动脉粥样硬化脂蛋白，其血中水平越高，动脉粥样硬化的危险性越大。提高LDL-C分析的精确性对临床具有重要意义。匀相法作为临床实验室测定LDL-C的常规方法已普遍应用，另有部分实验室沿用Triedwald公式计算估测LDL-C值。笔者选用国内常用的几种不同厂家生产的匀相测定法试剂盒测定LDL-C浓度，及采用公式计算LDL-C估值，探讨它们之间的可比性及对实验结果的影响。
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1 材料与方法
1.1 标本来源 来自本院体检标本，共200例，年龄37～83岁，男123例，女77例，空腹取样分离血清，-20℃待检。
1.2 仪器与试剂 美国Beckman-Coulter LX20全自动生化分析仪。血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)测定采用仪器配套试剂;LDL-C测定采用日本第一化学、申能-德赛、日本Wako公司试剂;HDL-C测定采用日本Wako、美国Beckman-Coulter公司试剂;标准品分别是各试剂公司产品。
1.3 TC、TG上机酶法测定 LDL-C、HDL-C匀相测定法分别采用试剂商提供LX20仪器参数上机测定。HDL-C化学沉淀法，仪器原参数上机测定。
1.4 Triedwald计算公式 LDL-C=TC-HDL-C-TG/2.2。
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1.5 统计学方法 各组间LDL-C水平比较用方差分析进行。
2 结果
根据我国《血脂异常防治建议》 [1] 及参考美国成人胆固醇教育计划(NCEP)和临床对血脂异常或高脂血症、脂蛋白血症分型:按TC>5.72mmol/L、TG>1.70mmol/L为升高，将其分为四型:混合型高脂血症(高TC、高TG)，高胆固醇血症(高TC、合适范围TG)，高甘油三酯血症(高TG、合适范围TC)和对照组(TC、TG均在合适范围)。实验结果见表1。
表1 匀相法及计算法LDL-C结果比较 (略)
2.1 对照组 50例TC<5.72mmol/L、TG<1.70mmol/L，体检健康者，匀相测定法分别为:3.27、2.86、2.54mmol/L，它们之间浓度均数差异有显著性(P<0.01和P<0.05);计算法为:2.88、2.69mmol/L，二者浓度均数差异无显著性(P>0.05)。
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2.2 病理组 混合型高脂血症，50例TC>5.72mmol/L、TG>1.70mmol/L，匀相测定法LDL-C浓度均数分别为:5.02、4.38、3.92mmol/L，均数之间差异有显著性(P<0.01或P<0.05)，计算法LDL-C浓度均数为:4.35、3.90mmol/L，二者均数差异有显著性(P<0.05);高胆固醇血症，50例TC>5.72mmol/L、TG<1.70mmol/L，匀相测定法LDL-C浓度均数分别为:5.34、4.77、4.07mmol/L，均数之间差异有非常显著性(P<0.01)，计算法LDL-C浓度均数为:4.73、4.26mmol/L，二者均数差异有非常显著性(P<0.01);高甘油三酯血症，50例TC<5.72mmol/L、TG>1.70mmol/L，匀相测定法LDL-C浓度均数分别为:3.33、2.89、2.85mmol/L，均数之间差异表现为P<0.01或P>0.05，计算法LDL-C浓度均数为:2.71、2.39mmol/L，二者均数差异有显著性(P<0.05)。
2.3 匀相法与计算法比较 四组分别作方差检验F 1 =11.46、F 2 =14.45、F 3 =16.9、F 4 =14，P值均P<0.01，可认为组间各方法所得LDL-C浓度均数各不相同或不完全相同。数据结果提示:(1)各组中试剂①与其余四种方法差异均有显著性(P<0.01);(2)各组试剂②与计算法1差异均无显著性(P>0.05);(3)各组中试剂③与计算法2除高甘油三酯血症组差异有非常显著性(P<0.01)外，其它差异均无显著性(P>0.05)。
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3 讨论
