夫妇双方α地中海贫血的筛查及产前基因诊断
【摘要】 目的 对产检孕妇及其丈夫进行地中海贫血筛查，对夫妇双方为α地中海贫血基因携带者进行产前诊断，防止重症患儿的出生。方法 25例夫妇双方均为地贫基因携带者于妊娠中期抽取羊水或脐血行基因诊断。结果 25例中α地贫基因纯合子4例，占16%，α地贫基因杂合子8例，占32%，正常者13例，占52%，合并β地贫3例。未发生严重母胎并发症。4例纯合子在我院引产，为水肿胎儿，其脐血地贫基因型与产前诊断相符。结论 夫妇双方均为α地中海贫血者应积极进行产前诊断。红细胞比积法、血红蛋白电泳法简单经济，经腹羊水或脐血穿刺技术安全可靠，检测方法准确有效，值得推广。
关键词 α地中海贫血 产前诊断 纯合子 杂合子
【文献标识码】 B 【文章编号】 1609-6614(2004)10-0950-02
地中海贫血(简称地贫)是我国以广东、广西为主的南方地区最有影响的遗传性疾病之一。目前对重型地中海贫血尚无有效治疗手段，尽早发现和淘汰重症地贫儿是唯一方法 [1] ，因此产检筛查与高危夫妇产前基因诊断防止重型地贫儿的出生显得极为重要。自2001年起，我们对每一位来我院产检的孕妇夫妇进行地贫筛查，对25例夫妇双方均为α地贫杂合子的孕妇在妊娠中期抽取了羊水或脐血进行基因诊断，减少了重型地贫儿的出生，现报告如下。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1 一般资料 2001年1月～2002年12月在我院产检门诊筛查并确诊25例，夫妇双方均为α地贫杂合子，年龄22～33岁，孕周20 +3 ～34 +5 ，其中曾分娩1次或2次水肿胎儿者9例，分娩畸形儿1例。
1.2 方法
1.2.1 筛查方法 血细胞分析法测定红细胞平均体积(MCV)，若夫妇双方MCV<80f1，则测定血红蛋白电泳，若HbA 2 <2%和抗碱Hb≤2%即可判断为α地贫表型阳性;若HbA 2 ≥3.5%和抗碱Hb>2%，则可判定为β地贫表型阳性，再进一步行基因分析，以确诊α或β地贫。
1.2.2 产前诊断方法 我国南方α地中海贫血中最常见的一种基因型(占90%以上)的纯合子的表型为Hb Bart’s水肿胎。因其缺失了定位于人类16p上类α珠蛋白簇从Ψζ基因到α珠蛋白基因3’HVR约20Kb的大片段。因此我院采用聚合酶链反应(PCR)DNA扩增技术行α地贫基因分型诊断。按苯酚-氯仿法提取DNA，用聚合酶链反应(PCR)扩增后琼脂电泳分析。本法在该突变基因断裂的两侧设计2对引物，构成2个独立的PCR体系来鉴别样本的基因型。当样本DNA中有(-SEA/αα)突变时，扩增产生约568bp的DNA片段，若无此突变时则出现207bp的产物。试剂盒来源于第一军医大学。
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1.2.3 标本采集 全部对象在B超引导下经腹穿刺抽取羊水20ml或脐静脉血1.5～2.0ml送检。在我院分娩者常规抽取脐血复查是否与产前诊断相符。
2 结果
2.1 2年筛查并确诊夫妇双方为α地贫基因携带者25例，其中脐血9例，羊水16例，均未发生流产、早产、死胎或宫内感染等严重母胎并发症。基因诊断结果:α地贫基因纯合子4例(--/--)，占16%，α地贫基因杂合子8例(-SEA/αα)，占32%，正常者13例(αα/αα)，占52%，4例纯合子在我院引产，为水肿胎儿，其脐血地贫基因型与产前诊断相符。
3 讨论
α地中海贫血是珠蛋白基因缺失或功能缺陷导致链合成受抑制。根据肽链缺失不同可分4型，其中α地贫重型胎儿(--/--)多于妊娠28～34周早产、死产或生后不久死亡，是围产儿死亡的重要原因之一。夫妇双方均为α 地中海贫血基因杂合子者其每次妊娠后代中约有25%的机会出生重型地贫儿(地贫基因纯合子)，因此产前筛查及基因诊断非常重要，确诊夫妇双方为地贫基因携带者均应行产前诊断，及早发现重型地贫儿。
