鲎试剂检测细菌内毒素的体会
【文献标识码】 B 【文章编号】 1680-6115(2004)06-0557-01
细菌内毒素是微生物的一种代谢产物，能引起恒温动物和人体体温异常升高，其中革兰阴性杆菌所产生的内毒素致热活性最强，很少剂量即能引起广泛的生物效应及病理作用，严重时甚至危及生命。因此，加强其检测便成为输液制剂、市售输液药品、一次性注射器等面临的重要课题，现将体会介绍如下。
1 检测方法
一般最常用的是家兔发热试验法(RT)与鲎试验法(LT)。RT为一种定性检测内毒素的方法，应用历史悠久，有很多限制，如家兔对内毒素反应上有个体差异，敏感度不高、耗时、不能定量检测等。LT具有快速、简便、敏感度高、假阳性少、试剂耗费少等优良，可广泛应用于注射剂的热原控制，组液法对非内毒素引起的热原则不敏感。
2 影响因素
, 百拇医药
2.1 试剂灵敏度 由于鲎试剂灵敏度以能与之产生阳性反应的内毒素的最低限度表示，灵敏度变化将使测定结果所反应的样品中内毒素允许限度发生变化，所以应进行灵敏度标化，特别是更换鲎试剂批号时，因为在LT操作过程中，各个实验室条件之间必定有差异，标化时，应使用同一批号鲎试剂稀释液，不宜用灭菌水取代。鲎试剂存放一定时间后(如半年)，灵敏度有可能发生变化，也应进行标化。文献中曾有报道，因鲎试剂灵敏度实测值与标化值差异过大而引起同批检测样品截然相反的实验结果。鲎试剂超过有效期，须进行灵敏度考核，对于0.5ml/支，如阳性管成立，证明其活性仍可使用，对于0.1ml/支即使阳性管能成立，也不能使用，因为它是在不同安瓿中作对照。
2.2 干扰试验 是杜绝出现假阴性结果的有效且可行的措施。所有法定的药物或样品检测均需在未稀释或适当稀释后测定，稀释倍数不能超过最大有效稀释后测定，稀释倍数不能超过最大有效稀释倍数，否则其中的内毒素经稀释后浓度过低而不被鲎试验法检测出。若供试品有干扰现象(抑制或增强)，经处理，仍未达到试验要求的条件，则应服从家兔法，此时家兔法仍是检测其中内毒素限量的适宜方法。另外，为提高鲎试验法的准确性我们认为有无干扰物质存在，均应同时做干扰试验，以排除环境、操作、试剂、药物等方面可能存在干扰鲎凝胶形成的因素，避免出现假结果，确保实验可靠性。
, 百拇医药
2.3 反应灵敏度 酸碱度是影响鲎试验法反应灵敏度的一个重要因素，笔者根据多年的工作经验，认为在进行鲎试验法前，预先测定一下pH值，然后调至5.0～6.0为宜，另外，温度在整个实验过程中也应恒定，否则检测的灵敏度将显著下降，甚至反应被抑制，文献中曾有多次报道。
2.4 操作 加样结束，应即放入恒温水浴锅中，因液态鲎试剂极不稳定，室温放置时间过长会影响反应灵敏度，同时，供试品在恒温水浴中应避免振动，在反应尚未完成时不应取出试管，因为尚未完全形成的凝胶被破坏后不能被还原，容易出现假阴性。
3 结果判断
鲎试验法由于是以细菌内毒素激活其中凝集因子和凝聚酶，在试管中形成凝胶的一系列生化反应替代不了哺乳动物自身热反应的整个生理过程，因此，在中国药典2000版中检测方法由单一的凝胶法增加了定量检测法，所以当用鲎试验法测得结果为阴性时，可不再用家兔法作热原试验，组结果可疑时，须按规定重做一遍或用家兔法来复检。
作者单位:235000安徽金蟾药业集团有限公司
(收稿日期:2004-02-21)
(编辑李 木), http://www.100md.com
