广防己肝肾毒性的实验研究
【摘要】 目的 研究常用中药广防己的急、慢性毒性，为临床安全使用提供依据，并探讨炮制和复方配伍减毒的可能性。方法 采用经典和常规的急、慢性毒性实验方法，观察广防己70%乙醇提取物对肝、肾功能的影响。以不同剂量和处理的广防己70%乙醇提取液，连续灌胃12周，定期处死一定数量的动物，取其肝脏、肾脏做病理切片分析，同时采集动物的血液，检测与肝、肾功能相关的生化指标。结果 广防己LD 50 的95%平均可信限为258.8±20.33g/kg。生化指标与病理切片结果基本一致，未见广防己对肝的实质性损伤;血尿素氮在灌药1周后，黄连炮制组略有下降，与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05)，灌药2周后复方组也略有下降，与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05);血肌酐(Cr)未见升高;病理切片见高、中剂量组有间质纤维化、肾小管上皮细胞坏死、肾小管破损、肾小球硬化等毒性反应，且停药2周仍未见修复，但低剂量组、炮制组、复方组在停药2周后的病理检查标本中均未见肾损害的现象。结论 在中医辨证论治理论指引下的使用和《中国药典》规定的广防己剂量是安全的，依据是:急性毒性提示广防己安全范围较宽;3个月的长期毒性观察未见动物体重下降，也无死亡;低剂量组、黄连炮制和防己黄芪汤配伍显示一定减毒作用。
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关键词 广防己 马兜铃酸 肝毒性 肾毒性
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-6424(2004)06-0486-05
Experimental study of the hepatotoxicity and nephrotoxicity
of Aristolochia Fangchi
Peng Weiwen，Mei Quanxi，Gao Yuqiao，et al.
Zhongshan Hospital，Guangzhou University of TCM，Zhongshan528400.
【Abstract】 Objective To study the acute toxicity and chronic toxicity of Aristolochia Fangchi，and make an approach to see if processing and compatibilitycan attenuation.Methods Classic conventional toxicity tests were used.Normal SDrats were divided into seven groups and given different doses and processed extract of Aristolochia Fangchi12weeks.Some rats were sacrificed regularly.Kidneys and livers were pathoanalyzed.Blood samples were made biochemical tests.Renal andhepatic pathology and function were observed.Results The95%average confiˉdencelevel of LD 50 was258.8±20.33g/kg.That the results of biochemical indicators and pathoanalysis were at equal showed no parenchymatous injury of liver.All groups’blood urea nitrogen(BUN)and serum creactinine(Scr)reˉmained in the normal range.It was showed interstitial fibrosis，renal tubular epithelial cell necrosis，nephric tubule，glomerular sclerosis in the pathological sections of the high dose group and mid-dose group，even no recovery after withdrawal2weeks.Therewere no renal injury showed in the pathological sections of the low dose group，compatibility group and processed groups after withdrawal2weeks.Conclusion UsingAristolochia Fangchi under the theory of traˉditional Chinese medicine and Chinese pharmacopeia is safe.
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Key words Aristolochia Fangchi aristolochia acid hepatotoxicity nephrotoxicity
