B细胞淋巴瘤中错配修复基因GTBP、hMLH1蛋白表达的研究( 基金项目)
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基金项目:国家自然科学基金资助项目(编号:30160030)
【摘要】 目的 探讨GTBP、hMLH1基因蛋白在B细胞淋巴瘤发生学上的意义。方法 对23例B细胞淋巴瘤细胞进行免疫组织化学EnVinsion法检测GTBP、hMLH1的表达情况。结果 DLBCL细胞GTBP蛋白表达阳性7例(7/11)，hMLH1蛋白表达阳性3例(3/6)。FL中GTBP蛋白表达有3例(3/5)，hMLH1蛋白表达阳性4例(4/4)。DLBCL中GTBP、hMLH1蛋白表达与FL中GTBP、hMLH1蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。原发生于淋巴结有7例GTBP蛋白表达阳性(7/8)，有4例hMLH1蛋白表达阳性(4/6)，原发生于淋巴结外有8例GTBP蛋白表达阳性(8/13)，有8例hMLH1蛋白表达阳性(8/9)，原发生于淋巴结内与淋巴结外的GTBP、hMLH1蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。高度恶性有8例GTBP蛋白表达(8/12)，有4例hMLH1蛋白表达阳性(4/6);低度恶性有7例GTBP蛋白表达阳性(7/9)，有8例hMLH1蛋白表达阳性(8/9)，GTBP蛋白在高度恶性与低度恶性表达之间差异无显著性(P>0.05);而hMLH1蛋白表达在低度恶性较高度恶性高，差异有显著性(P<0.05)。结论 hMLH1和GTBP错配修复基因蛋白表达与B细胞淋巴瘤组织学类型、肿瘤的发生部位可能无关系。hMLH1基因蛋白在B细胞淋巴瘤的发生中可能起一定的作用。
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关键词 B细胞淋巴瘤 错配修复基因 GTBP hMLH1 免疫组化
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2004)06-0481-04
The study of mismatch repair gene GTBP and
hMLH1proteins in B-cell lymphoma
Wei Zhonghua，Xie Yuping
The Affiliated Hospiatl of Zunyi Medical College，Guizhou563003.
【Abstract】 Objective To evaluate GTBP、hMLH1protein in the pathagenesis of the B-cell lymphoma.Methods Twenty-three cases with B-cell lymphoma were observed about the expression of GTBP and hMLH1proˉteins by the method of immunohistochemistry En Vinsion.Results In DLBCL，the positive cells for GTBP was found in7cases(7/11)，the positive signal for hMLH1was detected in3cases(3/6);the FLrevealed GTBP positive signal in3cases(3/5)and the hMLH1positive signal in4cases(4/4).Between the DLBCL and FL，no any significant difˉference was found in the GTBP and hMLH1expression(P>0.05).In the nodal cases，there were7cases showing GTBP positive tumor cells(7/8)and4cases expressing hMLH1positive cells(4/6).In the extra-nodal site，there were8cases for GTBP positive(8/13)and8cases for hMLH1positive(8/9).So，between the nodal and extra-nodal sites，there were also no any significant difference detected in the GTBP and hMLH1expression(P>0.05).In high grade group，we have found8cases were positive for GTBP(8/12)and4cases positive for hMLH1(4/6).In the low grade group，the GTPB positive cells could be seen in7cases(7/9)and hMLH1positive cells also be found in8cases(8/9).hMLH1has more expression frequence in the low grade group than that in thehigh grade group(P<0.05)，but GTBP was not.Conclusion There are no any relationshipes between the B-cell lymphoma histological catˉegories、the location of tumor and the GTBP/hMLH1expression in the tumor cells.So we consider that hMLH1plays an important role in the pathogenesis of B-cell lymphoma.
