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编号:10464722
中药白鲜皮提取工艺研究
http://www.100md.com 2004年9月12日 成都中医药大学
     成都中医药大学药学院中药93级 杨文宇

    (指导老师 张 艺)

    提 要:

    按临床经验并参考文献方法,根据制剂实际需要,以不同浓度乙醇为溶媒,用均匀设计法,并以抗炎实验验证,得到白鲜皮提取的优化方案:用95%乙醇回流1h。

    关键词

    :白鲜皮 提取工艺 均匀设计法 抗炎实验

    白鲜皮为中医治疗皮肤病的常用中药,具清热燥湿、祛风解毒功效,常用于治疗湿热疮毒、黄水淋漓、湿疹、疥癣、风湿热痹、黄疸尿赤等证。〔1〕药理实验证明其有抗菌、〔2、3〕解热、〔4〕抗肿瘤、〔5〕抗炎及免疫抑制〔6〕等作用;近年用于治疗鼠痿、慢性气管炎、皮肤化脓性溃疡、肿瘤等。〔7〕白鲜皮的化学成分主要有白鲜碱(dictamnine)、白鲜内酯(dictamndactone)、白鲜脑交酯(dictamndide)、稧酮(fraxinekkone)、黄柏酮(obacunone)等,其中白鲜碱、稧酮、黄柏酮三种成分的药理作用可基本代表白鲜皮及其在复方中的作用。〔8〕这三种成分中白鲜碱的含量最高,药理作用已研究得较多,因此,研究白鲜皮的提取,主要以白鲜碱为指标。文献〔8〕认为以甲醇回流60min提出白鲜碱最多,但甲醇提取不适合大量制剂的需要;临床经验以低度酒提取即获良效,由此启示:适当浓度的乙醇可获得最佳提取效果。 1 实验材料与仪器 11 药材:芸香科白鲜Dictamus dasycarpus Turcz的干燥根皮。 12 试剂:甲醇(成都化学试剂厂,A.P.),无水乙醇(安徽特级酒精总厂,A.P.),二甲苯(成都化学试剂厂,C.P.),氯化钠(成都化学试剂厂,A.P.),水为蒸馏水。 13 仪器:岛津LC6A高效液相色谱仪,SPD6AV紫外检测器,CR3A数据处理机。 14 色谱条件:色谱柱:大连Spherisorb C18(150×4mm,5μm);流动相:甲醇一水(58:42);检测波长:220nm;流速:1.0mk/min;柱温:40℃,量程:0.04aufs。 15 昆明种健康小鼠(18~22g),成都中医药大学实验动物中心提供。 2 实验方法 21 均匀设计法本方案以不同浓度乙醇为溶媒,考虑提取时间,粉碎度等因素,设定5个水平,按U5(54)设计(表1)。按上表方案,各水平称样量10g,以50mk溶媒回流提取,各回流液离心后以原溶媒定容为100mk,以HPLC法测定白鲜碱峰面积,进样量10μk,峰面积(平均值)如表1所示。按表1中数据进行多元逐步回归,〔9〕得Y=811885+4.28885E6X144821.3X268224.5X3,r=0.995087。Tab·1 pkan of abstracting dictamnine concentration(%)time(min)shatterity area of d:c.1954020apertures1699223275900(pieces)1045893552040apertures889924356010apertures5889651012060apertures8585 式中,Y为白鲜碱峰面积,X1为乙醇浓度,X2为提取时间,X3为粉碎度。方程显示:仅乙醇浓度与白鲜碱的提出为正相关,提取时间特别是粉碎度为次要因素。由此可知,水平1为较优方案。文献〔8〕甲醇回流以60min为最佳,时间过长易致白鲜碱的损失,过短则提取效率低。按水平1,分别回流40min和60min进行测定,结果表明以60min为好(峰面积约为40min提取面积的15倍)。粉碎度为最次要因素,因而可据实际操作而定。据上,均匀设计法所得到的优化方案为:以95%乙醇为溶媒,回流1h,药材不粉碎或适当粉碎即可。 22 抗炎实验对均匀设计法的验证和补充临床上白鲜皮多用于皮肤炎症,王蓉等证明白鲜皮确有抗炎作用,〔6〕因而做抗炎实验可以表明均匀设计法的优化方案的药理意义及对比其与低度酒(本实验以10%乙醇模拟)提取法在药效学上的差异。样品液制备:称取样品10克/份,各以95%和10%乙醇回流1h,回收乙醇至无醇味,离心,取上清液加蒸馏水定容为10mk,供试。取小鼠30只称重分为3组,每组10只,分别以生理盐水、95%EtOH提取物、10%EtOH提取物灌胃5天(每天2次,每次0.3mk/10g)。末次灌胃时每只小鼠右耳涂等量二甲苯使致肿胀,30min后处死小鼠,用打孔器取耳,称重,计算各鼠左右耳差值(表2)。 Tab·2 Difference between rats’ right and keft ear(X±SD) groupdifference(mg)P(probabikity)NS0.021±0.005/10%sampke0.020±0.003>00595%sampke0.015±0.007<0.05 由此可知:95%EtOH提取物的抗炎活性显著高于10%EtOH提取物。 3 实验结果与讨论 31 结论:均匀设计法与药效学试验的一致性证明:以95%EtOH回流1h为白鲜皮制剂的切合实际的优化方案。本实验虽未对比较本方案与甲醇回流1h提取效率的高低,但从实验数据上可预料二者间不会显著性差异。 32 白鲜碱色谱峰的确定中国药品生物制品检定所尚未能提供白鲜碱的标准品,本实验按文献〔8〕确定白鲜碱峰(保留时间的不同是因为色谱柱及柱温等的差异),如Fig1,Fig2所示。 33 研究思路探讨白鲜碱是白鲜皮最重要的一种成分,故常作为白鲜皮定性或定量的指标。但中药的特点是多种成分共同起作用,各种成Packing:Spherisob C18,5micronCokumn:150mm×4mmMobike phase:58%Methyk akcohok 42%WaterFkow:1.0mk/minPressure:1300psiTemperature:40℃Detector:UV at 220nm,0.04AUFSHPLC 1Fig.1 Experimentak chromatography Packing:Uitrashpere ODS,5micronCokumn:250mm×4mmMobike phase:58%Methyk akcohok 42%WaterFkow:1.0mk/minPressure:Temperature:18±2℃Detector:UV at 220nm,0.01AUFSHPLC 2Fig.2 Documentary chromatography 分可能相互影响或相互协同,因而一个成分并不能完全说明该中药的效应。在这个前提下,本实验均匀设计法只检测了白鲜碱一个成分,这对说明其他活性成分的溶出与否是有限的。因而选择了95%EtOH和10%EtOH这两个极端浓度的提取物进行了药效学考察,结果令人满意。由此可知,结合药理或临床进行中药的化学研究,是研究中药的一条捷径。 参考文献1 江苏新医学院中药大辞典上海:上海人民出版社,1973;7382 康胜利沈阳药学院学报,1983;18(6):113 曹仁烈中华皮肤科杂志,1957;(4):2864 近藤东一郎日本药物学杂志,1928;(7):2965 刘今方,等中西医结合杂志,1990, http://www.100md.com