斑点杂交法检测HBV-DNA与乙肝病毒标志物的比较分析
【摘要】 目的 探讨应用地高辛标记斑点杂交方法检测HBV-DNA与乙肝患者血清标志物检测结果的相关性。方法 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb的测定采用ELISA法，HBV-DNA采用地高辛标记斑点杂交法。结果 在不同模式的HBV血清标志物患者中均有一定比例的HBV-DNA阳性者，且e抗原阳性的乙肝患者HBV-DNA阳性率为74.2%，明显高于其它模式的HBV血清标志物患者。结论 e抗原阳性与HBV-DNA有正相关性，HBV-DNA的检测对于乙肝的诊断、病情转归的判断以及药物疗效的评估意义重大。
关键词 HBV-DNA 斑点杂交 乙肝病毒标志物
【文献标识码】 B 【文章编号】 1609-6614(2004)09-0832-02
乙型肝炎是我国最常见的传染病之一，乙肝病毒感染时，外周血中乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)是病毒复制活动最直接和可靠的标志，也是乙型肝炎传染性的指标。以往常用PCR方法检测HBV-DNA，由于其操作繁杂、精细度强，容易产生一定的误差。因此，我们采用非常直观的斑点杂交法对597例乙肝患者进行了HBV-DNA检测，并与HBV血清标志物不同的模式进行了对比研究，现报道如下。
, 百拇医药
1 资料和方法
1.1 一般资料 住院及肝病门诊病人597例，其中男399例，女198例，平均年龄39.7岁。所有病例诊断参考1995年5月北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的标准。
1.2 实验方法 乙肝患者血清HBsAg、HBsAb、HBeAg和HBcAb的测定采用ELISA法，试剂由北京科卫试剂研究所提供，用MRX酶标仪判断结果。HBV-DNA检测采用德国宝灵曼公司最新推出的地高辛标记斑点杂交法。HBV-DNA探针系列由上海医科大学科宏生物工程公司提供。
2 结果
在597例乙肝患者中，HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性者271例，其中HBV-DNA阳性者201例(74.2%);HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性者198例，其HBV-DNA阳性者61例(30.8%);HBsAg、HBcAb阳性者103例，其中HBV-DNA阳性者25例(24.2%);HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性者25例，其中HBV-DNA阳性者2例(8.0%)。
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3 讨论
通常认为，乙肝患者血清HBsAg、HBeAg和HBcAb阳性患者肝细胞中存在HBV-DNA复制，并具有高度的传染性。本研究结果显示:血清HBeAg阳性的乙肝患者血清HBV-DNA阳性率高达74.2%，明显高于其他模式的患者，且差异具有显著性，说明HBeAg阳性与HBV-DNA确定有正相关性，与文献报道是一致的 [1，2] 。结果发现，在HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性及HBsAg、HBˉcAb阳性患者中，血清HBV-DNA阳性率分别为30.8%和24.2%。由此可见，血清HBeAg阴性的慢性乙肝患者中仍可能有HBV-DNA的复制，且具有传染性，需引起高度重视。对HBeAb阳性、转而HBV-DNA持续阳性者，一般认为有两种可能:(1)病毒复制减弱病情进入恢复期;(2)病毒基因前C区发生突变，产生HBeAg缺陷变异株，这种病人常表现为ALT持续升高，肝功能损害较重，HBV-DNA持续阳性，而HBeAg阴性和(或)HBeAb阳性。在HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性者中，HBV-DNA阳性率为8.0%，这是由于患者感染了HBV变异株或HBV基因突变，此时病毒可逃避宿主体内抗HBs的免疫清除，而不能产生保护作用;也有部分患者可能是处于病毒清除阶段，HBsAb已出现，但HBsAg尚未完全清除 [3～5] 。
, 百拇医药
综上所述，HBV-DNA阳性表明HBV复制并具有一定传染性;HBeAg阳性是HBV复制活跃的指标。HBeAb阳性者若HBV-DNA持续阳性，肝功能损害加重，应考虑HBV突变株的存在。总之，用地高辛标记斑点杂交法检测HBV-DNA对于乙肝的早期诊断和治疗、病情转归的判别以及药物疗效的考核具有十分重要的意义。
参考文献
1 尹华发，卢建溪，高志良.不同血清学标志乙型肝炎病毒感染者 病毒水平分析.中华传染病杂志，2000，18:264-266.
2 刘丽华，董克瑞，邓爱忠，等.乙型肝炎病毒血清标志物与HBV-DNA的比较分析.中华医学杂志，1999，79:193.
3 姚桢.分子乙型肝炎病毒相关病学，北京:中国医药科技出版社，1998，25.
