肺癌组织中P 170 、P 190 、T O P O Ⅱ、GSTπ的表达及意义
【摘要】 目的 探讨肺癌组织中P 170 、P 190 、ToPoⅡ、GSTπ的表达及意义。方法 应用免疫组化检测P 170 、P 190 、ToPoⅡ、GSTπ在112例肺癌组织中的表达，采用卡方统计学处理。结果 112例中P 170 、P 190 、ToPoⅡ、GSTπ的阳性率分别为30.36%、71.42%、38.39%、45.53%，其中P 170 在不同病理类型中的表达差异有显著性，在鳞癌中，P 170 与P 190 、ToPoⅡ、GSTπ的表达差异有显著性。结论 P 170 、P 190 、ToPoⅡ、GSTπ等多因素联合作用是肺癌多药耐药性的主要作用机制。
关键词 肺癌 多药耐药性 免疫组化
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)14-2108-02
Expression and significance of P 170 ，P 190 ，
, http://www.100md.com
ToPoⅡ，GSTπin lung cancers
Chen Hao，Jiang Qin，Zhang Lianyun，et al.
Department of Pathology，the First Hospital of Lianyungang，Jiangsu222002.
【Abstract】 Objective To study the expression and significance of P 170 ，P 190 ，ToPoⅡand GSTπin lung canˉcers.Methods Expression of P 170 ，P 190 ，ToPoⅡand GSTπwere detected in112cases of lung cancers by immunohisˉtochemicalstaining andχ 2 statistics was used.Results The positive rates of P 170 ，P 190 ，ToPoⅡand GSTπwere30.36%，71.24%，38.39%and45.53%in112cases of lung cancers，and the expression of P 170 were greatly difference between the different pathological types of lung cancers.In the squamous cell carcinoma，the expressionof P 170 were greatly different from that of P 190 ，ToPoⅡand GSTπ.Conclusion Co-expression of P 170 ，P 190 ，ToPoⅡand GSTπmay be the chief mechanism of multi-drug resistance(MDR)in lung cancers.
, http://www.100md.com
Key words lung cancers MDR immunohistochemistry
肿瘤耐药是肿瘤化疗失败的主要原因 [1] ，也是导致肿瘤术后复发、转移、死亡的一个间接因素。肺癌的发病率呈逐年增长的趋势，其恶性程度较高，化疗通常不敏感，预后差，多药耐药性(multi-drug resistance，MDR)可能是其重要原因之一。研究表明，P-糖蛋白(P-gp)、拓扑异构酶(ToPoⅡ)、谷胱甘肽-S-转移酶(GSTπ)等多种细胞内物质是恶性肿瘤产生MDR的物质基础 [2～4] 。本文采用免疫组化检测112例肺癌细胞P 170 、P 190 、ToPoⅡ、GSTπ的表达，以期探讨其意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 取112例TNM分期法Ⅲ～Ⅳ期的肺癌组织标本，其中鳞癌53例，腺癌34例，小细胞未分化癌10例，肺泡细胞癌9例，混合癌6例。男82例，女30例，年龄 32～73岁，中位年龄56岁。35例为3周期化疗失败患者，85例为初治患者。
, http://www.100md.com
1.2 免疫组化方法 112例肺癌标本均经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，5μm石蜡切片，行SP免疫组化染色，鼠抗人P-gp、ToPoⅡ、GSTπ单克隆抗体由美国Maxim公司提供。SP试剂盒由福州迈新公司提供。具体步骤参照试剂盒说明进行。用PBS代替一抗体作阴性对照。
1.3 结果评价标准 光镜下以细胞膜、质或核中存在粗细一致的棕黄色颗粒为阳性，阳性细胞数占全部细胞数的百分比>25%为阳性染色，反之为阴性。
1.4 统计学方法 采用χ 2 检验。
2 结果
耐药基因在肺癌组织中的阳性表达率见表1。
表1 耐药基因在肺癌组织中的阳性表达率
不同病理类型的耐药基因的表达特征不同，P 170 在不同病理类型中的表达经统计学处理，P0.05，差异无显著性。每一种药理类型中相同耐药基因的表达各不相同。
, 百拇医药
3 讨论