比利时1990～1992年有1741例服用同一家诊所开出的减肥药“苗条丸”(由芬氟拉明、安菲拉酮、波希鼠李皮、颠茄浸膏、乙酰唑胺、防己、厚朴组成)长达数月甚至3年，有几十例的服用者发生严重程度不同的肾损害问题 [1] ，根据马兜铃酸(Aristolochic Acid，以下简称AA)有致癌和致肾间质纤维化等毒性的报道，国外就把含有AA的广防己、关木通定为肾毒元凶，禁止进口 [2，3] ，此事在国内引起共鸣。实际上，国外对此仍有争论，焦点有三:“苗条丸”毒副作用的发生率不到10%，怀疑有过敏体质问题;使用不当(非广防己的适应证、疗程过长);“苗条丸”中其它药物也有致肾毒的可能。更有学者注意到在中国训练有素的中医使用这类中药未见发生肾衰之类极易觉察的毒性反应 [4] 。总之，广 防己与马兜铃肾病(Aristolochic Acid Nephropathy，简称AAN)的关系仍待证明 [5] 。另一方面，AA在国外曾经作为抗癌药和免疫增强剂达25年之久，任何药物都是有效也有毒副作用，关键是善于取利避害。总的来说，AAN的研究较多较深，而广防己等含AA中药的急慢性毒性研究较少，本研究的特点在于选用道地的广防己药材，测定其中AA含量，并考虑到炮制和配伍因素，以揭示中医药学术的奥秘和减低毒性的可能性，目的是为正确认识和评价其安全性提供科学基础。
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1 材料与方法
1.1 实验动物 SD大鼠，雌雄各半，体重190～210g/只(广东省医学实验动物中心提供)。在本动物室饲养，实验期间自由饮水、摄食，室内温度控制在20～26℃左右、通风及湿度良好。
1.2 药材来源及供试验药液制备 药材购于广东省肇庆市高要市禾城镇(广东肇庆药检所陈洁秀提供)，经笔者鉴定为马兜铃科植物Aristolochia fangji Wu的干燥根。
药品粉碎过20目，按以下方法制备供试验药液:广防己:用70%乙醇回流提取2次，每次1h，浓缩成流浸膏，冰箱贮存;临用前，用蒸馏水分别配成相当于广防己生药1g/ml、0.5g/ml、0.1g/ml作为高、中、低剂量。
广防己(石灰水制):用饱和石灰水温浸广防己24h，再用70%乙醇回流提取2次，每次1h，浓缩成流浸膏，冰箱贮存;临用前，用蒸馏水配成相当于广防己生药0.5g/ml。
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广防己(黄连制):用黄连醇提液温浸广防己24h，再用70%乙醇回流提取2次，每次1h，浓缩成流浸膏，冰箱贮存;临用前，用蒸馏水配成相当于广防己生药0.5g/ml。
复方 [6] (防己黄芪汤加姜、枣):广防己10g，黄芪10g，白术6g，甘草3g，生姜6g，大枣约10g)，用70%乙醇回流提取2次，每次1h，浓缩成流浸膏，冰箱贮存;临用前，用蒸馏水配成相当于广防己生药0.1g/ml。
1.3 仪器 BX-40型显微镜(日本Olympus)、7170A型全自动生化分析仪(日本日立)、T500型电子天平(常熟市双杰测试仪器厂)、玻璃毛细管、灌胃器。
1.4 实验方法
1.4.1 LD 50 NIH小鼠，雌雄各半，体重18～22g，由广州中医药大学实验动物中心提供。以广防己醇浸膏配制成适当浓度灌胃，按照常法进行急性毒性实验，以改进寇氏法计算 LD 50 及LD 50 的95%平均可信限。
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1.4.2 慢性毒性 实验动物SD大鼠，雌雄各半，体重190～210g/只，广东省医学实验动物中心提供。大鼠随机分为7组(每组20只):AH(10g生药/kg·d)、AM(5g生药/kg·d)、AL(1g生药/kg·d)、AC(5g生药/kg·d)、AP(5g生药/kg·d)、AF(4.5g生药/kg·d)为给药组，连续灌胃12周。正常对照组(正常对照组):按1ml/(100g·d)给予蒸馏水。
以上七组均在0、1、2、4、8、12周，大鼠眼眶后静脉丛取血，留取血液标本做血液检测;在2、4、8、12周分别处死4只大鼠，取其肝、肾做病理切片分析。其余大鼠于第13周开始停药，继续常规饲养2周后处死，取其肝、肾做病理切片分析 [7] 。
血液检测:采用全自动生化分析仪测定，指标有谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、白蛋白(ALB)、血肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)。
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肝、肾组织形态学检测:肝、肾组织用10%中性福尔马林与95%酒精(1:1)固定，石蜡包埋，切成2μm厚的切片，分别做H-E染色，显微镜观察。定期检测大鼠体重变化。
1.5 统计学处理 数据以均数±标准差(ˉx±s)表示，不同实验组同一时间点的组间差异采用方差分析检验。P<0.05表示差异有显著性，P<0.01表示差异有非常显著性。
2 结果
2.1 LD 50 见表1。
表1 广防己LD 50 测定结果
LD 50 的95%平均可信限(L 95 )为258.8±20.33g/kg
2.2 慢性毒性
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2.2.1 大鼠的体重变化 各组大鼠在给药期间，体重变化 与正常对照组相比差异均无显著性(P>0.05)。
2.2.2 大鼠血液谷丙转氨酶(ALT)变化 见表2。
表2 各组大鼠谷丙转氨酶(ALT)变化 (U/L)
注:不同组在同一时间与正常对照组相比较， ˇ P<0.05，ˇˇ P<0.01 结果表明:灌药后8周后，高剂量组及中剂量组ALT稍有增加，但与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05)，低剂量组、石灰水组、黄连组及复方组ALT值下降，其中复方组下降明显，与正常对照组差异有显著性(P<0.05)。12 周后各组ALT值均下降，其中高剂量组下降明显，并与正常对照组差异有非常显著性(P<0.01)，其余各组差异均无显著性。
2.2.3 大鼠血液谷草转氨酶(AST)变化 见表3。
