不同方法取材衣原体PCR检测结果比较分析
【摘要】 目的 比较不同方法取材对衣原体(CT)PCR检测结果的影响。方法 将非淋球菌性尿道炎患者382例随机分4组，A组89例，早上不排尿前取尿道拭子，伸入深度大于2cm，马上排尿，收集前段尿10ml，离心尿液沉淀，经生理盐水洗涤3次，沉淀与尿道拭子一起作为一份原始标本;B组98例，排晨尿前取尿道拭子;C组99例，晨尿前段标本10ml，与A组尿液一样处理;D组96例，早上排尿后取尿道拭子。4组标本均用PCR法检测。结果 A组阳性率为41.6%，B组阳性率为33.7%，C组阳性率为32.3%，D组阳性率为24.0%，A组结果与B、C两组比较差异有显著性(P<0.05)，与D组比较差异有非常显著性(P<0.01);B组与C组结果比较差异无显著性(P>0.05);D组与B、C两组结果比较差异有显著性(P<0.05)。结论 收集丰富的尿道上皮细胞可提高CT检出率;晨尿前取材与晨尿后取材CT检出率差异有显著性。
关键词 非淋菌性尿道炎 衣原体 聚合酶链式反应 取材方法
, http://www.100md.com 【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2004)09-0808-02
A comparing analysis on PCR detectable result
of chlamydia by different sampling
Yu Jinsheng，Fan Ruiqing
Hueidong County People’s Hospital，Guangdong516300.
【Abstract】 Objective To study the influence of sampling in different way on the PCR(polymerase chain reˉaction)detectable result of chlamrdia.Methods 382patients with non-gonococcal urethritis were divided into four groups.Group A was89cases.Before morning urination，a urethral wiper was probe into urethra2cm in depth，then let the patient micturit urine10ml，later the urine was centrifugalized and let it form sediment，and then washed it3times.The precipitates and wrethral wiper were acted as an original specimen.In group B there were98cases，which were taken an urethral wiper before morming urination.Group C had99cases，in which morning preceding section wrine10ml was treated as in group A.Group D had96cases，on whomwere taken an urethral wiper after morning uriˉnation.The specimens were all detected by PCR method.Results The positive rate in group A was41.6%，33.7%in group B，32.3%in group C，and it was24.0%in group D.There were obvious difference between group A and group B，C(P<0.05);compared to group D，thedifference was very remarkable(P<0.01).The difference was no significant between group B and C(P>0.05).Comparing group D to group B and C，there existed a marked differˉence.Conclusion To collect urethral epithelial cells in rich mightelevate the detectabe rate of chlamydia.There is significant difference on the detectable rate of chlamydia in urine between sampling before and after morning urination.
, 百拇医药
Key words non-gonococcal urethritis chlamydia polymerase chain reaction sampling method