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Key words B cell lymphoma mismatch repair gene GTBP hMLH1 immunohistochemistry
错配修复(mismatch repair，MMR)是指细胞对复制错误进行的修复，是生物体维持自身遗传物质稳定性的重要机制。已被克隆的人类MMR基因共有6个，包括hMSH2、hMLH1、hPMS1、hPMS2、hMSH6(GTBP)、hMSH3。这些基因的缺陷可致复制后错配修复功能丧失，引起细胞的高自发突变率，最终导致整个基因组的不稳定性，产生突变体。其中最常见的突变体表型(mutatorphenotype)为微卫星不稳定性(Microsatellite Instability，MSI)。Boyer等报道证实错配修复基因缺陷和微卫星不稳定性改变，两者之间有着十分密切的关系。GTBP、hMLH1是已被克隆的人类MMR基因中的2个。GTBP蛋白染色定位在2p16，其功能是与hMSH2形成复合物，对应的同源物为MutS;hMLH1蛋白染色体定位在3p21.3-23，其功能是与错配点结合并修复，对应的同源物为MutL [1] 。由于DNA错配修复基因发生突变，对错配的修复功能降低，导致微卫星不稳定性，在恶性肿瘤发生过程中的作用受到关注，因此，直接检测肿瘤组织中MMR基因蛋白表达情况能更直观地反映基因的功能状况。目前国内有关MMR和MSI在各型淋巴瘤中的研究较为少见，MMR和MSI在淋巴瘤发病学中的意义和作用仍有待进一步探讨。本研究的目的在于通过免疫组化方法检测错配修复基因GTBP、hMLH1蛋白在B细胞淋巴瘤组织中的表达情况，以期为结合MSI进行综合分析，提供理论参考依据。
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1 资料与方法
1.1 一般资料 标本来自1998年1月～2003年11月遵义医学院附属医院病理科的B细胞淋巴瘤档案资料23例。男16例，女7例;年龄最大者69岁，最小8岁。平均年龄46.8岁。男∶女为2.3∶1。所有病例均根据2001年最新WHO分类，均经病理组织学及免疫组织化学检查确诊。其中DLBCL12例，MALT3例，FL5例，BCLL/SLL1例，B-LBL/ALL1例，B-PLL1例。23例B细胞淋巴瘤中发生于淋巴结9例，其中颈部淋巴结有6例。其次分别发生于腹股沟及肠系膜和大网膜淋巴结。原发于淋巴结外的分布较广，有14例，包括胃肠道、阴茎、右上肺叶肿块、脾、胰尾等。所有患者术前均未经过放射治疗或化学治疗。所有标本均经过10%的中性甲醛固定，常规石蜡包埋。根据WHO分类 [1] ，高度恶性组13例(DLBCL12例，B-LBL/ALL1例)。低度恶性组10例(FL5例，BELL/SLL1例，MALT3例，B-PLL1例)。
, 百拇医药 1.2 方法
1.2.1 试剂来源 一抗GTBP、hMLH1均购自美国Santa Cruz Biotechnology公司。En Vinsion复合物和DAB显色剂购于基因公司。
1.2.2 玻片处理 载玻片于10%重氯酸钾液中浸泡12h，盖玻片浸泡6h，自来水冲洗干净后蒸馏水浸泡，70℃烤箱中烘干，每张玻片上涂抹一层多聚赖氨酸防脱片剂，室温凉干备用。
1.2.3 化学处理 免疫组织化学进行En Vinsion法染色。
1.3 染色结果的判定 细胞核出现弥漫性棕黄色或棕褐色细颗粒状染色为阳性细胞，反之为阴性。阳性细胞≤25%标记为(+);阳性细胞25%～50%标记为(++)。阳性细胞>50%标记为(+++)。
1.4 统计学处理 实验数据严格按照统计学要求进行收集、整理，建立数据库。采用样本率的四格表Fisher确切概率法检验，P<0.05为对比组间的差异有显著性。
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2 结果
2.1 23例B细胞淋巴瘤组织中GTBP、hMLH1表达结果 见表1。
表1 B细胞淋巴瘤组织中GTBP、hMLH1表达结果
图1 DLBCL瘤细胞hMLH1 核阳性(ABC×200)
2.2 不同组织学类型B细胞淋巴瘤组织中GTBP、hMLH1蛋白的表达 见表2。
表2 不同组织类型GTBP、hMLH1表达
2.3 不同部位B细胞淋巴瘤组织中GTBP、hMLH1表达结果 见表3。
表3 不同部位GTBP、hMLH1表达
2.4 不同恶性程度B细胞淋巴瘤组织中GTBP、hMLH1表达结果 见表4。
