王永刚 辛绍杰 王宇明 中华实验和临床病毒学杂志 2000年第4期第14卷

    丙型病毒性肝炎(丙肝)是一种广泛传播的疾病，是导致慢性病毒性肝炎、肝炎肝硬变、肝细胞癌(HCC)的主要病因之一，而这些病变形成与其病原丙型肝炎病毒(HCV)某些重要的生物学特性有关〔1〕。与其他RNA病毒类似，HCV基因组的易变异性可产生不同的型或亚型，而且在HCV感染者体内可同时存在具有多种序列组成不同但却有很高同源性(同源性≥95%)的HCV变异株病毒群体，即称为HCV准种(Quasispecies)，亦有相似株和类似株之称〔2,3〕。近年来研究表明，HCV准种株决定其某些重要的生物学特性，而且大部分学者己惯用“准种”来监测和量化HCV在患者体内的复制及变异。现就有关研究作一概述。

    1 HCV准种株特性

    1971年Eigen等〔4〕在描述地球早期生命演化时，启用了“准种株”这一概念。以后人们在分析噬菌体Qβ群中单个病毒克隆的RNA时发现“准种株”的确存在，并将其引入了病毒的研究，以求循一个新途径来解释和说明病毒的高度变异性问题〔5〕。HCV属于单股正连RNA病毒，其基因组包膜糖蛋白区E2/NS1基因组C端相对保守，N端含有两个高变区域(Hypervariable region，HVR)即HVR1(384～410/413 aa)和HVR2(474～480 aa)。研究发现HVR1含有病毒株特异的中和性抗原表位，它的变异与丙肝慢性化及防治失败密切相关〔6〕。HCV感染者体内可同时存在大量基因序列相关的HCV准种株群体，而且会随病情和/或病程不同而发生变化〔7，8〕。这种序列异质性变异株可发生在HCV基因组的各区段，包括5′-非编码区(5′-UTR)、核心区(C区)、包膜区(E区)及非结构蛋白区(NS区)等均有报道〔9-11〕。最近，Gerotto等〔12〕报道了HCV-NS5A干扰素敏感决定区(IFN Sensitivity-determing region，ISDR)准种特性，认为其会影响到HCV 1b型感染者对IFN治疗的应答。但有研究证实约20%序列变异发生在E2/NS1区，HCV准种株特性在HVR1表现较明显而更具有代表性〔11，13，14〕。

    2 HCV准种株的量化

    随着分子生物学技术的广泛应用，目前主要以准种HCV基因的复杂性(Complexity)或异质性(Heterogeneity)程度来对其进行量化，主要有以下几种方法:①直接测序法〔15〕。针对特定区段RNA序列进行体外逆转录扩增(RT-PCR)得到相应的cDNA ......