柴葛口服液的毒理学研究
【摘要】 目的 观察连续给予柴葛口服液后对大鼠机体产生的毒性反应及程度，以及一次给予大剂量后小鼠的耐受情况。方法 按传统的长期毒性、急性毒性试验和安全限度试验方法。结果 小鼠的最大耐受量为37.5g·kg -1 ·d -1 (相当于人用量的125倍);长毒试验中高、中、低(10.5、5.25、2.63g·kg -1 ·d -1 分别相当于临床剂量的35倍、17.5倍和8.8倍)剂量组大鼠未见明显异常表现。结论 柴葛口服液临床剂量使用是安全的。
关键词 柴葛口服液 急性毒性试验 长期毒性试验 安全限度试验 最大耐受量
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)09-0781-03
Studies on toxicology of chai ge oral liquid
, 百拇医药
Wang Gang，Gu Rong，Lou Bin
Department of Clinial pharmacy，Children’s Hospital Chongqing University of
Medical Sciences.Chongqing400014.
【Abstract】 Objective To observe the toxic reaction and degree on organism of wistar rats and BALB/C mice taken in order to provide the target organ of toxic action and damage reversiblity.Methods The studies have been done acording to the traditional methods of long-term toxicity and acute toxicity tests.Results The endurance limit of BALB/C mice were37.5g·Kg -1 ·d -1 (125times for clinical doseage)in acute toxicity tests，The Wister mice of three rested dosage groups at10.5，5.25，2.63g·Kg -1 ·d -1 (35，17.5and8.8times for clinical doseage)have noabˉnormal phenomena in long-term toxic test.Conclusion Chai Ge Oral Liquid was safe in clinical dose for long-term used.
, 百拇医药
Key words chai ge oral liquid acute toxic test long-term toxic test safety l
imit test endurance limit
柴葛口服液(Chai Ge Oral Liquid下称CGOL)是我院著名老中医专家依据“小柴胡汤”合“银翘散”化裁而成，由柴胡、葛根、连翘等天然药物组成，临床以汤剂应用30余年，证明对病毒、细菌所致的上感、腮腺炎、高热等症有确切的疗效。但汤剂应用不便，将其改为质量稳定、服用方便的口服液。现对其进行动物毒性试验研究，以便更安全有效的应用该口服液。
1 材料与方法
1.1 试药和动物 CGOL(本院自制，规格:10ml/支，每毫升相当于3g原生药，批号:20020429，20020506，20020615本院自制)，BALB/C小白鼠，Wistar大白鼠及饲料[重庆医科大学医学动物中心，动物许可证:SYXK(渝)20020007]，全自动血液、生化分析仪(美国DADE BEHRING DIMENSION RL，所用生化试剂均购自美国DADE BEHRING公司)，电子天平(A-12
, http://www.100md.com
0-CSi朝鲜COBOS)。
1.2 方法
1.2.1 急性毒性试验 [1，2] 在室温25℃实验室中，取健康BALB/C小白鼠100只，体重18～22g，雌雄各半，随机分5组，按等比数设计5个剂量组，参照预试结果，最大剂量组按每只小鼠6g/d(20g/只)，相当于临床人用量的100倍剂量，最大灌胃容量为1.0ml/20g，相邻剂量比为1∶0.8，试验前各小鼠禁食12h后，以CGOL的浓缩液一次灌胃染毒，给药后自由饮水和进食，观察7d内的中毒反应:耸毛、步履、呼吸、惊厥、大小便以及死亡时间和死亡数，以死亡为主要指标。结果观察7d无一只小鼠死亡，其他体征亦无明显变化，未求出LD 50 。另取健康ABLB/C小鼠20只，雌雄各半，体重18～22g，以CGKOL浓缩后的最大浓度(7.5g/ml)和最大体积(1.0ml/20g体重)灌胃给药，测得小鼠的最大耐受量为37.5g·kg -1 ·d -1 体重，相当于人用量的125倍(>100倍)，因此安全无毒。