MDR是指抗某种细胞毒物的耐药细胞系对许多结构上无关的和作用机制不同的其它抗癌药物产生交叉抗药性。被认为是多种肿瘤化疗失败的主要原因 [1] 。在MDR细胞膜上有一种分子量为170的膜糖蛋白，并称之为P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)，也称为P 170 。P-pg是mdr l基因编码的一种能量依赖性转运蛋白。研究表明，P-gp在肾、肾上腺和胎盘等正常组织中高表达，在脑、肺、肝、脾及结肠等中度表达，并主要定位于一些具有分泌排泄功能的细胞，故认为在正常组织，P-gp起着对毒性化合物的清除作用 [5] 。该蛋白的表达水平与细胞膜的通透性、细胞内药物浓度以及细胞耐药程度有关。在本文病例中，P-gp在不同病理类型中的表达经统计学处理差异有显著性，平均阳性率30.36%。Beer [6] 等认为MDR在肺癌中属低表达肿瘤，阳性率34.60%，这与本文结果基本相同。
多药耐药相关蛋白是非P-糖蛋白介导的另一种MDR，其分子量为190kD，也称P 190 ，它的功能与P-gp一样主要为药泵作用。大多数抗癌药物容易诱导非P-gp介导的MDR(即P 190 表达)。本文中P 190 在不同病理类型中表现出较高的阳性率，在鳞癌中阳性率最高，达81.13%，平均为71.42%，表达在肺癌中P 190 起着比P 170 更为广泛的作用。
, 百拇医药
拓扑异构酶(Topoisomerase，ToPo)是催化DNA拓扑结构改变的酶系，分为Ⅰ型和Ⅱ型，主要存在于细胞周期的S至M期，在细胞内参与DNA的空间构型变化、复制、转录、有丝分裂、染色体分离和DNA修复等过程。ToPo已成为许多抗癌药物的重要靶点。细胞内ToPoⅡ水平直接影响ToPoⅡ抑制剂的抗肿瘤活性，ToPoⅡ表达水平越高，对抗癌药物敏感性越高。ToPoⅡ含量和活性的降低可导致肿瘤细胞的耐药产生。本文病例中，ToPoⅡ呈现较低的阳性率，提示肿 瘤MDR的产生与其不表达有关。
GST是机体中催化谷胱甘肽(glutathione，GSH)与亲电子物质发生结合的一类酶系，具有多种生物学功能，包括转运亲脂性化合物、清除细胞毒性产物、细胞间粘接等。GST可通过催化GST与亲电子物质结合，最终将毒性物质从尿液中排出或代谢为无毒性的醇类物质 [3]，其中GSTπ与恶性肿瘤关系最密切。在结肠癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌等恶性肿瘤中GSTπ均增高，而在肝癌、肾癌、前列腺癌的表达极低或不表达。在肺癌中，本文112例的阳性率为45.53%，说明GSTπ在肺癌MDR中起着一定的作用。
肿瘤细胞产生耐药性是多种耐药机制共同作用的结果，肺癌的MDR机制较为复杂。本研究中，只在鳞癌中，P 170 与P 190 、ToPoⅡ、GSTπ的阳性率经统计学处理差异有显著性，其它癌组织相互间耐药基因的表达无差异。说明肺癌的耐药机制有多方面的因素。肺癌的预后较差，普通化疗对提高生存率无明显效果。因此，对肺癌进行不同耐药基因的检测，可以深入了解肿瘤细胞对化疗药物产生的耐药机制，增加对抗癌药物药理的认识，增强对该类病人个体化化疗意识，改进和优化化疗方案，旨在延长病人的无瘤存活期和提高生存率。, 百拇医药
关键词 肺癌 多药耐药性 免疫组化
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)14-2108-02
Expression and significance of P 170 ，P 190 ，
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ToPoⅡ，GSTπin lung cancers
Chen Hao，Jiang Qin，Zhang Lianyun，et al.
Department of Pathology，the First Hospital of Lianyungang，Jiangsu222002.
【Abstract】 Objective To study the expression and significance of P 170 ，P 190 ，ToPoⅡand GSTπin lung canˉcers.Methods Expression of P 170 ，P 190 ，ToPoⅡand GSTπwere detected in112cases of lung cancers by immunohisˉtochemicalstaining andχ 2 statistics was used.Results The positive rates of P 170 ，P 190 ，ToPoⅡand GSTπwere30.36%，71.24%，38.39%and45.53%in112cases of lung cancers，and the expression of P 170 were greatly difference between the different pathological types of lung cancers.In the squamous cell carcinoma，the expressionof P 170 were greatly different from that of P 190 ，ToPoⅡand GSTπ.Conclusion Co-expression of P 170 ，P 190 ，ToPoⅡand GSTπmay be the chief mechanism of multi-drug resistance(MDR)in lung cancers.