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表4 不同恶性程度GTBP、hMLH1表达
注: ˇ 与低度恶性组比较P<0.05 高度恶性组13例，有8例GTBP蛋白表达(8/12)，4例hMLH1蛋白表达阳性(4/7)。低度恶性组10例，有7例GTBP蛋白表达阳性(7/9)，8例hMLH1蛋白表达阳性达(8/8)。GTBP蛋白表达在低度恶性组与高度恶性组中相比较差异无显著性，P>0.05，hMLH1蛋白表达在低度恶性组与高度恶性组中相比较差异有显著性，P<0.05。
3 讨论
正常情况下，DNA的双螺旋结构是靠A-T，G-C之间的氢键互补配对而维持的，当各种因素使DNA之间的碱基互补配对发生了错误，即形成了DNA的错配。为保证DNA复制的忠实性，维持基因组的稳定性，降低细胞的自发突变，需要对错配的碱基进行修复，即错配修复。发挥这种作用的基因即错配修复基因。当错配修复基因由于突变而不能发挥错配修复功能时，将会出现微卫星的不稳定性。到目前为止，已发现至少有6种错配修复基因与人类肿瘤的发生有关，即hMSH2、hMSH6(GTBP)、hMSH3、hMLH1、hPMS1、hPMS2。前3个与大肠杆菌MutS同源，后3个与MutL同源 [2] 。由于DNA复制、修复过程的复杂性，除了错配修复功能缺陷外，导致MSI还可能存在其它机制，特别是对于大多数非结直肠癌的肿瘤，其MSI的产生可能与错配修复功能无关。现有学者提出，广泛、重度的DNA损伤超过了DNA的修复功能时，也可能出现MSI，这就是所谓的过饱和机制，在这种机制下DNA的错配修复功能是完整的 [3] 。
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基因的突变将产生有缺陷的蛋白，从而不能发挥错配修复功能，导致微卫星DNA的不稳定性，增加整个基因组的不稳定性，从而引起包括癌基因及抑癌基因等一系列改变，当突变积累到一定程度，就会导致细胞的恶性转化，发生多种肿瘤。hMLH1、GTBP是MMR基因中的2个。hMLH1基因是研究较多的一种，1994年由Bronner等在研究遗传性非息肉形成性结、直肠癌的过程中发现，它定位于染色体的3p21.3-23，基因组DNA全长约58kb(不包括启动子)，含19个外显子，cDNA全长2484bp，编码长度为2268bp的开放阅读框架。hMLH1蛋白由756个氨基酸残基组成，与酵母的MLH1蛋白有41%的同源性。研究表明，hMLH1在多种组织中均有表达。约30%的遗传性非息肉性结直肠癌的发生与hMLH1基因的突变或缺失有关。其突变主要集中在15和16外显子，约占hMLH1突变的50%，分别为点突变和移码突变，70%的突变因形成终止密码导致翻译过早终止而产生不全的hMLH1蛋白。GTBP基因定位在2p16，其编码蛋白GTBP分子量为162kD。GTBP的功能结合到DNA链上含有G/T错配的部位，但是该功能的进行需要与hMSH2形成复合物才能完成。
, 百拇医药
本研究发现，DLBCL中GTBP蛋白表达(7/11)和hMLH1蛋白表达(3/6)，与FL GTBP蛋白表达(3/5)，hMLH1蛋白表达(4/4)，相比较进行统计学处理，未发现有统计学差异。由此推测，hMLH1和GTBP错配修复基因蛋白表达与B细胞淋巴瘤组织学类型可能无关。其余MALT、BCLL/SLL、B-LBL/ALL以及B-PLL因例数太少，无法统计这几种组织学类型中GTBP和hMLH1表达的差异，在此不作讨论，有待增加病例数。B细胞淋巴瘤GTBP和hMLH1蛋白表达在结内和结外之间没有发现统计学差异，也由此推断MMR基因的表达与B细胞淋巴瘤发生的部位无关。有报道人群中hMLH1基因突变率平均为1:3139。也有研究结果显示，hMLH1蛋白在肺癌组织中表达阳性率为58.3%，推测hMLH1表达低者多处于临床晚期，预后较差 [4] 。另有研究表明，在卵巢上皮癌中，hMLH1的表达率为69.6%，有hMLH1基因表达的病例，肿瘤的恶性程度较低，预后较好 [5] 。还有研究显示，hMLH1在肝细胞癌中阳性表达高达80%～88%，认为hMLH1在肝细胞癌中的缺失是一种并非常见的分子现象 [6] 。有肝胎细胞中hMLH1表达较强 [7] 。本研究中hMLH1蛋白表达在低度恶性B细胞淋巴瘤中高于高度恶性B细胞淋巴瘤，和大部分研究结果一致，说明hMLH1蛋白表达低的淋巴瘤类型浸润性较强，预后较差。其原因可能是hMLH1蛋白不但参与了DNA的错配修复，同时可能参与了肿瘤的分化过程。