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1.2.2 长期毒性试验 [1～3] 取体重为(200±20)g的Wistar大白鼠80只，雌雄各半，随机分为4组，每组20只，常规饲养7d，经查血常规及血液生化指标检查正常后供试验。参考动物间等效剂量比值文献 [1] ，按体表面积折算大鼠(200g)的等效剂量为小鼠(20g)的7倍，并以小鼠最大耐受量折算为大鼠最大耐受量值的0.20、0.10、0.05倍设计高、中、低3个剂量组(10.5、5.25、2.63g·kg -1 ·d -1 )和1个生理盐水对照组，分别灌胃给药，最大给药体积为10.0ml·kg -1 ·d -1 ，对照组给予同体积的生理盐水，每天按时测定体重1次，并根据大鼠体重变化调整给药量后按时每天给药1次，连续30天;给药后仔细观察各动物的活动:外观体征、行走情况、饮食、粪便、尿液等有无异常。给药结束(30d)时及停药15d时各剂量组随机分别取2/3和1/3的动物，在全自动血液、生化分析仪上进行血液学的红细胞、白细胞、白细胞记数和分类等四项常规检测和血液学的主要生化指标检测:总蛋白(total protein TP)、白蛋白(albumin protein ALP)、谷氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷氨酸丙酮酸转氨酶(glutamic pyruvic tranasaminase GPT)、谷氨酸草酰乙酸转氨酶(glutamic oxalo-acetic tranasaminase GOT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase AKP)、血糖、甘油三酯(TG)、肌苷(CREA)、尿毒(UREA)等(见表1、表2)。另将中途死亡和观察结束时处死的动物迅速剖取心、肝、脾、肾、肺等重要脏器，准确测定重量，计算脏器系数，肉眼仔细观察上述脏 器有无异常，并对高剂量组和对照组的脏器进行病理组织学检查(见图1～5)。
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表1 柴葛口服液对大鼠灌胃30d的血液常规指标检测结果 略
表2 柴葛口服液对大鼠灌胃30d的血液学生化指标检测结果 略
2 结果
急性毒性试验未测出LD 50 ，安全限度试验结果小鼠的最大耐受量为人用量的125倍，表明本制剂安全无毒。在 图4 高剂量组大鼠肺组织(×200)图5 高剂量组大鼠脾组织(×200) 长期毒性试验中，给药后的5d内，最大剂量组的个别大鼠有少许烦躁、惊恐，7d后基本适应，中、低剂量组则始终表现正常;在整个试验过程中，各组大鼠体重在不同时期呈现不同程度的增长，各实验组较对照组增长缓慢，与之比较差异无显著性(P>0.05)。给药结束和经恢复期后各组大鼠的各项检测指标(除GPT)均在正常值范围内，各剂量组与对照组经配对t检验未见明显差异(P>0.05)。解剖心、肝、脾、肺等重要脏器肉眼未见明显变化，血液学和血液学生化检测均与对照组接近(见表3、表4)，差异无显著性(P>0.05)。病理学组织检查高剂量组有1只大鼠在灌药30d时的肺组织高倍(×200)镜下仅见轻度水肿外无别的异常改变;经停药恢复期15d后的高剂量组和对照组所有重要脏器病理学组织学检查均正常，未见任何异常改变。
, 百拇医药
表3 柴葛口服液灌胃后大鼠经15d恢复期的血液常规指标检测结果 略
表4 柴葛口服液灌胃后大鼠经15d恢复期的血液学生化指标检测结果 略
3 讨论
柴葛口服液经小鼠安全限度试验测得其最大耐受量为37.5g·kg -1 ·d -1 ，相当于人用量的125倍(>100倍);对大鼠进行了45d的长期毒性试验，当高剂量组每天给予量为10.5g·kg -1 ·d -1 (相当于临床用量的35倍)，持续给药30d未见动物死亡，实验结束时高剂量组的GPT与对照组比较差异有显著性(P<0.05)外，其余各项指标未出现明显变化，经15d恢复期后GPT亦恢复正常。因此，经急性毒性和长期毒性动物试验表明，柴葛口服液在临床剂量下使用是 安全无毒的。
, 百拇医药 参考文献
1 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社，2002，226-240.附录1861.
