杨连粤 杨建青 2004-8-1 16:19:37 中华肝胆外科杂志1999年第5卷第1期

    随着DNA重组技术和转基因方法的不断完善，基因治疗研究发展迅猛，并在某些疾病的治疗中取得了令人鼓舞的疗效。肝脏是人体重要的代谢器官，与人类许多遗传性、代谢性、感染性疾病及肿瘤密切相关。而且肝脏体积大，能分泌大量蛋白入血和完成某些特定基因产物活性所必需的翻译后修饰。因此，以肝脏为直接靶器官或作为生物效应靶器官的基因治疗更是倍受关注，一直是临床基因治疗研究领域的一大热点。肝脏基因治疗方法在有些疾病如家族性高胆固醇血症、血友病等的治疗中已取得了肯定的疗效〔1，2〕。尽管如此，但现今仍有很多限制其应用的因素。其中最主要的就是目前缺乏能使目的基因表达只局限在肝脏的转基因方法和途径。而且这又恰是肝脏基因治疗有效和安全的保障。因此，肝脏靶向性转基因近年来越来越受到研究者们的重视，并开展了大量的工作。本文现就这一方面研究所取得的进展及存在的问题作一扼要综述。

    一、受体介导的肝脏靶向性转基因

    肝细胞表面有很丰富的蛋白受体，将目的DNA和其相应的配体构成复合物，借助受体与配体特异性结合介导的细胞内吞能使DNA有效地导入肝细胞。目前常用的蛋白配体有去唾液酸糖蛋白、转铁蛋白和单克隆抗体等。这些配体需进行修饰如和多聚赖氨酸结合使其带上正电荷，才能和带负电荷的DNA组成紧密的复合物。很多体内外实验证明利用该复合物确能有效实施靶向性转基因。Wanger等〔3〕依据这一原理构建了一个由转铁蛋白、多聚阳离子(多聚赖氨酸和鱼精蛋白)及含有荧光素酶基因的质粒DNA组成的复合物，将该复合物和处于分化状态的鸡成红细胞一起孵育，过后对其提取液进行检测，发现有很高的荧光素酶基因表达。Wu等〔4〕用去唾液酸糖蛋白、多聚赖氨酸和包含人血清白蛋白结构基因(由鼠白蛋白启动子原件调控)的质粒DNA组成复合物，并将该复合物经尾静脉注入一组先天性缺乏白蛋白的鼠体内，15分钟后切除鼠66%肝脏以刺激肝细胞复制再生。实验结果表明，复合物注射后24小时内血清中测不到人白蛋白，但过后其浓度逐渐增加，48小时其水平为0.05μg/ml，二周时浓度达到最大值34μg/ml，这一水平一直稳定维持到第四周。但现今仍存在某些制约其发展的问题，包括由于复合物体积大而限制了外源DNA的长度 ......