庆大霉素合剂中庆大霉素的含量测定
【摘要】 目的 测定庆大霉素合剂中硫酸庆大霉素的含量。方法 改良紫外法，以乙酰丙酮及甲醛为衍生化试剂，缓冲液为醋酸-醋酸钠(pH3.6)，在420nm处测硫酸庆大霉素衍生物的吸收度，空白对照以水代替样品同法平行操作。结果 硫酸庆大霉素在24.26～80.87μg/ml范围内，吸收度与其浓度呈良好的线性关系，平均回收率为110.22%，RSD=1.94%。结论方法简便、快速、准确，与微生物法比较差异无显著性，可作为医院制剂室的快速检验方法。
关键词 硫酸庆大霉素 庆大合剂 衍生化试剂 醋酸-醋酸钠缓液(pH3.6) 紫外法
【文献标识码】 B 【文章编号】 1726-6424(2004)06-0551-02
庆大霉素合剂为我院自制的一种抗胃肠道疾病、抗菌、消炎、用于消化道细菌感染性药物。庆大霉素合剂的含量测定采用抗生素微生物检定法 [1] ，该法虽准确可靠，但操作繁琐，测定周期长，不适应医院制剂快速分析的要求。曾有旋光法 [2] 、碱性酒石酸铜比色法 [3～5] 、紫外分光光度法 [6] 测定庆大霉素滴眼剂及注射液的报道，但因庆大霉素合剂中附加剂单糖浆、糖精钠的干平行操作。扰，上述方法均不适用。本文介绍一种测定硫酸庆大霉素制剂含量的改良衍生化紫外法，其原理是用Hantzsh反应使庆大霉素形成二氢吡啶衍生物，该化合物的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.6)在紫外420nm处有肩峰吸收，而附加剂在此波长处几无吸收。实验表明，本法操作简便、快速，与微生物法结果基本一致，与一阶导数光谱法 [7] 比较所需仪器简单，有一定的推广应用价值。
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1 仪器和试药
紫外分光光度计(岛津UV-260型);紫外可见分光光度计7530-G(上海分析仪器厂产品)。硫酸庆大霉素(河南省焦作市第一制药厂产品);乙酰丙酮、甲醛、冷醋酸、醋酸钠均为分析纯;严硫酸氢钠、糖精钠、内服香精为药用规格;单糖浆、5%尼泊金醇、庆大合剂为医院普通制剂室配制。
2 方法和结果
2.1 试剂的配制
2.1.1 庆大霉素贮备液的配制 精密称取硫酸庆大霉素(613U/mg)1.6324g置100ml量瓶中，加适量蒸馏水，振摇使溶，加水至刻度，摇匀备用。
2.1.2 附加剂贮备液的配制 精密称取亚硫酸氢钠0.1g，糖精钠0.05g置100ml量瓶中，加适量蒸馏水，振摇使溶，加水至刻度，摇匀备用。
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2.1.3 醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.6)的配制 取醋酸钠5.1g加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml备用。
2.1.4 衍生化试剂的配制 取乙酰丙酮0.8ml，36%的甲醛液1.7ml，加配制好的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.6)至30ml摇匀备用(临用前配制)。
2.1.5 供试液的配制 精密量取庆大霉素贮备液2.0ml置100ml量瓶，加水至刻度，摇匀。精吸此液5.0ml置50ml量瓶，加水至刻度，摇匀。精密量取上述溶液3.0ml置20ml具塞试管中，精密加入衍生化试剂3.0ml，轻轻振摇，混均，在沸水浴内加热25min，冷至室温后待测。
2.2 紫外吸盲光谱的测绘 分别按上法配制庆大霉毒、庆大合剂和附加剂3种试液，在300～500nm波长范围内扫描，绘制紫外吸收图谱(图1)，空白对照以水代替样品同法平行操作。 图1 紫外吸收图谱
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由图1可见，附加剂供试液在360～500nm范围内吸收值与基线几乎完全重合，而庆大霉素供试液和庆大合剂试液在此波长范围内的吸收曲线也几乎完全重叠，且在420nm处附近有一肩峰，故笔者选择420nm为庆大霉毒衍生物的测定波长。
2.3 线性方程的建立 精密量取庆大霉素贮备液2.0ml置100ml量瓶，加水至刻度，摇匀。精密取此液3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、10.0ml分别置25ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取上标准液各3.0ml分别置20ml干燥、洁净的 具塞试管中，均加衍生试剂3.0ml，按供试液的配制方法操作，在420nm处测量吸收度，在24.26～80.87μg/ml范围内，求得吸收方程A=0.006989C-0.003170，r=0.9990。