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表3 各组大鼠谷草转氨酶(AST)变化
注:不同组在同一时间与正常对照组相比较， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01 结果表明:灌药1周后，除中剂量组外，其余各组AST值下降明显，正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01)，8周后，除高剂量组外，各组均有所升高，其中低剂量组，石灰水组与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05)，高剂量组下降明显，与正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01);12周后各组ALP均下降，高剂量组、石灰水组 及复方组下降明显并与正常对照组差异有非常显著性(P<0.01)，低剂量组与正常对照组差异有显著性(P<0.05)，中剂量组及黄连组与正常对照组差异无显著性(P>0.05)。
2.2.4 大鼠血液碱性磷酸酶(ALP)变化 见表4。
表4 各组大鼠碱性磷酸酶
注:不同组在同一时间与正常对照组相比较， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01 结果表明:灌药1周，高剂量组ALP值明显升高，与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05)，其余各组均下降，与正常对照组差异无显著性(P>0.05)。2周后，中剂量组及低剂量组ALP值升高，与正常对照组相比差异有显著性(P<0.01)，其余组虽有下降趋势，但其值仍较正常对照组高，与正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01)。4周 后各组ALP值均下降，到8周后，下降更为明显，与正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01)。12周后，各组ALP值下降，各组与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。
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2.2.5 大鼠血液白蛋白(ALB)变化 见表5。
表5 各组大鼠血液白蛋白(ALB)变化
注:不同组在同一时间与正常对照组相比较， ˇP<0.05， ˇˇ P<0.01 结果表明:给药2周后，ALB值下降，但与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05)。12周后除黄连组与复方组外，其余各组ALB值升高，虽比正常对照组低，但差异无显 著性(P>0.05)。
2.2.6 大鼠血尿素氮(BUN)变化 见表6。
表6 各组大鼠血尿素氮(BUN)变化
注:不同组在同一时间与正常对照组相比较， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01结果表明:黄连组分别在灌药1、2周后均略有下降，与正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01);灌药2周后复方组略有下降，与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05);灌药8周后，各组BUN均有上升，中剂量组及石灰水组与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05)，低剂量组上升 尤为明显，与正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01)，其余各组差异均无显著性(P>0.05)。12周后各组BUN值回落，与正常对照组差异无显著性(P>0.05)。
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2.2.7 大鼠血肌酐(Cr)变化 见表7。
表7 各组大鼠血肌酐(Cr)变化
注:不同组在同一时间与正常对照组相比较， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01 结果表明:给药2周后，各组Cr升高，但其值较正常对照组低，差异有非常显著性(P<0.01)，4周后，Cr值稍下降，中剂量组、低剂量组、石灰水组及复方组差异仍有非常显著性(P<0.01)。8周后，中剂量组、低剂量组，石灰水组值升高明显，与正常对照组差异有非常显著性(P<0.01)，其余组较正常对照组值为低。12周后中剂量组、低剂量组 及石灰水组的Cr值下降，与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05)，而高剂量组、黄连组及正常对照组的Cr值上升，虽然高剂量组、复方组与正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01)，但其Cr值较正常对照组低。
2.3 病理检查结果
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2.3.1 肝脏病理检查结果 见表8。
表8 肝脏病理检查结果
2.3.2 肾脏病理检查结果 见表9。
表9 肾病病理检查结果
注: ˇ 表示3份标本中有1份出现间质炎，以下分数的含义相同。
3 讨论
3.1 与肝功能相关的生化指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶及白蛋白等)实验组虽然与正常对照组差异有显著性，但并没有临床诊断意义;各阶段肝的病理切片结果中各组均见细胞内水肿、小灶状肝组织坏死、门管区炎，但各组间病变差异无显著性，显示未见剂量依赖性肝损害。生化指标与病理切片结果基本是一致，未见广防己对肝的实质性损伤。