非淋球菌性尿道炎是指由淋球菌以外的其他病原体引起的尿道炎，本病目前在欧美国家已超过淋病而跃居性传播疾病首位。我国病例亦不断增多，成为最常见的性传播疾病之一。沙眼衣原体是非淋球菌性尿道炎的主要病原体之一，40%～50%的非淋球菌性尿道炎由沙眼衣原体引起 [1] 。衣原体感染的诊断决定于病原学检查。除了发展各种检测技术外，许多学者将研究重点转向标本取材的改进。笔者根据衣原体寄生特性和致病性，从收集衣原体寄生的尿道上皮细胞方面入手，比较各种标本采集方法对衣原体检出率的影响。结果表明，早上排尿前先用尿道拭子取材，再排尿取沉渣，混合标本衣原体检测，其检出率最高。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 检测对象 惠东县人民医院皮肤科门诊2002年5月～2003年11月非淋球菌性尿道炎患者392例，年龄在21～42岁，均为男性。将所有病例随机分3组。
, http://www.100md.com
1.2 取材方法 A组:拭子和第1次晨尿取材，89例。早上不排尿前取材，用尽量小的拭子，避免尿道损伤的情况下棉花量尽量少，伸入尿道的深度>2cm，轻轻转动拭子2～3周，取出拭子，马上排尿，收集前段尿10ml以上于无菌试管，离心，沉淀用生理盐水洗涤3次，洗涤后的沉淀与尿道拭子处理后的标本一起裂解作PCR检测。B组:拭子标本98例，排弃第1次晨尿前取尿道拭子，拭子为普通尿道拭子，伸入尿道深度>2cm，操作同A组拭子取材。C组:第1次晨尿标本99例，第1次晨尿前段10ml以上于无菌试管同A组晨尿处理。D组:尿后尿道拭子96例，早上排尿后取尿道拭子，伸入尿道深度>2cm，操作同A组拭子取材。
1.3 检测方法 衣原体检测用PCR法，仪器为BIO-RAD2400型PCR扩增仪，PCR试剂由华美生物工程公司生产。
2 结果
见表1。
, 百拇医药
表1 4种方法取材PCR检测结果
注:A组与B、C两组比较差异有显著性(P<0.05)，A组与D组比较差异有非常显著性(P<0.001)，D组与B、C组比较差异有显著性。
3 讨论
沙眼衣原体是非淋菌性尿道炎的主要病原体之一，衣原体感染引起尿道炎后，容易上行感染引起附睾炎和前列腺炎，甚至引起多发性关节炎 [2] 。衣原体引起的尿道炎程度较轻，部分病人无症状 [3] ，患者容易忽视，且衣原体经常与淋球菌混合感染 [4] ，而淋菌和衣原体感染治疗药物不同，往往用药后淋球菌治愈，病人症状明显减轻，而衣原体仍继续感染。因此，为了能准确、系统地用药，提高衣原体的检出率非常重要。提高衣原体的检出率决定于实验室检测方法和取材的科学性。目前用于衣原体诊断的检测方法中，PCR方法具有高度敏感性和特异性，只要严格规范操作，容易避免假阴性及假阳性结果的出现，对于有条件的实验室，PCR法是衣原体临床诊断的理想检测方法 [5] 。目前除了发展各种检测技术外，国内外学者还致力于标本取材的改进。除尿标本外，外阴标本也可能作为一种非侵入性标本而适用于PCR等高度敏感的检测方法，在筛查高危人群中可能会替代侵入性标本 [5] 。所有标本的收集，最终目的是获取丰富的寄生于体内的衣原体。衣原体寄生于尿道扁平柱状上皮细胞繁殖 [6] ，所以要提高衣原体检出率，标本必需富含尿道上皮细胞。应掌红报道 [7] ，拭子伸入尿道内2～4cm所取标本检测结果显著高于拭子伸入尿道0.5～2cm所取标本检测结果。从应掌红的研究结果发现，拭子伸入尿道较深时，取得的上皮细胞较多，所以衣原体检出率较高。
, http://www.100md.com
在检测方法相对固定的情况下，为提高CT的检出率， 本研究从尽量收集尿道上皮细胞的角度改进取材方法。本实验B组和D组均是单纯尿道拭子，二者区别是B组是排尿前取材，保留了尿道内被CT破坏(脱落)的上皮细胞，而D组尿后取材尿道内脱落的上皮细胞已被尿液冲走相当一部分;C组是单纯晨尿前段标本;A组则是拭子和晨尿前段双标本，并且在拭子之后留前段尿，可保证拭子采取过程被拭子剥落而未被带出的那部分上皮细胞由尿液带出，而且排尿时尿液可把尿道深部脱落的上皮细胞冲出，因此，A组取材收集到的上皮细胞要明显多于其他3组取材。实验结果表明，A组CT检测结果显著高于B组和C组(P<0.05)，与D组差异更明显(P<0.01);B组和C组结果差异无显著性(P>0.05);D组阳性率显著低于B组和C组(P<0.05)。结果提示，拭子后留前段晨尿，拭子和洗涤后的尿沉淀双标本作CT检测可明显提高CT检出率;如确须避免尿道侵入性创伤，可用晨尿标本(沉淀洗涤)代替尿道拭子。因衣原体生活周期较长(48～72h)，且结构因衣原体大量繁殖而破坏或裂解死亡(脱落)的上皮细胞富含衣原体 [8] ，为保证收集这种被CT感染破坏脱落的细胞，最好排尿前取材。为减轻尿道侵入性创伤，保证受力的情况下拭子应尽量细小。
, http://www.100md.com
参考文献
1 陈洪铎.皮肤性病学，第4版.北京:人民卫生出版社，1999，10，193.
2 吴志华.性传播疾病，第3版.广州:广东科技出版社，1997，04，153.
3 闻玉梅.现代医学微生物学，上海:上海医科大学出版社，1999，581.
4 黄志强.2215例泌尿生殖道淋病与非淋病性混合感染临床分析.贵州医药，2001，25(4):346-347.