2.4 回收率试验 按处方精密配制7批模拟庆大合剂，按供试液的配制方法配制试品，在420nm波长处测其吸光度A，代入线性方程，计算平均回收率为100.22%，RSD为1.94%，n=7。
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2.5 样品测定 按线性试验的方法对5个批次的庆大合剂操作，测其含量并与微生物法的测定结果比较，结果见表1。
表1 本法与微生物法的测定结果之比较
2.6 稳定性试验 按回收率试验方法配备供试品，分别是0，1，2，3，4，5h于420nm处测定其吸收度A值，A值变化为0.5%(于5h)，含量测定的相对误差为标示量的1.41%。
3 讨论
3.1 本文的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.6)不能用铵盐缓冲液(pH3.5)替代，因其缓冲液中含有氨，也能与衍生化试剂乙酰丙酮及甲醛发生缩合反应，使试剂颜色加深，干扰庆大霉素的含量测定。
3.2 同一批号的庆大合剂用本法和微生物法进行含量测定，两法的结果比较差异无显著性(P>0.01)，本法尤其适用于医院制剂室的快速检验。
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3.3 稳定性试验结果提示庆大霉素的衍生物一旦形成，必须在5h内进行测定否则会影响结果的准确性。
3.4 衍生化试剂一定要新鲜配制，不然会使测定结果大为偏低。
参考文献
1 章国均，邱车峰，边支珍.上海市医院制剂手册，上海:上海科学技术出版社，1995，239-240.
2 刘怡芬，张志良，吴瑞华.用旋光法测定庆大霉素注射液的含量.中国医院药学杂志，1992，27(7):420.
3 何树华.碱性酒石酸铜比色法快速测定硫酸庆大霉素注射液的含量.中国药学杂志，1989，9(10):463.
4 沈建中.用比色法测定庆大霉素滴眼剂的含量.中国医院药学杂志，1993，13(5):214.
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5 许亚.分光光度法快速测定硫酸庆大霉素注射液.江苏药学与临床研究，1996，4(3):28.
6 刘智，钱进，徐卫龙.紫外分外光光度法测定庆大霉素的含量.中国药学杂志，27(9):542.
7 何笑蓉，赵研，傅得兴.一阶导数光谱法测定硫酸庆霉素制剂的含量.中国医院药学杂志，1995，15(11):505.
作者单位:226001南通医学院附属医院
(收稿日期:2004-03-19)
(编辑罗 彬), http://www.100md.com
关键词 硫酸庆大霉素 庆大合剂 衍生化试剂 醋酸-醋酸钠缓液(pH3.6) 紫外法
【文献标识码】 B 【文章编号】 1726-6424(2004)06-0551-02
庆大霉素合剂为我院自制的一种抗胃肠道疾病、抗菌、消炎、用于消化道细菌感染性药物。庆大霉素合剂的含量测定采用抗生素微生物检定法 [1] ，该法虽准确可靠，但操作繁琐，测定周期长，不适应医院制剂快速分析的要求。曾有旋光法 [2] 、碱性酒石酸铜比色法 [3～5] 、紫外分光光度法 [6] 测定庆大霉素滴眼剂及注射液的报道，但因庆大霉素合剂中附加剂单糖浆、糖精钠的干平行操作。扰，上述方法均不适用。本文介绍一种测定硫酸庆大霉素制剂含量的改良衍生化紫外法，其原理是用Hantzsh反应使庆大霉素形成二氢吡啶衍生物，该化合物的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.6)在紫外420nm处有肩峰吸收，而附加剂在此波长处几无吸收。实验表明，本法操作简便、快速，与微生物法结果基本一致，与一阶导数光谱法 [7] 比较所需仪器简单，有一定的推广应用价值。
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1 仪器和试药
紫外分光光度计(岛津UV-260型);紫外可见分光光度计7530-G(上海分析仪器厂产品)。硫酸庆大霉素(河南省焦作市第一制药厂产品);乙酰丙酮、甲醛、冷醋酸、醋酸钠均为分析纯;严硫酸氢钠、糖精钠、内服香精为药用规格;单糖浆、5%尼泊金醇、庆大合剂为医院普通制剂室配制。
2 方法和结果
2.1 试剂的配制
2.1.1 庆大霉素贮备液的配制 精密称取硫酸庆大霉素(613U/mg)1.6324g置100ml量瓶中，加适量蒸馏水，振摇使溶，加水至刻度，摇匀备用。
2.1.2 附加剂贮备液的配制 精密称取亚硫酸氢钠0.1g，糖精钠0.05g置100ml量瓶中，加适量蒸馏水，振摇使溶，加水至刻度，摇匀备用。