细菌内毒素是微生物的一种代谢产物，能引起恒温动物和人体体温异常升高，其中革兰阴性杆菌所产生的内毒素致热活性最强，很少剂量即能引起广泛的生物效应及病理作用，严重时甚至危及生命。因此，加强其检测便成为输液制剂、市售输液药品、一次性注射器等面临的重要课题，现将体会介绍如下。
1 检测方法
一般最常用的是家兔发热试验法(RT)与鲎试验法(LT)。RT为一种定性检测内毒素的方法，应用历史悠久，有很多限制，如家兔对内毒素反应上有个体差异，敏感度不高、耗时、不能定量检测等。LT具有快速、简便、敏感度高、假阳性少、试剂耗费少等优良，可广泛应用于注射剂的热原控制，组液法对非内毒素引起的热原则不敏感。
2 影响因素
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2.1 试剂灵敏度 由于鲎试剂灵敏度以能与之产生阳性反应的内毒素的最低限度表示，灵敏度变化将使测定结果所反应的样品中内毒素允许限度发生变化，所以应进行灵敏度标化，特别是更换鲎试剂批号时，因为在LT操作过程中，各个实验室条件之间必定有差异，标化时，应使用同一批号鲎试剂稀释液，不宜用灭菌水取代。鲎试剂存放一定时间后(如半年)，灵敏度有可能发生变化，也应进行标化。文献中曾有报道，因鲎试剂灵敏度实测值与标化值差异过大而引起同批检测样品截然相反的实验结果。鲎试剂超过有效期，须进行灵敏度考核，对于0.5ml/支，如阳性管成立，证明其活性仍可使用，对于0.1ml/支即使阳性管能成立，也不能使用，因为它是在不同安瓿中作对照。
2.2 干扰试验 是杜绝出现假阴性结果的有效且可行的措施。所有法定的药物或样品检测均需在未稀释或适当稀释后测定，稀释倍数不能超过最大有效稀释后测定，稀释倍数不能超过最大有效稀释倍数，否则其中的内毒素经稀释后浓度过低而不被鲎试验法检测出。若供试品有干扰现象(抑制或增强)，经处理，仍未达到试验要求的条件，则应服从家兔法，此时家兔法仍是检测其中内毒素限量的适宜方法。另外，为提高鲎试验法的准确性我们认为有无干扰物质存在，均应同时做干扰试验，以排除环境、操作、试剂、药物等方面可能存在干扰鲎凝胶形成的因素，避免出现假结果，确保实验可靠性。
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2.3 反应灵敏度 酸碱度是影响鲎试验法反应灵敏度的一个重要因素，笔者根据多年的工作经验，认为在进行鲎试验法前，预先测定一下pH值，然后调至5.0～6.0为宜，另外，温度在整个实验过程中也应恒定，否则检测的灵敏度将显著下降，甚至反应被抑制，文献中曾有多次报道。
2.4 操作 加样结束，应即放入恒温水浴锅中，因液态鲎试剂极不稳定，室温放置时间过长会影响反应灵敏度，同时，供试品在恒温水浴中应避免振动，在反应尚未完成时不应取出试管，因为尚未完全形成的凝胶被破坏后不能被还原，容易出现假阴性。
3 结果判断
鲎试验法由于是以细菌内毒素激活其中凝集因子和凝聚酶，在试管中形成凝胶的一系列生化反应替代不了哺乳动物自身热反应的整个生理过程，因此，在中国药典2000版中检测方法由单一的凝胶法增加了定量检测法，所以当用鲎试验法测得结果为阴性时，可不再用家兔法作热原试验，组结果可疑时，须按规定重做一遍或用家兔法来复检。
作者单位:235000安徽金蟾药业集团有限公司
(收稿日期:2004-02-21)
(编辑李 木), http://www.100md.com