5 五幸福.沙眼衣原体实验诊断技术研究进展.国外医学·临床生物化学与检验学分册，2001，22(4):200-201.
6 闻玉梅.现代医学微生物学，上海:上海医科大学出版社，1999，571.
7 应掌红.男性沙眼衣原体检测取材方法的探讨.海峡预防医学杂志，2002，8(2):132.
8 闻玉梅.现代医学微生物学.上海:上海医科大学出版社，1999，573.
作者单位:516300广东省惠东县人民医院检验科(皮肤科)
(收稿日期:2004-02-17)
(编辑罗 彬), 百拇医药
关键词 非淋菌性尿道炎 衣原体 聚合酶链式反应 取材方法
, http://www.100md.com 【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2004)09-0808-02
A comparing analysis on PCR detectable result
of chlamydia by different sampling
Yu Jinsheng，Fan Ruiqing
Hueidong County People’s Hospital，Guangdong516300.
【Abstract】 Objective To study the influence of sampling in different way on the PCR(polymerase chain reˉaction)detectable result of chlamrdia.Methods 382patients with non-gonococcal urethritis were divided into four groups.Group A was89cases.Before morning urination，a urethral wiper was probe into urethra2cm in depth，then let the patient micturit urine10ml，later the urine was centrifugalized and let it form sediment，and then washed it3times.The precipitates and wrethral wiper were acted as an original specimen.In group B there were98cases，which were taken an urethral wiper before morming urination.Group C had99cases，in which morning preceding section wrine10ml was treated as in group A.Group D had96cases，on whomwere taken an urethral wiper after morning uriˉnation.The specimens were all detected by PCR method.Results The positive rate in group A was41.6%，33.7%in group B，32.3%in group C，and it was24.0%in group D.There were obvious difference between group A and group B，C(P<0.05);compared to group D，thedifference was very remarkable(P<0.01).The difference was no significant between group B and C(P>0.05).Comparing group D to group B and C，there existed a marked differˉence.Conclusion To collect urethral epithelial cells in rich mightelevate the detectabe rate of chlamydia.There is significant difference on the detectable rate of chlamydia in urine between sampling before and after morning urination.
, 百拇医药
Key words non-gonococcal urethritis chlamydia polymerase chain reaction sampling method
非淋球菌性尿道炎是指由淋球菌以外的其他病原体引起的尿道炎，本病目前在欧美国家已超过淋病而跃居性传播疾病首位。我国病例亦不断增多，成为最常见的性传播疾病之一。沙眼衣原体是非淋球菌性尿道炎的主要病原体之一，40%～50%的非淋球菌性尿道炎由沙眼衣原体引起 [1] 。衣原体感染的诊断决定于病原学检查。除了发展各种检测技术外，许多学者将研究重点转向标本取材的改进。笔者根据衣原体寄生特性和致病性，从收集衣原体寄生的尿道上皮细胞方面入手，比较各种标本采集方法对衣原体检出率的影响。结果表明，早上排尿前先用尿道拭子取材，再排尿取沉渣，混合标本衣原体检测，其检出率最高。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 检测对象 惠东县人民医院皮肤科门诊2002年5月～2003年11月非淋球菌性尿道炎患者392例，年龄在21～42岁，均为男性。将所有病例随机分3组。