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地中海贫血患者的MCV均显著降低，可作为常用的、首选筛查指标。如果夫妇双方平均红细胞体积(MCV)<80f1，则疑为地贫，进一步行蛋白电泳分析，若HbA 2 <2%和抗碱Hb≤2%，则初步诊断为α地贫携带者，建议行宫内诊断，了解基因类型，以淘汰重症地贫儿。本文通过上述方法筛查出25例夫妇双方均为α地贫携带者，进一步行羊水或脐血的产前基因分型，确诊4例为α地贫基因纯合子(水肿胎儿)，8例地贫基因α地贫基因杂合子，13例α地贫基因正常，说明上述方法是简单经济和有效的。
产前诊断标本采集的方法常采用早孕期吸取绒毛、中孕期抽取羊水及中孕或晚孕期抽取脐血进行诊断。早孕期吸取绒毛技术难度高，国外报道有致胎儿肢体畸形的风险等，不宜推广。羊膜腔穿刺取羊水比较简单、快捷、安全，若有母血污染，经离心后沉淀也易查出结果[2] ，但细胞培养所需时间较长，成功率受孕龄限制。脐血穿刺准确性高，诊断范围广，但偶而会混有母血影响检测结果 [3] 。随着介入超声的应用，羊水及脐血穿刺技术的安全性得到了保证和提高，脐带穿刺技术也日益成熟。2年多来我院在B超引导下共行羊膜腔及脐血穿刺201例，脐带穿刺的成功率93%，无死胎、流产、早产或宫内感染等并发症 [3]。因此羊水或脐血穿刺技术是比较安全的，为产前诊断标本采集提供了良好的途径。
, 百拇医药
聚合酶链反应(PCR)DNA扩增技术用于α地贫基因分型诊断时需同时分析胎儿及其双亲的样本，为确保产前基因诊断结果的可信度，必须有2次重复结果，对一种试剂盒不能确定的类型必须进一步分析确诊。分娩后脐血检测结果与产前诊断一致也证明了该方法是可行的。
α地贫的预后取决于它的基因类型，对高危夫妇的胎儿进行产前诊断，防止重型地贫儿的出生，可减轻家庭和社会负担，对提高人口素质有重要意义。
参考文献
1 杜传书.地中海贫血研究的现状与未来.中华医学遗传杂志，1996，13，257-258.
2 何冰.妊娠合并地中海贫血的筛查和产前诊断.实用妇产科杂志，2003，19(3):136-137.
3 郭晓玲，卢海英，钟进，等.经腹脐静脉穿刺术在产前诊断中的应用.中国实用医学杂志，2003，5(14):34-45.
作者单位:528000广东省佛山市妇儿医院
(收稿日期:2004-02-22)
(编辑 罗彬), 百拇医药
关键词 α地中海贫血 产前诊断 纯合子 杂合子
【文献标识码】 B 【文章编号】 1609-6614(2004)10-0950-02
地中海贫血(简称地贫)是我国以广东、广西为主的南方地区最有影响的遗传性疾病之一。目前对重型地中海贫血尚无有效治疗手段，尽早发现和淘汰重症地贫儿是唯一方法 [1] ，因此产检筛查与高危夫妇产前基因诊断防止重型地贫儿的出生显得极为重要。自2001年起，我们对每一位来我院产检的孕妇夫妇进行地贫筛查，对25例夫妇双方均为α地贫杂合子的孕妇在妊娠中期抽取了羊水或脐血进行基因诊断，减少了重型地贫儿的出生，现报告如下。
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1 资料与方法
1.1 一般资料 2001年1月～2002年12月在我院产检门诊筛查并确诊25例，夫妇双方均为α地贫杂合子，年龄22～33岁，孕周20 +3 ～34 +5 ，其中曾分娩1次或2次水肿胎儿者9例，分娩畸形儿1例。
1.2 方法
1.2.1 筛查方法 血细胞分析法测定红细胞平均体积(MCV)，若夫妇双方MCV<80f1，则测定血红蛋白电泳，若HbA 2 <2%和抗碱Hb≤2%即可判断为α地贫表型阳性;若HbA 2 ≥3.5%和抗碱Hb>2%，则可判定为β地贫表型阳性，再进一步行基因分析，以确诊α或β地贫。
1.2.2 产前诊断方法 我国南方α地中海贫血中最常见的一种基因型(占90%以上)的纯合子的表型为Hb Bart’s水肿胎。因其缺失了定位于人类16p上类α珠蛋白簇从Ψζ基因到α珠蛋白基因3’HVR约20Kb的大片段。因此我院采用聚合酶链反应(PCR)DNA扩增技术行α地贫基因分型诊断。按苯酚-氯仿法提取DNA，用聚合酶链反应(PCR)扩增后琼脂电泳分析。本法在该突变基因断裂的两侧设计2对引物，构成2个独立的PCR体系来鉴别样本的基因型。当样本DNA中有(-SEA/αα)突变时，扩增产生约568bp的DNA片段，若无此突变时则出现207bp的产物。试剂盒来源于第一军医大学。