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GTBP蛋白表达在B细胞淋巴瘤中高度恶性与低度恶性相比较，无统计学差异。结合GTBP的功能作用，推测GTBP在淋巴瘤的发生学上有重要作用，但没有参与肿瘤细胞的分化过程。以上结果非常有趣，可以作为蛋白表达水平的研究资料提供给MSI分析者和同一课题组中癌基因和抑癌基因的研究者，以从分子水平更深入地探讨恶性淋巴瘤的发生学机制。
国内已在多种疾病方面展开关于MSI的研究 [8，9] ，但关于恶性淋巴瘤MSI的资料不多。MSI的研究主要集中在人的FAP及HNPCC。国外虽然在某些恶性淋巴瘤类型中作过MSI的研究 [10～12] ，但恶性淋巴瘤的分类复杂，特别是在中国，其发病情况和欧美等国家有较大差异，有关各种类型淋巴瘤染色体异常，分子遗传学等方面的资料较少。通过对B细胞淋巴瘤MSI中的2个基因即GTBP、hMLH1蛋白进行检测，相信可以为全面认识B细胞淋巴瘤的MSI提供一定的线索。
参考文献
, 百拇医药
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10 Takakuwa T，HongyoT，SyaifudinM，et al.Microsatellite instability and K-PAS.P53mutations in thyroid lymphoma.Jpn J Cancer Res，2000，91:280-286.
11 Kodera T，Kohno T，Takakura S，et al.Microsatellite instability in lymˉphoid leukemia and lymphoma cell lines but no in myeloid leukemia cell lines.Genes Chromosomes Cancer，1999，26(3):267-269.
12 Starostik P，Greiner A，Schwarz S，et al.The role of microsatellite instaˉbility in gastric low-and high-grade lymphoma development.Am J Pathol，2000，157(4):1129-1136.
作者单位:563003贵州遵义医学院附属医院病理科
(收稿日期:2004-03-12)
(编辑元 红), 百拇医药
【摘要】 目的 探讨GTBP、hMLH1基因蛋白在B细胞淋巴瘤发生学上的意义。方法 对23例B细胞淋巴瘤细胞进行免疫组织化学EnVinsion法检测GTBP、hMLH1的表达情况。结果 DLBCL细胞GTBP蛋白表达阳性7例(7/11)，hMLH1蛋白表达阳性3例(3/6)。FL中GTBP蛋白表达有3例(3/5)，hMLH1蛋白表达阳性4例(4/4)。DLBCL中GTBP、hMLH1蛋白表达与FL中GTBP、hMLH1蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。原发生于淋巴结有7例GTBP蛋白表达阳性(7/8)，有4例hMLH1蛋白表达阳性(4/6)，原发生于淋巴结外有8例GTBP蛋白表达阳性(8/13)，有8例hMLH1蛋白表达阳性(8/9)，原发生于淋巴结内与淋巴结外的GTBP、hMLH1蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。高度恶性有8例GTBP蛋白表达(8/12)，有4例hMLH1蛋白表达阳性(4/6);低度恶性有7例GTBP蛋白表达阳性(7/9)，有8例hMLH1蛋白表达阳性(8/9)，GTBP蛋白在高度恶性与低度恶性表达之间差异无显著性(P>0.05);而hMLH1蛋白表达在低度恶性较高度恶性高，差异有显著性(P<0.05)。结论 hMLH1和GTBP错配修复基因蛋白表达与B细胞淋巴瘤组织学类型、肿瘤的发生部位可能无关系。hMLH1基因蛋白在B细胞淋巴瘤的发生中可能起一定的作用。
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关键词 B细胞淋巴瘤 错配修复基因 GTBP hMLH1 免疫组化
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2004)06-0481-04
The study of mismatch repair gene GTBP and
hMLH1proteins in B-cell lymphoma
Wei Zhonghua，Xie Yuping
The Affiliated Hospiatl of Zunyi Medical College，Guizhou563003.