, http://www.100md.com
1.2 取材方法 A组:拭子和第1次晨尿取材，89例。早上不排尿前取材，用尽量小的拭子，避免尿道损伤的情况下棉花量尽量少，伸入尿道的深度>2cm，轻轻转动拭子2～3周，取出拭子，马上排尿，收集前段尿10ml以上于无菌试管，离心，沉淀用生理盐水洗涤3次，洗涤后的沉淀与尿道拭子处理后的标本一起裂解作PCR检测。B组:拭子标本98例，排弃第1次晨尿前取尿道拭子，拭子为普通尿道拭子，伸入尿道深度>2cm，操作同A组拭子取材。C组:第1次晨尿标本99例，第1次晨尿前段10ml以上于无菌试管同A组晨尿处理。D组:尿后尿道拭子96例，早上排尿后取尿道拭子，伸入尿道深度>2cm，操作同A组拭子取材。
1.3 检测方法 衣原体检测用PCR法，仪器为BIO-RAD2400型PCR扩增仪，PCR试剂由华美生物工程公司生产。
2 结果
见表1。
, 百拇医药
表1 4种方法取材PCR检测结果
注:A组与B、C两组比较差异有显著性(P<0.05)，A组与D组比较差异有非常显著性(P<0.001)，D组与B、C组比较差异有显著性。
3 讨论
沙眼衣原体是非淋菌性尿道炎的主要病原体之一，衣原体感染引起尿道炎后，容易上行感染引起附睾炎和前列腺炎，甚至引起多发性关节炎 [2] 。衣原体引起的尿道炎程度较轻，部分病人无症状 [3] ，患者容易忽视，且衣原体经常与淋球菌混合感染 [4] ，而淋菌和衣原体感染治疗药物不同，往往用药后淋球菌治愈，病人症状明显减轻，而衣原体仍继续感染。因此，为了能准确、系统地用药，提高衣原体的检出率非常重要。提高衣原体的检出率决定于实验室检测方法和取材的科学性。目前用于衣原体诊断的检测方法中，PCR方法具有高度敏感性和特异性，只要严格规范操作，容易避免假阴性及假阳性结果的出现，对于有条件的实验室，PCR法是衣原体临床诊断的理想检测方法 [5] 。目前除了发展各种检测技术外，国内外学者还致力于标本取材的改进。除尿标本外，外阴标本也可能作为一种非侵入性标本而适用于PCR等高度敏感的检测方法，在筛查高危人群中可能会替代侵入性标本 [5] 。所有标本的收集，最终目的是获取丰富的寄生于体内的衣原体。衣原体寄生于尿道扁平柱状上皮细胞繁殖 [6] ，所以要提高衣原体检出率，标本必需富含尿道上皮细胞。应掌红报道 [7] ，拭子伸入尿道内2～4cm所取标本检测结果显著高于拭子伸入尿道0.5～2cm所取标本检测结果。从应掌红的研究结果发现，拭子伸入尿道较深时，取得的上皮细胞较多，所以衣原体检出率较高。
, http://www.100md.com
在检测方法相对固定的情况下，为提高CT的检出率， 本研究从尽量收集尿道上皮细胞的角度改进取材方法。本实验B组和D组均是单纯尿道拭子，二者区别是B组是排尿前取材，保留了尿道内被CT破坏(脱落)的上皮细胞，而D组尿后取材尿道内脱落的上皮细胞已被尿液冲走相当一部分;C组是单纯晨尿前段标本;A组则是拭子和晨尿前段双标本，并且在拭子之后留前段尿，可保证拭子采取过程被拭子剥落而未被带出的那部分上皮细胞由尿液带出，而且排尿时尿液可把尿道深部脱落的上皮细胞冲出，因此，A组取材收集到的上皮细胞要明显多于其他3组取材。实验结果表明，A组CT检测结果显著高于B组和C组(P<0.05)，与D组差异更明显(P<0.01);B组和C组结果差异无显著性(P>0.05);D组阳性率显著低于B组和C组(P<0.05)。结果提示，拭子后留前段晨尿，拭子和洗涤后的尿沉淀双标本作CT检测可明显提高CT检出率;如确须避免尿道侵入性创伤，可用晨尿标本(沉淀洗涤)代替尿道拭子。因衣原体生活周期较长(48～72h)，且结构因衣原体大量繁殖而破坏或裂解死亡(脱落)的上皮细胞富含衣原体 [8] ，为保证收集这种被CT感染破坏脱落的细胞，最好排尿前取材。为减轻尿道侵入性创伤，保证受力的情况下拭子应尽量细小。
, http://www.100md.com
参考文献
1 陈洪铎.皮肤性病学，第4版.北京:人民卫生出版社，1999，10，193.
2 吴志华.性传播疾病，第3版.广州:广东科技出版社，1997，04，153.
3 闻玉梅.现代医学微生物学，上海:上海医科大学出版社，1999，581.
4 黄志强.2215例泌尿生殖道淋病与非淋病性混合感染临床分析.贵州医药，2001，25(4):346-347.
5 五幸福.沙眼衣原体实验诊断技术研究进展.国外医学·临床生物化学与检验学分册，2001，22(4):200-201.
6 闻玉梅.现代医学微生物学，上海:上海医科大学出版社，1999，571.
7 应掌红.男性沙眼衣原体检测取材方法的探讨.海峡预防医学杂志，2002，8(2):132.
8 闻玉梅.现代医学微生物学.上海:上海医科大学出版社，1999，573.
作者单位:516300广东省惠东县人民医院检验科(皮肤科)
(收稿日期:2004-02-17)
(编辑罗 彬), 百拇医药