2 张均田.现代药理实验方法.北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1998，1810-1826.
3 周立国，刘泰然，郑春敏，等.便乃通过大白鼠的长期毒性试验研究.华西药学杂志，2001，16(3):184.
作者单位:400014重庆医科大学儿科学院临床药学研究室
(编辑 李木), http://www.100md.com
关键词 柴葛口服液 急性毒性试验 长期毒性试验 安全限度试验 最大耐受量
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)09-0781-03
Studies on toxicology of chai ge oral liquid
, 百拇医药
Wang Gang，Gu Rong，Lou Bin
Department of Clinial pharmacy，Children’s Hospital Chongqing University of
Medical Sciences.Chongqing400014.
【Abstract】 Objective To observe the toxic reaction and degree on organism of wistar rats and BALB/C mice taken in order to provide the target organ of toxic action and damage reversiblity.Methods The studies have been done acording to the traditional methods of long-term toxicity and acute toxicity tests.Results The endurance limit of BALB/C mice were37.5g·Kg -1 ·d -1 (125times for clinical doseage)in acute toxicity tests，The Wister mice of three rested dosage groups at10.5，5.25，2.63g·Kg -1 ·d -1 (35，17.5and8.8times for clinical doseage)have noabˉnormal phenomena in long-term toxic test.Conclusion Chai Ge Oral Liquid was safe in clinical dose for long-term used.
, 百拇医药
Key words chai ge oral liquid acute toxic test long-term toxic test safety l
imit test endurance limit
柴葛口服液(Chai Ge Oral Liquid下称CGOL)是我院著名老中医专家依据“小柴胡汤”合“银翘散”化裁而成，由柴胡、葛根、连翘等天然药物组成，临床以汤剂应用30余年，证明对病毒、细菌所致的上感、腮腺炎、高热等症有确切的疗效。但汤剂应用不便，将其改为质量稳定、服用方便的口服液。现对其进行动物毒性试验研究，以便更安全有效的应用该口服液。
1 材料与方法
1.1 试药和动物 CGOL(本院自制，规格:10ml/支，每毫升相当于3g原生药，批号:20020429，20020506，20020615本院自制)，BALB/C小白鼠，Wistar大白鼠及饲料[重庆医科大学医学动物中心，动物许可证:SYXK(渝)20020007]，全自动血液、生化分析仪(美国DADE BEHRING DIMENSION RL，所用生化试剂均购自美国DADE BEHRING公司)，电子天平(A-12
, http://www.100md.com
0-CSi朝鲜COBOS)。
1.2 方法
1.2.1 急性毒性试验 [1，2] 在室温25℃实验室中，取健康BALB/C小白鼠100只，体重18～22g，雌雄各半，随机分5组，按等比数设计5个剂量组，参照预试结果，最大剂量组按每只小鼠6g/d(20g/只)，相当于临床人用量的100倍剂量，最大灌胃容量为1.0ml/20g，相邻剂量比为1∶0.8，试验前各小鼠禁食12h后，以CGOL的浓缩液一次灌胃染毒，给药后自由饮水和进食，观察7d内的中毒反应:耸毛、步履、呼吸、惊厥、大小便以及死亡时间和死亡数，以死亡为主要指标。结果观察7d无一只小鼠死亡，其他体征亦无明显变化，未求出LD 50 。另取健康ABLB/C小鼠20只，雌雄各半，体重18～22g，以CGKOL浓缩后的最大浓度(7.5g/ml)和最大体积(1.0ml/20g体重)灌胃给药，测得小鼠的最大耐受量为37.5g·kg -1 ·d -1 体重，相当于人用量的125倍(>100倍)，因此安全无毒。