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1.2.3 标本采集 全部对象在B超引导下经腹穿刺抽取羊水20ml或脐静脉血1.5～2.0ml送检。在我院分娩者常规抽取脐血复查是否与产前诊断相符。
2 结果
2.1 2年筛查并确诊夫妇双方为α地贫基因携带者25例，其中脐血9例，羊水16例，均未发生流产、早产、死胎或宫内感染等严重母胎并发症。基因诊断结果:α地贫基因纯合子4例(--/--)，占16%，α地贫基因杂合子8例(-SEA/αα)，占32%，正常者13例(αα/αα)，占52%，4例纯合子在我院引产，为水肿胎儿，其脐血地贫基因型与产前诊断相符。
3 讨论
α地中海贫血是珠蛋白基因缺失或功能缺陷导致链合成受抑制。根据肽链缺失不同可分4型，其中α地贫重型胎儿(--/--)多于妊娠28～34周早产、死产或生后不久死亡，是围产儿死亡的重要原因之一。夫妇双方均为α 地中海贫血基因杂合子者其每次妊娠后代中约有25%的机会出生重型地贫儿(地贫基因纯合子)，因此产前筛查及基因诊断非常重要，确诊夫妇双方为地贫基因携带者均应行产前诊断，及早发现重型地贫儿。
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地中海贫血患者的MCV均显著降低，可作为常用的、首选筛查指标。如果夫妇双方平均红细胞体积(MCV)<80f1，则疑为地贫，进一步行蛋白电泳分析，若HbA 2 <2%和抗碱Hb≤2%，则初步诊断为α地贫携带者，建议行宫内诊断，了解基因类型，以淘汰重症地贫儿。本文通过上述方法筛查出25例夫妇双方均为α地贫携带者，进一步行羊水或脐血的产前基因分型，确诊4例为α地贫基因纯合子(水肿胎儿)，8例地贫基因α地贫基因杂合子，13例α地贫基因正常，说明上述方法是简单经济和有效的。
产前诊断标本采集的方法常采用早孕期吸取绒毛、中孕期抽取羊水及中孕或晚孕期抽取脐血进行诊断。早孕期吸取绒毛技术难度高，国外报道有致胎儿肢体畸形的风险等，不宜推广。羊膜腔穿刺取羊水比较简单、快捷、安全，若有母血污染，经离心后沉淀也易查出结果[2] ，但细胞培养所需时间较长，成功率受孕龄限制。脐血穿刺准确性高，诊断范围广，但偶而会混有母血影响检测结果 [3] 。随着介入超声的应用，羊水及脐血穿刺技术的安全性得到了保证和提高，脐带穿刺技术也日益成熟。2年多来我院在B超引导下共行羊膜腔及脐血穿刺201例，脐带穿刺的成功率93%，无死胎、流产、早产或宫内感染等并发症 [3]。因此羊水或脐血穿刺技术是比较安全的，为产前诊断标本采集提供了良好的途径。
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聚合酶链反应(PCR)DNA扩增技术用于α地贫基因分型诊断时需同时分析胎儿及其双亲的样本，为确保产前基因诊断结果的可信度，必须有2次重复结果，对一种试剂盒不能确定的类型必须进一步分析确诊。分娩后脐血检测结果与产前诊断一致也证明了该方法是可行的。
α地贫的预后取决于它的基因类型，对高危夫妇的胎儿进行产前诊断，防止重型地贫儿的出生，可减轻家庭和社会负担，对提高人口素质有重要意义。
参考文献
1 杜传书.地中海贫血研究的现状与未来.中华医学遗传杂志，1996，13，257-258.
2 何冰.妊娠合并地中海贫血的筛查和产前诊断.实用妇产科杂志，2003，19(3):136-137.
3 郭晓玲，卢海英，钟进，等.经腹脐静脉穿刺术在产前诊断中的应用.中国实用医学杂志，2003，5(14):34-45.
作者单位:528000广东省佛山市妇儿医院
(收稿日期:2004-02-22)
(编辑 罗彬), 百拇医药