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3.2 与肾功能相关的生化指标 血尿素氮在灌药1周后黄连组略有下降，与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05);灌药2周后复方组略有下降，与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05)，说明用黄连炮制广防己可能有一定减毒增效作用，可供临床参考。血肌酐(Cr)指标在给药2周后，各组均升高，但其值较正常对照组低，差异有非常显著性(P<0.01)，及至12周后各组Cr值均较正常对照组为低，其中中剂量组、低剂量组及石灰水组的Cr值下降与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05)，这就至少说明广防己对Cr指标无负面影响这一结果也与崔太根等 [8] 进行关木通毒性相互印证。病理切片发现某些组有少数病理改变(轻度间质纤维化、肾小管上皮细胞坏死、肾小管破损、肾小球硬化)。黄连组(用黄连炮制)在第4周、复方组(防己黄芪汤)在第8周均显示有解毒效果，AL、AC、AP、AF等组在停药2周后的病理检查标本中均未见肾损害的现象，但在停药2周后，高、中剂量组仍存在肾小管破坏，显示广防己对肾组织有迟发性毒性作用，可见本研究的剂量设计是恰当的，达到了说明剂量与毒性关系的目的。
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在长达3个月的实验期间，包括高剂量组在内，动物体重未下降，亦无动物死亡，急性毒性提示安全范围较宽，慢 性毒性实验表明黄连炮制和防己黄芪汤配伍在某些阶段均显示一定的减毒趋势，这个苗头值得深入进行研究，但可以肯定的是在中医辨证论治理论指引下的使用和《中国药典》 [9] 规定的广防己剂量是安全的。我们认为盲目地限制甚至禁止使用广防己的意见和办法是不可取的。
参考文献
1 Vanherweghem JL，Depierreux M，Tielemans C，et al.Rapidly progresˉsive interstitial renal fibrosis in young women:association with slimming regimen including Chinese herbs.Lancet，1993，341:387-391.
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2 Stiborova M，Frei E，Breuer A，et al.“Aristolactam I a metabolite of aristolochic acid I upon activation forms an adduct found in DNA of paˉtients with Chinese herbs nephropathy，”Exp Toxicol Pathol，1999，51(4-5):421-427.
3 Cosyns JP，Dehoux JP，Gouiot Y，et al.Chronic aristolochic acid toxicity in rabbits:A model of Chinese herbs nephropathy?Kidney Int，2001，59:2164-2173.
4 Dharmananda S.The Strange Story of Stephania.ITMSTART1996.Portˉland，OR:Institute for Traditional Medicine，1996.
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5 Martinez MC，Nortier J，Vereerstraeten P，et al.Progression rate of Chiˉnese herb nephropathy:impact of Aristolochia fangchi ingested dose.Nephrology Dialysis Transplantation，2002，17(3):408-412.
6 梅全喜，毕焕新.现代中药药理手册，北京:中国中医药出版社，1998，385.
7 施新猷.现代医学实验动物学，北京:人民军医出版社，2000，345-346.
8 崔太根，王海燕.药典法定剂量关木通对大鼠肾功能及间质结构影响的研究.中华肾脏病杂志，2000，16(2):106-109.
9 国家药典委员会.中华人民共和国药典，北京:化学工业出版社，2000，31-32.
作者单位:528400广州中医药大学中山附属医院
510000广州中医药大学基础学院
(收稿日期:2004-02-14)
(编辑黄 永), http://www.100md.com
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关键词 广防己 马兜铃酸 肝毒性 肾毒性
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-6424(2004)06-0486-05
Experimental study of the hepatotoxicity and nephrotoxicity
of Aristolochia Fangchi
Peng Weiwen，Mei Quanxi，Gao Yuqiao，et al.
Zhongshan Hospital，Guangzhou University of TCM，Zhongshan528400.