【Abstract】 Objective To evaluate GTBP、hMLH1protein in the pathagenesis of the B-cell lymphoma.Methods Twenty-three cases with B-cell lymphoma were observed about the expression of GTBP and hMLH1proˉteins by the method of immunohistochemistry En Vinsion.Results In DLBCL，the positive cells for GTBP was found in7cases(7/11)，the positive signal for hMLH1was detected in3cases(3/6);the FLrevealed GTBP positive signal in3cases(3/5)and the hMLH1positive signal in4cases(4/4).Between the DLBCL and FL，no any significant difˉference was found in the GTBP and hMLH1expression(P>0.05).In the nodal cases，there were7cases showing GTBP positive tumor cells(7/8)and4cases expressing hMLH1positive cells(4/6).In the extra-nodal site，there were8cases for GTBP positive(8/13)and8cases for hMLH1positive(8/9).So，between the nodal and extra-nodal sites，there were also no any significant difference detected in the GTBP and hMLH1expression(P>0.05).In high grade group，we have found8cases were positive for GTBP(8/12)and4cases positive for hMLH1(4/6).In the low grade group，the GTPB positive cells could be seen in7cases(7/9)and hMLH1positive cells also be found in8cases(8/9).hMLH1has more expression frequence in the low grade group than that in thehigh grade group(P<0.05)，but GTBP was not.Conclusion There are no any relationshipes between the B-cell lymphoma histological catˉegories、the location of tumor and the GTBP/hMLH1expression in the tumor cells.So we consider that hMLH1plays an important role in the pathogenesis of B-cell lymphoma.
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Key words B cell lymphoma mismatch repair gene GTBP hMLH1 immunohistochemistry
错配修复(mismatch repair，MMR)是指细胞对复制错误进行的修复，是生物体维持自身遗传物质稳定性的重要机制。已被克隆的人类MMR基因共有6个，包括hMSH2、hMLH1、hPMS1、hPMS2、hMSH6(GTBP)、hMSH3。这些基因的缺陷可致复制后错配修复功能丧失，引起细胞的高自发突变率，最终导致整个基因组的不稳定性，产生突变体。其中最常见的突变体表型(mutatorphenotype)为微卫星不稳定性(Microsatellite Instability，MSI)。Boyer等报道证实错配修复基因缺陷和微卫星不稳定性改变，两者之间有着十分密切的关系。GTBP、hMLH1是已被克隆的人类MMR基因中的2个。GTBP蛋白染色定位在2p16，其功能是与hMSH2形成复合物，对应的同源物为MutS;hMLH1蛋白染色体定位在3p21.3-23，其功能是与错配点结合并修复，对应的同源物为MutL [1] 。由于DNA错配修复基因发生突变，对错配的修复功能降低，导致微卫星不稳定性，在恶性肿瘤发生过程中的作用受到关注，因此，直接检测肿瘤组织中MMR基因蛋白表达情况能更直观地反映基因的功能状况。目前国内有关MMR和MSI在各型淋巴瘤中的研究较为少见，MMR和MSI在淋巴瘤发病学中的意义和作用仍有待进一步探讨。本研究的目的在于通过免疫组化方法检测错配修复基因GTBP、hMLH1蛋白在B细胞淋巴瘤组织中的表达情况，以期为结合MSI进行综合分析，提供理论参考依据。