低密度脂蛋白胆固醇作为心血管病的主要危险因素已被基础研究、流行病研究和临床药物试验所证实。由于LDL-C值增高对AS及CHD影响最为肯定，临床上对冠心病一级预防来说，LDL-C水平作为判断药物治疗疗效的基础。因此，LDL-C检测对临床意义重大。国内各临床实验室测定LDL-C浓度的方法从第一代的聚乙烯硫酸沉淀法，以后随着全自动生化仪的广泛应用，匀相法作为首选方法 [2] 。本文采用三匀相法试剂盒检测LDL-C值，检测结果经过统计学处理，对照组及高脂血症组浓度均数差异均有显著性。三种试剂盒的测试原理、试剂组份基本相同，但各组份在测定反应中的含量不同，校准液浓度不同，可能是引起LDL-C结果差异的原因。血脂测定标准化要求实验室之间的测定结果具有横向和纵向的可比性，要求达到规 定的准确度。实验结果表明，对照组和病理组各匀相试剂盒之间所得LDL-C浓度均数差异有显著性(P<0.01和P<0.05)，结果不具有可比性。血脂测定标准化是保证测定结果准确可靠的基础，其核心要求是准确性的可溯源性 [2] 。因此，首先要求试剂厂家建立一个可靠的参考系统作为准确性基础，亦即溯源到采用原始标准，从而保证各临床实验室检测的准确性，同时要求各临床实验室达到规定的准确度。
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本文选用Beckman仪器配套和不配套两种LDL-C试剂盒，用Triedwald公式计算LDL-C值，结果显示:对照组差异无显著性，表明计算法可适用于TC、TG值低于正常参考范围者，与“血脂异常防治建议”一致;病理组差异有显著性，表明计算法不适用于高TC、高TG的样本。同时本文对匀相法、F公式法之间作方差检验，P值均<0.01，提示组间各方法所得LDL-C浓度均数各不相同或不完全相同。匀相法通过直接测定LDL-C值，具有提高脂蛋白的分析能力 [3] ，并且更简便、快速和可用于自动化仪器 [4] ，有条件的实验室应选用直接测定法，与文献提出的建议LDL-C不要再用F公式计算法 [5] 观点相吻合。
血脂的合适范围和升高水平的划分界限，不仅对筛选冠心病危险的个体有了具体标准，并且指明了饮食与药物治疗指针，以及治疗所要求达到的目标值。2001年实施的ATPⅢ计划，LDL-C最适值降至2.6mmol/L以下，已有研究若将人群的LDL-C水平控制在2.60mmol/L以下即可预防40%的男性缺血性心血管病 [6] 。从本文对照组的实验数据观察，其中“试剂①”LDL-C浓度为3.27mmol/L明显偏高，提示在选用的方法及试剂并制定实验室的参考值对临床上推行的治疗指针和目标值的方案意义重大。此外，结果中还提示对照组LDL-C均数浓度差异有显著性，而三种试剂盒中标明的参考值范围相同，我们认为不能参照该参考值范围，而必须对所选试剂盒制定本实验室的参考值。
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近年来中医研究认为，血脂增高和脂蛋白的异常与中医学观点有关 [7] ，中西医结合在冠心病防治中发挥了很大作用 [8] ，本实验研究可对临床在冠心病防治的疗效观察中，选用测定LDL-C浓度的方法学上有一定的提示作用。
参考文献
1 中华心血管病杂志编辑委员会血脂异常防治对策专题组.血脂异常防治建议.中华心血管病杂志，1997，25:169-172.
2 鄢盛恺.关于临床血脂测定的建议.中华检验医学杂志，2003，26:182-184.
3 Mnauck GR Warnick，N Rifai.Methods for measurement of LDL-cholesterol:A critical assessment of direct measurement by homogeneous assays versus calculation
, 百拇医药
.Clin Chem，2002，48:2236-2254.
4 Nakomura M，Taniguchi Y，Ramamto M，et al.Homogenous assay of serum LDL-ch
olesterol on an automatic analyzer.Clin Chen，1997，43:260.
5 鄢盛恺.第三次全国血脂测定标准化研讨会会议纪要.中华检验医学杂志，2001，24:256.
6 刘静，赵冬，秦兰萍，等.低密度脂蛋白胆固醇与心血管病发病 关系的前瞻性研究.中华心血管病杂志，2001，29:561-565.
7 任新林，李俊彪.降脂汤治疗高脂血症临床观察.中华中西医杂志，2003，4(7):1058-1059.
8 吴建东，郭士全.降脂颗粒治疗高脂血症的临床观察.中华中西医杂志，2003，4(12):1801-1802.
作者单位:200092上海新华医院检验科
(编辑 维兰), 百拇医药
关键词 匀相测定法 F公式计算法 LDL-C
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)08-0682-03
, 百拇医药
The influence of different methods on the results of LDL-C detection
Tao Meihua，Zhang Guanghui，Shen Xia
Department of Clinical Laboratory，Xinhua Hospital，Shanghai Second Medical
University，Shanghai200092.
