用正交试验法优选通络清脑胶囊水煎醇沉的提取工艺
【文献标识码】 B 【文章编号】 1606-8106(2004)12-1161-02
新药通络清脑胶囊是由延胡索、独活、白芍、甘草等七味中药组成的中药复方制剂，具有镇静、镇痛之功效，主要用于治疗头痛。方中白芍主要含有芍药苷，具有镇静、镇痛、抗菌等功效，甘草有效成分为甘草酸、甘草次酸等，具有解毒、解痉等功效 [1]。上述有效成分易溶于水，又溶于乙醇，故对方中白芍、甘草采用水煎醇沉法提取。本试验用正交试验法，以出膏率和芍药苷含量为指标，用HPLC法对白芍进行含量测定，用方差分析的方法进行分析，以优选通络清脑胶囊水煎醇沉的提取工艺条件。
1 仪器与药品
1.1 药品 白芍、甘草药材，购于北京同仁堂药店吉林分店，经鉴定符合中国药典2000年版一部标准。芍药苷，中国药品生物制品检定所提供，批号为0736-200219，规格:供含量测定用。甲醇:色谱纯;其它试剂均为分析纯。
, 百拇医药
1.2 仪器 日本岛津LC-2010A型高效液相色谱仪。
2 以出膏率为指标优选最佳水煎工艺
2.1 试验因素与水平 见表1。
表1 水提试验L 9 (3 4 )因素水平因素水平 A 加水量
正交试验 称取白芍9g，甘草6g，精密称定，按表1试验条件进行水提试验。水提液滤过，适当浓缩，转移至100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1～9号供试品溶液各10ml，置干燥恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，置80℃烘箱干燥3h，移至干燥器中冷却 30min，迅速精称，计算出膏率。正交试验结果，见表2。
表2 白芍、甘草水提以出膏率为指标正交试验结果
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2.3 结果分析 由表2可见，四个因素的极差大小顺序为B>C>A>D，各因素与水平的组合应为A 2 B 3 C 3 。进一步进行方差分析，结果见表3。
表3 方差分析
3 以白芍中芍药苷的含量为指标优选最佳水煎工艺
3.1 试验因素与水平 见表1。
3.2 L 9 (3 4 )正交试验
3.2.1 色谱条件 色谱柱C 18 ;流动相:甲醇-水(30:70);流速:1ml/min;检测波长230nm;柱温:室温。
3.2.2 标准曲线的制备 取干燥至恒重的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.50mg的溶液(实际称样量12.50mg定容于25ml量瓶中，每1ml含0.5mg)，精密吸取对照品溶液1、2、5、10、15μl，分别注入液相色谱仪，测定。以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表4。
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表4 标准曲线数据
3.2.3 供试品溶液的制备与测定 分别精密量取定容100 ml量瓶中的1～9号提取液各20ml，分别置分液漏斗中，用乙醚提取1次，每次20ml，弃去乙醚液，水层用饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣用甲醇分别定容于25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取5ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液2μl，供试品溶液1号、2号各15μl，3号、9号各5μl，4号～8号各10μl，分别注入液相色谱仪，按标准曲线制备方法进行测定，结果，见表5。
表5 白芍、甘草水提以芍药苷含量为指标正交试验结果
3.3 结果分析 由表5可见，四个因素的极差大小顺序为A>B>D>C，各因素与水平的组合应为A 3 B 3 C 2 。进一步进行方差分析，结果见表6。
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表6 方差分析方差来源离均差平方和自由度
4 优选最佳醇沉工艺
4.1 出膏率的测定 称取白芍9g、甘草6g，精密称定，按上述优选的工艺条件(加6倍量的水，提取3次，每次2h)进行水煎、滤过、浓缩，加水定容于100ml量瓶中。分别精密量取10ml共3份置具塞锥形瓶中，浓缩至干，残渣分别加入50%、60%、70%乙醇各20ml，超声使溶解，充分搅拌，密塞，静置24h(4℃)，滤过置干燥恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，置80℃烘箱干燥3h，移至干燥器中冷却30min，迅速精称，计算出膏率。结果见表7。
4.2 芍药苷含量的测定 残渣分别加水20ml使溶解，用乙醚提取1次，每次20ml，弃去乙醚液，水层用饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提液，蒸干，残渣用甲醇分别定容于25ml量瓶中，作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液2μl、供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，按标准曲线制备方法进行测定，计算白芍不同浓度醇沉后芍药苷的含量。结果见表7。
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表7 白芍、甘草不同浓度醇沉后试验结果
结果表明:60%醇沉后，芍药苷含量最高。故最后确定白芍、甘草水煎醇沉工艺为:加6倍量的水，提取3次，每次2h，醇沉浓度为60%。
5 讨论
本文采用正交试验法，以出膏率和芍药苷含量为指标，用高效液相色谱法进行含量测定，优选通络清脑胶囊水煎醇沉提取工艺条件，最终选用6倍量的水，煎煮3次，每次2h，然后用60%乙醇进行沉淀(于4℃静置24h)的制备工艺。此工艺能够保证通络清脑胶囊中白芍和甘草有效成分提取较完全，以确保疗效。
参考文献
1 郑虎古.中药现代研究与应用.北京:学苑出版社，1997，1261，2132.