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Key words lung cancers MDR immunohistochemistry
肿瘤耐药是肿瘤化疗失败的主要原因 [1] ，也是导致肿瘤术后复发、转移、死亡的一个间接因素。肺癌的发病率呈逐年增长的趋势，其恶性程度较高，化疗通常不敏感，预后差，多药耐药性(multi-drug resistance，MDR)可能是其重要原因之一。研究表明，P-糖蛋白(P-gp)、拓扑异构酶(ToPoⅡ)、谷胱甘肽-S-转移酶(GSTπ)等多种细胞内物质是恶性肿瘤产生MDR的物质基础 [2～4] 。本文采用免疫组化检测112例肺癌细胞P 170 、P 190 、ToPoⅡ、GSTπ的表达，以期探讨其意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 取112例TNM分期法Ⅲ～Ⅳ期的肺癌组织标本，其中鳞癌53例，腺癌34例，小细胞未分化癌10例，肺泡细胞癌9例，混合癌6例。男82例，女30例，年龄 32～73岁，中位年龄56岁。35例为3周期化疗失败患者，85例为初治患者。
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1.2 免疫组化方法 112例肺癌标本均经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，5μm石蜡切片，行SP免疫组化染色，鼠抗人P-gp、ToPoⅡ、GSTπ单克隆抗体由美国Maxim公司提供。SP试剂盒由福州迈新公司提供。具体步骤参照试剂盒说明进行。用PBS代替一抗体作阴性对照。
1.3 结果评价标准 光镜下以细胞膜、质或核中存在粗细一致的棕黄色颗粒为阳性，阳性细胞数占全部细胞数的百分比>25%为阳性染色，反之为阴性。
1.4 统计学方法 采用χ 2 检验。
2 结果
耐药基因在肺癌组织中的阳性表达率见表1。
表1 耐药基因在肺癌组织中的阳性表达率
不同病理类型的耐药基因的表达特征不同，P 170 在不同病理类型中的表达经统计学处理，P0.05，差异无显著性。每一种药理类型中相同耐药基因的表达各不相同。
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3 讨论
MDR是指抗某种细胞毒物的耐药细胞系对许多结构上无关的和作用机制不同的其它抗癌药物产生交叉抗药性。被认为是多种肿瘤化疗失败的主要原因 [1] 。在MDR细胞膜上有一种分子量为170的膜糖蛋白，并称之为P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)，也称为P 170 。P-pg是mdr l基因编码的一种能量依赖性转运蛋白。研究表明，P-gp在肾、肾上腺和胎盘等正常组织中高表达，在脑、肺、肝、脾及结肠等中度表达，并主要定位于一些具有分泌排泄功能的细胞，故认为在正常组织，P-gp起着对毒性化合物的清除作用 [5] 。该蛋白的表达水平与细胞膜的通透性、细胞内药物浓度以及细胞耐药程度有关。在本文病例中，P-gp在不同病理类型中的表达经统计学处理差异有显著性，平均阳性率30.36%。Beer [6] 等认为MDR在肺癌中属低表达肿瘤，阳性率34.60%，这与本文结果基本相同。
多药耐药相关蛋白是非P-糖蛋白介导的另一种MDR，其分子量为190kD，也称P 190 ，它的功能与P-gp一样主要为药泵作用。大多数抗癌药物容易诱导非P-gp介导的MDR(即P 190 表达)。本文中P 190 在不同病理类型中表现出较高的阳性率，在鳞癌中阳性率最高，达81.13%，平均为71.42%，表达在肺癌中P 190 起着比P 170 更为广泛的作用。
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拓扑异构酶(Topoisomerase，ToPo)是催化DNA拓扑结构改变的酶系，分为Ⅰ型和Ⅱ型，主要存在于细胞周期的S至M期，在细胞内参与DNA的空间构型变化、复制、转录、有丝分裂、染色体分离和DNA修复等过程。ToPo已成为许多抗癌药物的重要靶点。细胞内ToPoⅡ水平直接影响ToPoⅡ抑制剂的抗肿瘤活性，ToPoⅡ表达水平越高，对抗癌药物敏感性越高。ToPoⅡ含量和活性的降低可导致肿瘤细胞的耐药产生。本文病例中，ToPoⅡ呈现较低的阳性率，提示肿 瘤MDR的产生与其不表达有关。
GST是机体中催化谷胱甘肽(glutathione，GSH)与亲电子物质发生结合的一类酶系，具有多种生物学功能，包括转运亲脂性化合物、清除细胞毒性产物、细胞间粘接等。GST可通过催化GST与亲电子物质结合，最终将毒性物质从尿液中排出或代谢为无毒性的醇类物质 [3]，其中GSTπ与恶性肿瘤关系最密切。在结肠癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌等恶性肿瘤中GSTπ均增高，而在肝癌、肾癌、前列腺癌的表达极低或不表达。在肺癌中，本文112例的阳性率为45.53%，说明GSTπ在肺癌MDR中起着一定的作用。
肿瘤细胞产生耐药性是多种耐药机制共同作用的结果，肺癌的MDR机制较为复杂。本研究中，只在鳞癌中，P 170 与P 190 、ToPoⅡ、GSTπ的阳性率经统计学处理差异有显著性，其它癌组织相互间耐药基因的表达无差异。说明肺癌的耐药机制有多方面的因素。肺癌的预后较差，普通化疗对提高生存率无明显效果。因此，对肺癌进行不同耐药基因的检测，可以深入了解肿瘤细胞对化疗药物产生的耐药机制，增加对抗癌药物药理的认识，增强对该类病人个体化化疗意识，改进和优化化疗方案，旨在延长病人的无瘤存活期和提高生存率。, 百拇医药