【Abstract】 Objective To discuss the comparability among three kinds of homogeneous methods in assaying LDL-C，the comparability between two kinds of fried
, 百拇医药
ewald-calculation(F-calculation for short in below)and the comparability between homogeneous method and F-calculation.Methods Samples from healthy group，blended hyˉperlipemia patient，hypercholesterolmia patient and hypertriglyceridemiapatient are respectively collected in order to assay LDL-C，TC，TG，HDL-C，Meanwhile the F-calculation is also used to test LDL-C.Results Contrast group:there is marked difference in the results of three homogeneous methods(P<0.01，P<0.05)but there is no difference in that of the F-calculations(P>0.05).Pathological group:there is marked difference of concentration mean of hypercholesterolmia patient in using homogeneous methods(P<0.01or P<0.05).While there is marked difference in that of F-calculation(P<0.01or P<0.05).Conclusion Currently，homogeneous methods is preˉferred option in assaying LDL-C.And there is difference in the results of three homogeneouos methods that means there is no comparability among these3kinds.Meanwhile F-calculation is not adaptive in hypertotalcholesterol
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and hypertreglyceridemia patient，which suggest laboratory method and reagent have great significance while generalizing the clinical standard of indication and objective result.And laboratory reference value should also be set in selected reagent boxes.
Key words homogeneous method friedewald-calculation
LDL-C 血脂分析对动脉粥样硬化(AS)、冠心病(CHD)的防治具有重要意义，其中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)与心血管病发病关系密切。目前公认LDL-C属于致动脉粥样硬化脂蛋白，其血中水平越高，动脉粥样硬化的危险性越大。提高LDL-C分析的精确性对临床具有重要意义。匀相法作为临床实验室测定LDL-C的常规方法已普遍应用，另有部分实验室沿用Triedwald公式计算估测LDL-C值。笔者选用国内常用的几种不同厂家生产的匀相测定法试剂盒测定LDL-C浓度，及采用公式计算LDL-C估值，探讨它们之间的可比性及对实验结果的影响。
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1 材料与方法
1.1 标本来源 来自本院体检标本，共200例，年龄37～83岁，男123例，女77例，空腹取样分离血清，-20℃待检。
1.2 仪器与试剂 美国Beckman-Coulter LX20全自动生化分析仪。血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)测定采用仪器配套试剂;LDL-C测定采用日本第一化学、申能-德赛、日本Wako公司试剂;HDL-C测定采用日本Wako、美国Beckman-Coulter公司试剂;标准品分别是各试剂公司产品。
1.3 TC、TG上机酶法测定 LDL-C、HDL-C匀相测定法分别采用试剂商提供LX20仪器参数上机测定。HDL-C化学沉淀法，仪器原参数上机测定。
1.4 Triedwald计算公式 LDL-C=TC-HDL-C-TG/2.2。
, http://www.100md.com
1.5 统计学方法 各组间LDL-C水平比较用方差分析进行。
2 结果
根据我国《血脂异常防治建议》 [1] 及参考美国成人胆固醇教育计划(NCEP)和临床对血脂异常或高脂血症、脂蛋白血症分型:按TC>5.72mmol/L、TG>1.70mmol/L为升高，将其分为四型:混合型高脂血症(高TC、高TG)，高胆固醇血症(高TC、合适范围TG)，高甘油三酯血症(高TG、合适范围TC)和对照组(TC、TG均在合适范围)。实验结果见表1。
表1 匀相法及计算法LDL-C结果比较 (略)
2.1 对照组 50例TC<5.72mmol/L、TG<1.70mmol/L，体检健康者，匀相测定法分别为:3.27、2.86、2.54mmol/L，它们之间浓度均数差异有显著性(P<0.01和P<0.05);计算法为:2.88、2.69mmol/L，二者浓度均数差异无显著性(P>0.05)。