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2.1.3 醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.6)的配制 取醋酸钠5.1g加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml备用。
2.1.4 衍生化试剂的配制 取乙酰丙酮0.8ml，36%的甲醛液1.7ml，加配制好的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.6)至30ml摇匀备用(临用前配制)。
2.1.5 供试液的配制 精密量取庆大霉素贮备液2.0ml置100ml量瓶，加水至刻度，摇匀。精吸此液5.0ml置50ml量瓶，加水至刻度，摇匀。精密量取上述溶液3.0ml置20ml具塞试管中，精密加入衍生化试剂3.0ml，轻轻振摇，混均，在沸水浴内加热25min，冷至室温后待测。
2.2 紫外吸盲光谱的测绘 分别按上法配制庆大霉毒、庆大合剂和附加剂3种试液，在300～500nm波长范围内扫描，绘制紫外吸收图谱(图1)，空白对照以水代替样品同法平行操作。 图1 紫外吸收图谱
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由图1可见，附加剂供试液在360～500nm范围内吸收值与基线几乎完全重合，而庆大霉素供试液和庆大合剂试液在此波长范围内的吸收曲线也几乎完全重叠，且在420nm处附近有一肩峰，故笔者选择420nm为庆大霉毒衍生物的测定波长。
2.3 线性方程的建立 精密量取庆大霉素贮备液2.0ml置100ml量瓶，加水至刻度，摇匀。精密取此液3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、10.0ml分别置25ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取上标准液各3.0ml分别置20ml干燥、洁净的 具塞试管中，均加衍生试剂3.0ml，按供试液的配制方法操作，在420nm处测量吸收度，在24.26～80.87μg/ml范围内，求得吸收方程A=0.006989C-0.003170，r=0.9990。
2.4 回收率试验 按处方精密配制7批模拟庆大合剂，按供试液的配制方法配制试品，在420nm波长处测其吸光度A，代入线性方程，计算平均回收率为100.22%，RSD为1.94%，n=7。
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2.5 样品测定 按线性试验的方法对5个批次的庆大合剂操作，测其含量并与微生物法的测定结果比较，结果见表1。
表1 本法与微生物法的测定结果之比较
2.6 稳定性试验 按回收率试验方法配备供试品，分别是0，1，2，3，4，5h于420nm处测定其吸收度A值，A值变化为0.5%(于5h)，含量测定的相对误差为标示量的1.41%。
3 讨论
3.1 本文的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.6)不能用铵盐缓冲液(pH3.5)替代，因其缓冲液中含有氨，也能与衍生化试剂乙酰丙酮及甲醛发生缩合反应，使试剂颜色加深，干扰庆大霉素的含量测定。
3.2 同一批号的庆大合剂用本法和微生物法进行含量测定，两法的结果比较差异无显著性(P>0.01)，本法尤其适用于医院制剂室的快速检验。
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3.3 稳定性试验结果提示庆大霉素的衍生物一旦形成，必须在5h内进行测定否则会影响结果的准确性。
3.4 衍生化试剂一定要新鲜配制，不然会使测定结果大为偏低。
参考文献
1 章国均，邱车峰，边支珍.上海市医院制剂手册，上海:上海科学技术出版社，1995，239-240.
2 刘怡芬，张志良，吴瑞华.用旋光法测定庆大霉素注射液的含量.中国医院药学杂志，1992，27(7):420.
3 何树华.碱性酒石酸铜比色法快速测定硫酸庆大霉素注射液的含量.中国药学杂志，1989，9(10):463.
4 沈建中.用比色法测定庆大霉素滴眼剂的含量.中国医院药学杂志，1993，13(5):214.
, http://www.100md.com
5 许亚.分光光度法快速测定硫酸庆大霉素注射液.江苏药学与临床研究，1996，4(3):28.
6 刘智，钱进，徐卫龙.紫外分外光光度法测定庆大霉素的含量.中国药学杂志，27(9):542.
7 何笑蓉，赵研，傅得兴.一阶导数光谱法测定硫酸庆霉素制剂的含量.中国医院药学杂志，1995，15(11):505.
作者单位:226001南通医学院附属医院
(收稿日期:2004-03-19)
(编辑罗 彬), http://www.100md.com