【Abstract】 Objective To study the acute toxicity and chronic toxicity of Aristolochia Fangchi，and make an approach to see if processing and compatibilitycan attenuation.Methods Classic conventional toxicity tests were used.Normal SDrats were divided into seven groups and given different doses and processed extract of Aristolochia Fangchi12weeks.Some rats were sacrificed regularly.Kidneys and livers were pathoanalyzed.Blood samples were made biochemical tests.Renal andhepatic pathology and function were observed.Results The95%average confiˉdencelevel of LD 50 was258.8±20.33g/kg.That the results of biochemical indicators and pathoanalysis were at equal showed no parenchymatous injury of liver.All groups’blood urea nitrogen(BUN)and serum creactinine(Scr)reˉmained in the normal range.It was showed interstitial fibrosis，renal tubular epithelial cell necrosis，nephric tubule，glomerular sclerosis in the pathological sections of the high dose group and mid-dose group，even no recovery after withdrawal2weeks.Therewere no renal injury showed in the pathological sections of the low dose group，compatibility group and processed groups after withdrawal2weeks.Conclusion UsingAristolochia Fangchi under the theory of traˉditional Chinese medicine and Chinese pharmacopeia is safe.
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Key words Aristolochia Fangchi aristolochia acid hepatotoxicity nephrotoxicity
比利时1990～1992年有1741例服用同一家诊所开出的减肥药“苗条丸”(由芬氟拉明、安菲拉酮、波希鼠李皮、颠茄浸膏、乙酰唑胺、防己、厚朴组成)长达数月甚至3年，有几十例的服用者发生严重程度不同的肾损害问题 [1] ，根据马兜铃酸(Aristolochic Acid，以下简称AA)有致癌和致肾间质纤维化等毒性的报道，国外就把含有AA的广防己、关木通定为肾毒元凶，禁止进口 [2，3] ，此事在国内引起共鸣。实际上，国外对此仍有争论，焦点有三:“苗条丸”毒副作用的发生率不到10%，怀疑有过敏体质问题;使用不当(非广防己的适应证、疗程过长);“苗条丸”中其它药物也有致肾毒的可能。更有学者注意到在中国训练有素的中医使用这类中药未见发生肾衰之类极易觉察的毒性反应 [4] 。总之，广 防己与马兜铃肾病(Aristolochic Acid Nephropathy，简称AAN)的关系仍待证明 [5] 。另一方面，AA在国外曾经作为抗癌药和免疫增强剂达25年之久，任何药物都是有效也有毒副作用，关键是善于取利避害。总的来说，AAN的研究较多较深，而广防己等含AA中药的急慢性毒性研究较少，本研究的特点在于选用道地的广防己药材，测定其中AA含量，并考虑到炮制和配伍因素，以揭示中医药学术的奥秘和减低毒性的可能性，目的是为正确认识和评价其安全性提供科学基础。
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1 材料与方法
1.1 实验动物 SD大鼠，雌雄各半，体重190～210g/只(广东省医学实验动物中心提供)。在本动物室饲养，实验期间自由饮水、摄食，室内温度控制在20～26℃左右、通风及湿度良好。
1.2 药材来源及供试验药液制备 药材购于广东省肇庆市高要市禾城镇(广东肇庆药检所陈洁秀提供)，经笔者鉴定为马兜铃科植物Aristolochia fangji Wu的干燥根。
药品粉碎过20目，按以下方法制备供试验药液:广防己:用70%乙醇回流提取2次，每次1h，浓缩成流浸膏，冰箱贮存;临用前，用蒸馏水分别配成相当于广防己生药1g/ml、0.5g/ml、0.1g/ml作为高、中、低剂量。
广防己(石灰水制):用饱和石灰水温浸广防己24h，再用70%乙醇回流提取2次，每次1h，浓缩成流浸膏，冰箱贮存;临用前，用蒸馏水配成相当于广防己生药0.5g/ml。
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广防己(黄连制):用黄连醇提液温浸广防己24h，再用70%乙醇回流提取2次，每次1h，浓缩成流浸膏，冰箱贮存;临用前，用蒸馏水配成相当于广防己生药0.5g/ml。
复方 [6] (防己黄芪汤加姜、枣):广防己10g，黄芪10g，白术6g，甘草3g，生姜6g，大枣约10g)，用70%乙醇回流提取2次，每次1h，浓缩成流浸膏，冰箱贮存;临用前，用蒸馏水配成相当于广防己生药0.1g/ml。