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2.2 病理组 混合型高脂血症，50例TC>5.72mmol/L、TG>1.70mmol/L，匀相测定法LDL-C浓度均数分别为:5.02、4.38、3.92mmol/L，均数之间差异有显著性(P<0.01或P<0.05)，计算法LDL-C浓度均数为:4.35、3.90mmol/L，二者均数差异有显著性(P<0.05);高胆固醇血症，50例TC>5.72mmol/L、TG<1.70mmol/L，匀相测定法LDL-C浓度均数分别为:5.34、4.77、4.07mmol/L，均数之间差异有非常显著性(P<0.01)，计算法LDL-C浓度均数为:4.73、4.26mmol/L，二者均数差异有非常显著性(P<0.01);高甘油三酯血症，50例TC<5.72mmol/L、TG>1.70mmol/L，匀相测定法LDL-C浓度均数分别为:3.33、2.89、2.85mmol/L，均数之间差异表现为P<0.01或P>0.05，计算法LDL-C浓度均数为:2.71、2.39mmol/L，二者均数差异有显著性(P<0.05)。
2.3 匀相法与计算法比较 四组分别作方差检验F 1 =11.46、F 2 =14.45、F 3 =16.9、F 4 =14，P值均P<0.01，可认为组间各方法所得LDL-C浓度均数各不相同或不完全相同。数据结果提示:(1)各组中试剂①与其余四种方法差异均有显著性(P<0.01);(2)各组试剂②与计算法1差异均无显著性(P>0.05);(3)各组中试剂③与计算法2除高甘油三酯血症组差异有非常显著性(P<0.01)外，其它差异均无显著性(P>0.05)。
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3 讨论
低密度脂蛋白胆固醇作为心血管病的主要危险因素已被基础研究、流行病研究和临床药物试验所证实。由于LDL-C值增高对AS及CHD影响最为肯定，临床上对冠心病一级预防来说，LDL-C水平作为判断药物治疗疗效的基础。因此，LDL-C检测对临床意义重大。国内各临床实验室测定LDL-C浓度的方法从第一代的聚乙烯硫酸沉淀法，以后随着全自动生化仪的广泛应用，匀相法作为首选方法 [2] 。本文采用三匀相法试剂盒检测LDL-C值，检测结果经过统计学处理，对照组及高脂血症组浓度均数差异均有显著性。三种试剂盒的测试原理、试剂组份基本相同，但各组份在测定反应中的含量不同，校准液浓度不同，可能是引起LDL-C结果差异的原因。血脂测定标准化要求实验室之间的测定结果具有横向和纵向的可比性，要求达到规 定的准确度。实验结果表明，对照组和病理组各匀相试剂盒之间所得LDL-C浓度均数差异有显著性(P<0.01和P<0.05)，结果不具有可比性。血脂测定标准化是保证测定结果准确可靠的基础，其核心要求是准确性的可溯源性 [2] 。因此，首先要求试剂厂家建立一个可靠的参考系统作为准确性基础，亦即溯源到采用原始标准，从而保证各临床实验室检测的准确性，同时要求各临床实验室达到规定的准确度。
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本文选用Beckman仪器配套和不配套两种LDL-C试剂盒，用Triedwald公式计算LDL-C值，结果显示:对照组差异无显著性，表明计算法可适用于TC、TG值低于正常参考范围者，与“血脂异常防治建议”一致;病理组差异有显著性，表明计算法不适用于高TC、高TG的样本。同时本文对匀相法、F公式法之间作方差检验，P值均<0.01，提示组间各方法所得LDL-C浓度均数各不相同或不完全相同。匀相法通过直接测定LDL-C值，具有提高脂蛋白的分析能力 [3] ，并且更简便、快速和可用于自动化仪器 [4] ，有条件的实验室应选用直接测定法，与文献提出的建议LDL-C不要再用F公式计算法 [5] 观点相吻合。
血脂的合适范围和升高水平的划分界限，不仅对筛选冠心病危险的个体有了具体标准，并且指明了饮食与药物治疗指针，以及治疗所要求达到的目标值。2001年实施的ATPⅢ计划，LDL-C最适值降至2.6mmol/L以下，已有研究若将人群的LDL-C水平控制在2.60mmol/L以下即可预防40%的男性缺血性心血管病 [6] 。从本文对照组的实验数据观察，其中“试剂①”LDL-C浓度为3.27mmol/L明显偏高，提示在选用的方法及试剂并制定实验室的参考值对临床上推行的治疗指针和目标值的方案意义重大。此外，结果中还提示对照组LDL-C均数浓度差异有显著性，而三种试剂盒中标明的参考值范围相同，我们认为不能参照该参考值范围，而必须对所选试剂盒制定本实验室的参考值。
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近年来中医研究认为，血脂增高和脂蛋白的异常与中医学观点有关 [7] ，中西医结合在冠心病防治中发挥了很大作用 [8] ，本实验研究可对临床在冠心病防治的疗效观察中，选用测定LDL-C浓度的方法学上有一定的提示作用。
参考文献
1 中华心血管病杂志编辑委员会血脂异常防治对策专题组.血脂异常防治建议.中华心血管病杂志，1997，25:169-172.
2 鄢盛恺.关于临床血脂测定的建议.中华检验医学杂志，2003，26:182-184.
3 Mnauck GR Warnick，N Rifai.Methods for measurement of LDL-cholesterol:A critical assessment of direct measurement by homogeneous assays versus calculation
, 百拇医药
.Clin Chem，2002，48:2236-2254.
4 Nakomura M，Taniguchi Y，Ramamto M，et al.Homogenous assay of serum LDL-ch
olesterol on an automatic analyzer.Clin Chen，1997，43:260.
5 鄢盛恺.第三次全国血脂测定标准化研讨会会议纪要.中华检验医学杂志，2001，24:256.
6 刘静，赵冬，秦兰萍，等.低密度脂蛋白胆固醇与心血管病发病 关系的前瞻性研究.中华心血管病杂志，2001，29:561-565.
7 任新林，李俊彪.降脂汤治疗高脂血症临床观察.中华中西医杂志，2003，4(7):1058-1059.
8 吴建东，郭士全.降脂颗粒治疗高脂血症的临床观察.中华中西医杂志，2003，4(12):1801-1802.
作者单位:200092上海新华医院检验科
(编辑 维兰), 百拇医药