4 张永新，杜绍财，陈苹，等.肝炎恢复期乙型肝炎表面抗体阳性者血清中的乙型肝炎病毒DNA.中华内科杂志，1992，31:629-632.
5 尹华发.乙型肝炎病毒S基因变异的研究现状.国外医学·内科学分册，1999，26:284-286.
作者单位:300170天津市第三中心医院
(收稿日期:2004-02-02)
(编辑依 依), 百拇医药
关键词 HBV-DNA 斑点杂交 乙肝病毒标志物
【文献标识码】 B 【文章编号】 1609-6614(2004)09-0832-02
乙型肝炎是我国最常见的传染病之一，乙肝病毒感染时，外周血中乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)是病毒复制活动最直接和可靠的标志，也是乙型肝炎传染性的指标。以往常用PCR方法检测HBV-DNA，由于其操作繁杂、精细度强，容易产生一定的误差。因此，我们采用非常直观的斑点杂交法对597例乙肝患者进行了HBV-DNA检测，并与HBV血清标志物不同的模式进行了对比研究，现报道如下。
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1 资料和方法
1.1 一般资料 住院及肝病门诊病人597例，其中男399例，女198例，平均年龄39.7岁。所有病例诊断参考1995年5月北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的标准。
1.2 实验方法 乙肝患者血清HBsAg、HBsAb、HBeAg和HBcAb的测定采用ELISA法，试剂由北京科卫试剂研究所提供，用MRX酶标仪判断结果。HBV-DNA检测采用德国宝灵曼公司最新推出的地高辛标记斑点杂交法。HBV-DNA探针系列由上海医科大学科宏生物工程公司提供。
2 结果
在597例乙肝患者中，HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性者271例，其中HBV-DNA阳性者201例(74.2%);HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性者198例，其HBV-DNA阳性者61例(30.8%);HBsAg、HBcAb阳性者103例，其中HBV-DNA阳性者25例(24.2%);HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性者25例，其中HBV-DNA阳性者2例(8.0%)。
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3 讨论
通常认为，乙肝患者血清HBsAg、HBeAg和HBcAb阳性患者肝细胞中存在HBV-DNA复制，并具有高度的传染性。本研究结果显示:血清HBeAg阳性的乙肝患者血清HBV-DNA阳性率高达74.2%，明显高于其他模式的患者，且差异具有显著性，说明HBeAg阳性与HBV-DNA确定有正相关性，与文献报道是一致的 [1，2] 。结果发现，在HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性及HBsAg、HBˉcAb阳性患者中，血清HBV-DNA阳性率分别为30.8%和24.2%。由此可见，血清HBeAg阴性的慢性乙肝患者中仍可能有HBV-DNA的复制，且具有传染性，需引起高度重视。对HBeAb阳性、转而HBV-DNA持续阳性者，一般认为有两种可能:(1)病毒复制减弱病情进入恢复期;(2)病毒基因前C区发生突变，产生HBeAg缺陷变异株，这种病人常表现为ALT持续升高，肝功能损害较重，HBV-DNA持续阳性，而HBeAg阴性和(或)HBeAb阳性。在HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性者中，HBV-DNA阳性率为8.0%，这是由于患者感染了HBV变异株或HBV基因突变，此时病毒可逃避宿主体内抗HBs的免疫清除，而不能产生保护作用;也有部分患者可能是处于病毒清除阶段，HBsAb已出现，但HBsAg尚未完全清除 [3～5] 。
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综上所述，HBV-DNA阳性表明HBV复制并具有一定传染性;HBeAg阳性是HBV复制活跃的指标。HBeAb阳性者若HBV-DNA持续阳性，肝功能损害加重，应考虑HBV突变株的存在。总之，用地高辛标记斑点杂交法检测HBV-DNA对于乙肝的早期诊断和治疗、病情转归的判别以及药物疗效的考核具有十分重要的意义。
参考文献
1 尹华发，卢建溪，高志良.不同血清学标志乙型肝炎病毒感染者 病毒水平分析.中华传染病杂志，2000，18:264-266.
2 刘丽华，董克瑞，邓爱忠，等.乙型肝炎病毒血清标志物与HBV-DNA的比较分析.中华医学杂志，1999，79:193.
3 姚桢.分子乙型肝炎病毒相关病学，北京:中国医药科技出版社，1998，25.
4 张永新，杜绍财，陈苹，等.肝炎恢复期乙型肝炎表面抗体阳性者血清中的乙型肝炎病毒DNA.中华内科杂志，1992，31:629-632.
5 尹华发.乙型肝炎病毒S基因变异的研究现状.国外医学·内科学分册，1999，26:284-286.
作者单位:300170天津市第三中心医院
(收稿日期:2004-02-02)
(编辑依 依), 百拇医药