1.3 仪器 BX-40型显微镜(日本Olympus)、7170A型全自动生化分析仪(日本日立)、T500型电子天平(常熟市双杰测试仪器厂)、玻璃毛细管、灌胃器。
1.4 实验方法
1.4.1 LD 50 NIH小鼠，雌雄各半，体重18～22g，由广州中医药大学实验动物中心提供。以广防己醇浸膏配制成适当浓度灌胃，按照常法进行急性毒性实验，以改进寇氏法计算 LD 50 及LD 50 的95%平均可信限。
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1.4.2 慢性毒性 实验动物SD大鼠，雌雄各半，体重190～210g/只，广东省医学实验动物中心提供。大鼠随机分为7组(每组20只):AH(10g生药/kg·d)、AM(5g生药/kg·d)、AL(1g生药/kg·d)、AC(5g生药/kg·d)、AP(5g生药/kg·d)、AF(4.5g生药/kg·d)为给药组，连续灌胃12周。正常对照组(正常对照组):按1ml/(100g·d)给予蒸馏水。
以上七组均在0、1、2、4、8、12周，大鼠眼眶后静脉丛取血，留取血液标本做血液检测;在2、4、8、12周分别处死4只大鼠，取其肝、肾做病理切片分析。其余大鼠于第13周开始停药，继续常规饲养2周后处死，取其肝、肾做病理切片分析 [7] 。
血液检测:采用全自动生化分析仪测定，指标有谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、白蛋白(ALB)、血肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)。
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肝、肾组织形态学检测:肝、肾组织用10%中性福尔马林与95%酒精(1:1)固定，石蜡包埋，切成2μm厚的切片，分别做H-E染色，显微镜观察。定期检测大鼠体重变化。
1.5 统计学处理 数据以均数±标准差(ˉx±s)表示，不同实验组同一时间点的组间差异采用方差分析检验。P<0.05表示差异有显著性，P<0.01表示差异有非常显著性。
2 结果
2.1 LD 50 见表1。
表1 广防己LD 50 测定结果
LD 50 的95%平均可信限(L 95 )为258.8±20.33g/kg
2.2 慢性毒性
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2.2.1 大鼠的体重变化 各组大鼠在给药期间，体重变化 与正常对照组相比差异均无显著性(P>0.05)。
2.2.2 大鼠血液谷丙转氨酶(ALT)变化 见表2。
表2 各组大鼠谷丙转氨酶(ALT)变化 (U/L)
注:不同组在同一时间与正常对照组相比较， ˇ P<0.05，ˇˇ P<0.01 结果表明:灌药后8周后，高剂量组及中剂量组ALT稍有增加，但与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05)，低剂量组、石灰水组、黄连组及复方组ALT值下降，其中复方组下降明显，与正常对照组差异有显著性(P<0.05)。12 周后各组ALT值均下降，其中高剂量组下降明显，并与正常对照组差异有非常显著性(P<0.01)，其余各组差异均无显著性。
2.2.3 大鼠血液谷草转氨酶(AST)变化 见表3。
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表3 各组大鼠谷草转氨酶(AST)变化
注:不同组在同一时间与正常对照组相比较， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01 结果表明:灌药1周后，除中剂量组外，其余各组AST值下降明显，正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01)，8周后，除高剂量组外，各组均有所升高，其中低剂量组，石灰水组与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05)，高剂量组下降明显，与正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01);12周后各组ALP均下降，高剂量组、石灰水组 及复方组下降明显并与正常对照组差异有非常显著性(P<0.01)，低剂量组与正常对照组差异有显著性(P<0.05)，中剂量组及黄连组与正常对照组差异无显著性(P>0.05)。
2.2.4 大鼠血液碱性磷酸酶(ALP)变化 见表4。
表4 各组大鼠碱性磷酸酶
注:不同组在同一时间与正常对照组相比较， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01 结果表明:灌药1周，高剂量组ALP值明显升高，与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05)，其余各组均下降，与正常对照组差异无显著性(P>0.05)。2周后，中剂量组及低剂量组ALP值升高，与正常对照组相比差异有显著性(P<0.01)，其余组虽有下降趋势，但其值仍较正常对照组高，与正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01)。4周 后各组ALP值均下降，到8周后，下降更为明显，与正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01)。12周后，各组ALP值下降，各组与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。
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2.2.5 大鼠血液白蛋白(ALB)变化 见表5。
表5 各组大鼠血液白蛋白(ALB)变化