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1 资料与方法
1.1 一般资料 标本来自1998年1月～2003年11月遵义医学院附属医院病理科的B细胞淋巴瘤档案资料23例。男16例，女7例;年龄最大者69岁，最小8岁。平均年龄46.8岁。男∶女为2.3∶1。所有病例均根据2001年最新WHO分类，均经病理组织学及免疫组织化学检查确诊。其中DLBCL12例，MALT3例，FL5例，BCLL/SLL1例，B-LBL/ALL1例，B-PLL1例。23例B细胞淋巴瘤中发生于淋巴结9例，其中颈部淋巴结有6例。其次分别发生于腹股沟及肠系膜和大网膜淋巴结。原发于淋巴结外的分布较广，有14例，包括胃肠道、阴茎、右上肺叶肿块、脾、胰尾等。所有患者术前均未经过放射治疗或化学治疗。所有标本均经过10%的中性甲醛固定，常规石蜡包埋。根据WHO分类 [1] ，高度恶性组13例(DLBCL12例，B-LBL/ALL1例)。低度恶性组10例(FL5例，BELL/SLL1例，MALT3例，B-PLL1例)。
, 百拇医药 1.2 方法
1.2.1 试剂来源 一抗GTBP、hMLH1均购自美国Santa Cruz Biotechnology公司。En Vinsion复合物和DAB显色剂购于基因公司。
1.2.2 玻片处理 载玻片于10%重氯酸钾液中浸泡12h，盖玻片浸泡6h，自来水冲洗干净后蒸馏水浸泡，70℃烤箱中烘干，每张玻片上涂抹一层多聚赖氨酸防脱片剂，室温凉干备用。
1.2.3 化学处理 免疫组织化学进行En Vinsion法染色。
1.3 染色结果的判定 细胞核出现弥漫性棕黄色或棕褐色细颗粒状染色为阳性细胞，反之为阴性。阳性细胞≤25%标记为(+);阳性细胞25%～50%标记为(++)。阳性细胞>50%标记为(+++)。
1.4 统计学处理 实验数据严格按照统计学要求进行收集、整理，建立数据库。采用样本率的四格表Fisher确切概率法检验，P<0.05为对比组间的差异有显著性。
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2 结果
2.1 23例B细胞淋巴瘤组织中GTBP、hMLH1表达结果 见表1。
表1 B细胞淋巴瘤组织中GTBP、hMLH1表达结果
图1 DLBCL瘤细胞hMLH1 核阳性(ABC×200)
2.2 不同组织学类型B细胞淋巴瘤组织中GTBP、hMLH1蛋白的表达 见表2。
表2 不同组织类型GTBP、hMLH1表达
2.3 不同部位B细胞淋巴瘤组织中GTBP、hMLH1表达结果 见表3。
表3 不同部位GTBP、hMLH1表达
2.4 不同恶性程度B细胞淋巴瘤组织中GTBP、hMLH1表达结果 见表4。
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表4 不同恶性程度GTBP、hMLH1表达
注: ˇ 与低度恶性组比较P<0.05 高度恶性组13例，有8例GTBP蛋白表达(8/12)，4例hMLH1蛋白表达阳性(4/7)。低度恶性组10例，有7例GTBP蛋白表达阳性(7/9)，8例hMLH1蛋白表达阳性达(8/8)。GTBP蛋白表达在低度恶性组与高度恶性组中相比较差异无显著性，P>0.05，hMLH1蛋白表达在低度恶性组与高度恶性组中相比较差异有显著性，P<0.05。
3 讨论
正常情况下，DNA的双螺旋结构是靠A-T，G-C之间的氢键互补配对而维持的，当各种因素使DNA之间的碱基互补配对发生了错误，即形成了DNA的错配。为保证DNA复制的忠实性，维持基因组的稳定性，降低细胞的自发突变，需要对错配的碱基进行修复，即错配修复。发挥这种作用的基因即错配修复基因。当错配修复基因由于突变而不能发挥错配修复功能时，将会出现微卫星的不稳定性。到目前为止，已发现至少有6种错配修复基因与人类肿瘤的发生有关，即hMSH2、hMSH6(GTBP)、hMSH3、hMLH1、hPMS1、hPMS2。前3个与大肠杆菌MutS同源，后3个与MutL同源 [2] 。由于DNA复制、修复过程的复杂性，除了错配修复功能缺陷外，导致MSI还可能存在其它机制，特别是对于大多数非结直肠癌的肿瘤，其MSI的产生可能与错配修复功能无关。现有学者提出，广泛、重度的DNA损伤超过了DNA的修复功能时，也可能出现MSI，这就是所谓的过饱和机制，在这种机制下DNA的错配修复功能是完整的 [3] 。