作者单位:130021吉林长春长春中医学院附属医院
130061吉林长春吉林省药品检验所
(编辑海 涛), 百拇医药
新药通络清脑胶囊是由延胡索、独活、白芍、甘草等七味中药组成的中药复方制剂，具有镇静、镇痛之功效，主要用于治疗头痛。方中白芍主要含有芍药苷，具有镇静、镇痛、抗菌等功效，甘草有效成分为甘草酸、甘草次酸等，具有解毒、解痉等功效 [1]。上述有效成分易溶于水，又溶于乙醇，故对方中白芍、甘草采用水煎醇沉法提取。本试验用正交试验法，以出膏率和芍药苷含量为指标，用HPLC法对白芍进行含量测定，用方差分析的方法进行分析，以优选通络清脑胶囊水煎醇沉的提取工艺条件。
1 仪器与药品
1.1 药品 白芍、甘草药材，购于北京同仁堂药店吉林分店，经鉴定符合中国药典2000年版一部标准。芍药苷，中国药品生物制品检定所提供，批号为0736-200219，规格:供含量测定用。甲醇:色谱纯;其它试剂均为分析纯。
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1.2 仪器 日本岛津LC-2010A型高效液相色谱仪。
2 以出膏率为指标优选最佳水煎工艺
2.1 试验因素与水平 见表1。
表1 水提试验L 9 (3 4 )因素水平因素水平 A 加水量
正交试验 称取白芍9g，甘草6g，精密称定，按表1试验条件进行水提试验。水提液滤过，适当浓缩，转移至100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1～9号供试品溶液各10ml，置干燥恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，置80℃烘箱干燥3h，移至干燥器中冷却 30min，迅速精称，计算出膏率。正交试验结果，见表2。
表2 白芍、甘草水提以出膏率为指标正交试验结果
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2.3 结果分析 由表2可见，四个因素的极差大小顺序为B>C>A>D，各因素与水平的组合应为A 2 B 3 C 3 。进一步进行方差分析，结果见表3。
表3 方差分析
3 以白芍中芍药苷的含量为指标优选最佳水煎工艺
3.1 试验因素与水平 见表1。
3.2 L 9 (3 4 )正交试验
3.2.1 色谱条件 色谱柱C 18 ;流动相:甲醇-水(30:70);流速:1ml/min;检测波长230nm;柱温:室温。
3.2.2 标准曲线的制备 取干燥至恒重的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.50mg的溶液(实际称样量12.50mg定容于25ml量瓶中，每1ml含0.5mg)，精密吸取对照品溶液1、2、5、10、15μl，分别注入液相色谱仪，测定。以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表4。
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表4 标准曲线数据
3.2.3 供试品溶液的制备与测定 分别精密量取定容100 ml量瓶中的1～9号提取液各20ml，分别置分液漏斗中，用乙醚提取1次，每次20ml，弃去乙醚液，水层用饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣用甲醇分别定容于25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取5ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液2μl，供试品溶液1号、2号各15μl，3号、9号各5μl，4号～8号各10μl，分别注入液相色谱仪，按标准曲线制备方法进行测定，结果，见表5。
表5 白芍、甘草水提以芍药苷含量为指标正交试验结果
3.3 结果分析 由表5可见，四个因素的极差大小顺序为A>B>D>C，各因素与水平的组合应为A 3 B 3 C 2 。进一步进行方差分析，结果见表6。
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表6 方差分析方差来源离均差平方和自由度
4 优选最佳醇沉工艺
4.1 出膏率的测定 称取白芍9g、甘草6g，精密称定，按上述优选的工艺条件(加6倍量的水，提取3次，每次2h)进行水煎、滤过、浓缩，加水定容于100ml量瓶中。分别精密量取10ml共3份置具塞锥形瓶中，浓缩至干，残渣分别加入50%、60%、70%乙醇各20ml，超声使溶解，充分搅拌，密塞，静置24h(4℃)，滤过置干燥恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，置80℃烘箱干燥3h，移至干燥器中冷却30min，迅速精称，计算出膏率。结果见表7。
4.2 芍药苷含量的测定 残渣分别加水20ml使溶解，用乙醚提取1次，每次20ml，弃去乙醚液，水层用饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提液，蒸干，残渣用甲醇分别定容于25ml量瓶中，作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液2μl、供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，按标准曲线制备方法进行测定，计算白芍不同浓度醇沉后芍药苷的含量。结果见表7。
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表7 白芍、甘草不同浓度醇沉后试验结果
结果表明:60%醇沉后，芍药苷含量最高。故最后确定白芍、甘草水煎醇沉工艺为:加6倍量的水，提取3次，每次2h，醇沉浓度为60%。
5 讨论
本文采用正交试验法，以出膏率和芍药苷含量为指标，用高效液相色谱法进行含量测定，优选通络清脑胶囊水煎醇沉提取工艺条件，最终选用6倍量的水，煎煮3次，每次2h，然后用60%乙醇进行沉淀(于4℃静置24h)的制备工艺。此工艺能够保证通络清脑胶囊中白芍和甘草有效成分提取较完全，以确保疗效。
参考文献
1 郑虎古.中药现代研究与应用.北京:学苑出版社，1997，1261，2132.
作者单位:130021吉林长春长春中医学院附属医院
130061吉林长春吉林省药品检验所
(编辑海 涛), 百拇医药