注:不同组在同一时间与正常对照组相比较， ˇP<0.05， ˇˇ P<0.01 结果表明:给药2周后，ALB值下降，但与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05)。12周后除黄连组与复方组外，其余各组ALB值升高，虽比正常对照组低，但差异无显 著性(P>0.05)。
2.2.6 大鼠血尿素氮(BUN)变化 见表6。
表6 各组大鼠血尿素氮(BUN)变化
注:不同组在同一时间与正常对照组相比较， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01结果表明:黄连组分别在灌药1、2周后均略有下降，与正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01);灌药2周后复方组略有下降，与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05);灌药8周后，各组BUN均有上升，中剂量组及石灰水组与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05)，低剂量组上升 尤为明显，与正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01)，其余各组差异均无显著性(P>0.05)。12周后各组BUN值回落，与正常对照组差异无显著性(P>0.05)。
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2.2.7 大鼠血肌酐(Cr)变化 见表7。
表7 各组大鼠血肌酐(Cr)变化
注:不同组在同一时间与正常对照组相比较， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01 结果表明:给药2周后，各组Cr升高，但其值较正常对照组低，差异有非常显著性(P<0.01)，4周后，Cr值稍下降，中剂量组、低剂量组、石灰水组及复方组差异仍有非常显著性(P<0.01)。8周后，中剂量组、低剂量组，石灰水组值升高明显，与正常对照组差异有非常显著性(P<0.01)，其余组较正常对照组值为低。12周后中剂量组、低剂量组 及石灰水组的Cr值下降，与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05)，而高剂量组、黄连组及正常对照组的Cr值上升，虽然高剂量组、复方组与正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01)，但其Cr值较正常对照组低。
2.3 病理检查结果
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2.3.1 肝脏病理检查结果 见表8。
表8 肝脏病理检查结果
2.3.2 肾脏病理检查结果 见表9。
表9 肾病病理检查结果
注: ˇ 表示3份标本中有1份出现间质炎，以下分数的含义相同。
3 讨论
3.1 与肝功能相关的生化指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶及白蛋白等)实验组虽然与正常对照组差异有显著性，但并没有临床诊断意义;各阶段肝的病理切片结果中各组均见细胞内水肿、小灶状肝组织坏死、门管区炎，但各组间病变差异无显著性，显示未见剂量依赖性肝损害。生化指标与病理切片结果基本是一致，未见广防己对肝的实质性损伤。
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3.2 与肾功能相关的生化指标 血尿素氮在灌药1周后黄连组略有下降，与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05);灌药2周后复方组略有下降，与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05)，说明用黄连炮制广防己可能有一定减毒增效作用，可供临床参考。血肌酐(Cr)指标在给药2周后，各组均升高，但其值较正常对照组低，差异有非常显著性(P<0.01)，及至12周后各组Cr值均较正常对照组为低，其中中剂量组、低剂量组及石灰水组的Cr值下降与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05)，这就至少说明广防己对Cr指标无负面影响这一结果也与崔太根等 [8] 进行关木通毒性相互印证。病理切片发现某些组有少数病理改变(轻度间质纤维化、肾小管上皮细胞坏死、肾小管破损、肾小球硬化)。黄连组(用黄连炮制)在第4周、复方组(防己黄芪汤)在第8周均显示有解毒效果，AL、AC、AP、AF等组在停药2周后的病理检查标本中均未见肾损害的现象，但在停药2周后，高、中剂量组仍存在肾小管破坏，显示广防己对肾组织有迟发性毒性作用，可见本研究的剂量设计是恰当的，达到了说明剂量与毒性关系的目的。
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在长达3个月的实验期间，包括高剂量组在内，动物体重未下降，亦无动物死亡，急性毒性提示安全范围较宽，慢 性毒性实验表明黄连炮制和防己黄芪汤配伍在某些阶段均显示一定的减毒趋势，这个苗头值得深入进行研究，但可以肯定的是在中医辨证论治理论指引下的使用和《中国药典》 [9] 规定的广防己剂量是安全的。我们认为盲目地限制甚至禁止使用广防己的意见和办法是不可取的。
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8 崔太根，王海燕.药典法定剂量关木通对大鼠肾功能及间质结构影响的研究.中华肾脏病杂志，2000，16(2):106-109.
9 国家药典委员会.中华人民共和国药典，北京:化学工业出版社，2000，31-32.
作者单位:528400广州中医药大学中山附属医院
510000广州中医药大学基础学院
(收稿日期:2004-02-14)
(编辑黄 永), http://www.100md.com