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1.2.2 长期毒性试验 [1～3] 取体重为(200±20)g的Wistar大白鼠80只，雌雄各半，随机分为4组，每组20只，常规饲养7d，经查血常规及血液生化指标检查正常后供试验。参考动物间等效剂量比值文献 [1] ，按体表面积折算大鼠(200g)的等效剂量为小鼠(20g)的7倍，并以小鼠最大耐受量折算为大鼠最大耐受量值的0.20、0.10、0.05倍设计高、中、低3个剂量组(10.5、5.25、2.63g·kg -1 ·d -1 )和1个生理盐水对照组，分别灌胃给药，最大给药体积为10.0ml·kg -1 ·d -1 ，对照组给予同体积的生理盐水，每天按时测定体重1次，并根据大鼠体重变化调整给药量后按时每天给药1次，连续30天;给药后仔细观察各动物的活动:外观体征、行走情况、饮食、粪便、尿液等有无异常。给药结束(30d)时及停药15d时各剂量组随机分别取2/3和1/3的动物，在全自动血液、生化分析仪上进行血液学的红细胞、白细胞、白细胞记数和分类等四项常规检测和血液学的主要生化指标检测:总蛋白(total protein TP)、白蛋白(albumin protein ALP)、谷氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷氨酸丙酮酸转氨酶(glutamic pyruvic tranasaminase GPT)、谷氨酸草酰乙酸转氨酶(glutamic oxalo-acetic tranasaminase GOT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase AKP)、血糖、甘油三酯(TG)、肌苷(CREA)、尿毒(UREA)等(见表1、表2)。另将中途死亡和观察结束时处死的动物迅速剖取心、肝、脾、肾、肺等重要脏器，准确测定重量，计算脏器系数，肉眼仔细观察上述脏 器有无异常，并对高剂量组和对照组的脏器进行病理组织学检查(见图1～5)。
, http://www.100md.com
表1 柴葛口服液对大鼠灌胃30d的血液常规指标检测结果 略
表2 柴葛口服液对大鼠灌胃30d的血液学生化指标检测结果 略
2 结果
急性毒性试验未测出LD 50 ，安全限度试验结果小鼠的最大耐受量为人用量的125倍，表明本制剂安全无毒。在 图4 高剂量组大鼠肺组织(×200)图5 高剂量组大鼠脾组织(×200) 长期毒性试验中，给药后的5d内，最大剂量组的个别大鼠有少许烦躁、惊恐，7d后基本适应，中、低剂量组则始终表现正常;在整个试验过程中，各组大鼠体重在不同时期呈现不同程度的增长，各实验组较对照组增长缓慢，与之比较差异无显著性(P>0.05)。给药结束和经恢复期后各组大鼠的各项检测指标(除GPT)均在正常值范围内，各剂量组与对照组经配对t检验未见明显差异(P>0.05)。解剖心、肝、脾、肺等重要脏器肉眼未见明显变化，血液学和血液学生化检测均与对照组接近(见表3、表4)，差异无显著性(P>0.05)。病理学组织检查高剂量组有1只大鼠在灌药30d时的肺组织高倍(×200)镜下仅见轻度水肿外无别的异常改变;经停药恢复期15d后的高剂量组和对照组所有重要脏器病理学组织学检查均正常，未见任何异常改变。
, 百拇医药
表3 柴葛口服液灌胃后大鼠经15d恢复期的血液常规指标检测结果 略
表4 柴葛口服液灌胃后大鼠经15d恢复期的血液学生化指标检测结果 略
3 讨论
柴葛口服液经小鼠安全限度试验测得其最大耐受量为37.5g·kg -1 ·d -1 ，相当于人用量的125倍(>100倍);对大鼠进行了45d的长期毒性试验，当高剂量组每天给予量为10.5g·kg -1 ·d -1 (相当于临床用量的35倍)，持续给药30d未见动物死亡，实验结束时高剂量组的GPT与对照组比较差异有显著性(P<0.05)外，其余各项指标未出现明显变化，经15d恢复期后GPT亦恢复正常。因此，经急性毒性和长期毒性动物试验表明，柴葛口服液在临床剂量下使用是 安全无毒的。
, 百拇医药 参考文献
1 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社，2002，226-240.附录1861.
2 张均田.现代药理实验方法.北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1998，1810-1826.
3 周立国，刘泰然，郑春敏，等.便乃通过大白鼠的长期毒性试验研究.华西药学杂志，2001，16(3):184.
作者单位:400014重庆医科大学儿科学院临床药学研究室
(编辑 李木), http://www.100md.com