尿路上皮肿瘤p53基因突变和蛋白定量表达的研究
作者：余明年 涂响安 赵志毅 黄春南 谢佛龙 李全贞 左连富
单位：余明年 涂响安 赵志毅 黄春南 谢佛龙 广东省肇庆市第一人民医院泌尿外科(肇庆,526021)；李全贞 中山医科大学达安基因诊断中心；左连富 河北省肿瘤研究所
关键词：尿路上皮肿瘤；基因；聚合酶链式反应；流式细胞术
癌症99zk46
中图号：R737.1文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)s0-0108-01
应用聚合酶链式反应加单链多态性分析(PCR-SSCP)及流式细胞术和细胞免疫荧光技术检测52例尿路上皮肿瘤p53基因突变和p53蛋白定量表达和DNA倍体变化，并探讨与其生物学行为关系。
, http://www.100md.com
1材料与方法
1.1材料来源
采用随访资料齐备的尿路上皮肿瘤石蜡组织52例，正常泌尿系粘膜5例为对照。本组肾盂癌∶输尿管癌∶膀胱癌5∶1∶46。G1∶G2∶G3为18∶20∶14，T1∶T2∶T3～T4为11∶22∶19。
1.2聚合酶链式反应加单链多态性分析
DNA提取采用Coater等〔1〕介绍的简捷方法。基因外显子5、6、7、8等引物由中山医科大学达安基因诊断中心合成。
1.3流式细胞术和细胞免疫荧光技术
DNA样品制备参照左连富〔2〕的方法。p53定量检测用间接免疫荧光法。
2结果
, 百拇医药
2.1p53基因突变和p53蛋白表达与肿瘤病理分级分期关系
52例尿路上皮肿瘤，p53基因突变22例(42.3%)，G1、G2和G3肿瘤p53基因突变率分别为22.2%、40%和71.4%，T1和T2～T4肿瘤p53基因突变率为18.2%和48.8%。p53蛋白阳性表达33例(63.5%)，G1、G2和G3肿瘤p53蛋白阳性表达率为44.4%、65%和85.7%，T1和T2～T4肿瘤p53蛋白阳性率为45.5%和68.8%，p53基因突变和p53蛋白阳性表达随肿瘤病理分级分期的升级而增强(P<0.01)。5例正常泌尿系粘膜均为阴性表达。
2.2p53基因突变和p53蛋白表达与临床预后关系。
52例尿路上皮肿瘤，随访27例死亡。22例p53基因突变者死亡17例(77.3%)，没有突变者30例死亡10例(33.3%)；33例p53蛋白阳性表达者死亡23例(69.7%)，19例p53阴性表达者死亡4例(21.3%)。异倍体22例中死亡16例(72.7%)，二倍体30例中死亡11例(36.7%)。14例异倍体、p53基因突变和p53蛋白表达死亡13例(92.8%)，13例二倍体、无?53基因突变和p53蛋白阳性表达死亡2例(15.5%)，两者差异显著(P<0.01)。
, http://www.100md.com
2.3DNA倍体与p53基因突变和p53蛋白表达关系
22例异倍体肿瘤，p53基因突变14例(63.6%)，p53蛋白阳性表达18例(81.8%)；30例二倍体肿瘤，p53基因突变8例(26.7%)，p53蛋白阳性表达15例(50.0%)；异倍体肿瘤其p53基因突发率和蛋白表达率均高于二倍体肿瘤(P<0.01)。
3讨论
Wright等〔4〕用免疫组化的方法检测出膀胱肿瘤p53蛋白阳性表达率为54%。Sidrandky等〔3〕用PCR-SSCP检测发现浸润性膀胱癌p53基因突变率为61%，而浅表性肿瘤则未测出p53基因突变。本研究应用PCR-SSCP和流式免疫荧光法检测显示p53基因突变率和蛋白阳性表达率分别为42.3%和63.5%，随肿瘤的病理分级和分期的上升而增加，是重要的预后指数。
DNA倍体是重要的细胞增殖指数，Blomjous等〔5〕报告DNA倍体在预测膀胱肿瘤复发和预后中的作用优于肿瘤的病理分级和分期，是重要的预后指数。本文结果也发现异倍体肿瘤比二倍体肿瘤有一个较差的预后。
, 百拇医药
多方法多参数研究可以更准确研究尿路上皮肿瘤的生物学行为。我们联合PCR-SSCP、流式细胞术和细胞免疫荧光法对泌尿系肿瘤研究提示DNA异倍体肿瘤其p53基因突变和p53蛋白表达明显高于二倍体肿瘤，同时伴有DNA倍体异常、p53基因突变和p53蛋白阳性表达的肿瘤有一个最差的预后。
〔参考文献〕
1 Coates P J, d'Ardenne A J, Khan G, et al. Simplifed procedures for applying the polymerse chain reaction to routinely fixed paraffin wax sections〔J〕 . J Clin Pathol, 1991,44:114～ 118.