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基因的突变将产生有缺陷的蛋白，从而不能发挥错配修复功能，导致微卫星DNA的不稳定性，增加整个基因组的不稳定性，从而引起包括癌基因及抑癌基因等一系列改变，当突变积累到一定程度，就会导致细胞的恶性转化，发生多种肿瘤。hMLH1、GTBP是MMR基因中的2个。hMLH1基因是研究较多的一种，1994年由Bronner等在研究遗传性非息肉形成性结、直肠癌的过程中发现，它定位于染色体的3p21.3-23，基因组DNA全长约58kb(不包括启动子)，含19个外显子，cDNA全长2484bp，编码长度为2268bp的开放阅读框架。hMLH1蛋白由756个氨基酸残基组成，与酵母的MLH1蛋白有41%的同源性。研究表明，hMLH1在多种组织中均有表达。约30%的遗传性非息肉性结直肠癌的发生与hMLH1基因的突变或缺失有关。其突变主要集中在15和16外显子，约占hMLH1突变的50%，分别为点突变和移码突变，70%的突变因形成终止密码导致翻译过早终止而产生不全的hMLH1蛋白。GTBP基因定位在2p16，其编码蛋白GTBP分子量为162kD。GTBP的功能结合到DNA链上含有G/T错配的部位，但是该功能的进行需要与hMSH2形成复合物才能完成。
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本研究发现，DLBCL中GTBP蛋白表达(7/11)和hMLH1蛋白表达(3/6)，与FL GTBP蛋白表达(3/5)，hMLH1蛋白表达(4/4)，相比较进行统计学处理，未发现有统计学差异。由此推测，hMLH1和GTBP错配修复基因蛋白表达与B细胞淋巴瘤组织学类型可能无关。其余MALT、BCLL/SLL、B-LBL/ALL以及B-PLL因例数太少，无法统计这几种组织学类型中GTBP和hMLH1表达的差异，在此不作讨论，有待增加病例数。B细胞淋巴瘤GTBP和hMLH1蛋白表达在结内和结外之间没有发现统计学差异，也由此推断MMR基因的表达与B细胞淋巴瘤发生的部位无关。有报道人群中hMLH1基因突变率平均为1:3139。也有研究结果显示，hMLH1蛋白在肺癌组织中表达阳性率为58.3%，推测hMLH1表达低者多处于临床晚期，预后较差 [4] 。另有研究表明，在卵巢上皮癌中，hMLH1的表达率为69.6%，有hMLH1基因表达的病例，肿瘤的恶性程度较低，预后较好 [5] 。还有研究显示，hMLH1在肝细胞癌中阳性表达高达80%～88%，认为hMLH1在肝细胞癌中的缺失是一种并非常见的分子现象 [6] 。有肝胎细胞中hMLH1表达较强 [7] 。本研究中hMLH1蛋白表达在低度恶性B细胞淋巴瘤中高于高度恶性B细胞淋巴瘤，和大部分研究结果一致，说明hMLH1蛋白表达低的淋巴瘤类型浸润性较强，预后较差。其原因可能是hMLH1蛋白不但参与了DNA的错配修复，同时可能参与了肿瘤的分化过程。
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GTBP蛋白表达在B细胞淋巴瘤中高度恶性与低度恶性相比较，无统计学差异。结合GTBP的功能作用，推测GTBP在淋巴瘤的发生学上有重要作用，但没有参与肿瘤细胞的分化过程。以上结果非常有趣，可以作为蛋白表达水平的研究资料提供给MSI分析者和同一课题组中癌基因和抑癌基因的研究者，以从分子水平更深入地探讨恶性淋巴瘤的发生学机制。
国内已在多种疾病方面展开关于MSI的研究 [8，9] ，但关于恶性淋巴瘤MSI的资料不多。MSI的研究主要集中在人的FAP及HNPCC。国外虽然在某些恶性淋巴瘤类型中作过MSI的研究 [10～12] ，但恶性淋巴瘤的分类复杂，特别是在中国，其发病情况和欧美等国家有较大差异，有关各种类型淋巴瘤染色体异常，分子遗传学等方面的资料较少。通过对B细胞淋巴瘤MSI中的2个基因即GTBP、hMLH1蛋白进行检测，相信可以为全面认识B细胞淋巴瘤的MSI提供一定的线索。
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作者单位:563003贵州遵义医学院附属医院病理科
(收稿日期:2004-03-12)
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