2 左连富，刘洪祥，郭建文.流式细胞术检测石蜡包埋肿瘤细胞DNA含量的样品制备方法〔J〕.中华病理杂志，1988，17：232～233.
, http://www.100md.com
3 Sidransky D, Von Eschenbou A,Tsai YC, et al. Identification of P53 gene mutation in bladder cancers and urine samples〔J〕 . Sciences,1991,252:706～ 709.
4 Wright C, Mellonk, Johnston P, etal. Expression of mutant P53,c- erb B- 2 and the epidermal growth factor eceptor in transitional cell carcinoma of the human urinary bladder〔 J〕 . Br J cancer,1991,63:967～ 970.
5 Blomjous E C M,Schipper N W,Baak J P A, et al.The value of morphometry and DNA flow cytomytry in addition to classic prognosticators in superficial urinary bladder carcinoma〔 J〕 . Amer J Cli Pathol, 1989,91:243～ 248.
收稿日期：1998-11-03；修回日期：1999-01-26, http://www.100md.com
单位：余明年 涂响安 赵志毅 黄春南 谢佛龙 广东省肇庆市第一人民医院泌尿外科(肇庆,526021)；李全贞 中山医科大学达安基因诊断中心；左连富 河北省肿瘤研究所
关键词：尿路上皮肿瘤；基因；聚合酶链式反应；流式细胞术
癌症99zk46
中图号：R737.1文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)s0-0108-01
应用聚合酶链式反应加单链多态性分析(PCR-SSCP)及流式细胞术和细胞免疫荧光技术检测52例尿路上皮肿瘤p53基因突变和p53蛋白定量表达和DNA倍体变化，并探讨与其生物学行为关系。
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1材料与方法
1.1材料来源
采用随访资料齐备的尿路上皮肿瘤石蜡组织52例，正常泌尿系粘膜5例为对照。本组肾盂癌∶输尿管癌∶膀胱癌5∶1∶46。G1∶G2∶G3为18∶20∶14，T1∶T2∶T3～T4为11∶22∶19。
1.2聚合酶链式反应加单链多态性分析
DNA提取采用Coater等〔1〕介绍的简捷方法。基因外显子5、6、7、8等引物由中山医科大学达安基因诊断中心合成。
1.3流式细胞术和细胞免疫荧光技术
DNA样品制备参照左连富〔2〕的方法。p53定量检测用间接免疫荧光法。
2结果
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2.1p53基因突变和p53蛋白表达与肿瘤病理分级分期关系
52例尿路上皮肿瘤，p53基因突变22例(42.3%)，G1、G2和G3肿瘤p53基因突变率分别为22.2%、40%和71.4%，T1和T2～T4肿瘤p53基因突变率为18.2%和48.8%。p53蛋白阳性表达33例(63.5%)，G1、G2和G3肿瘤p53蛋白阳性表达率为44.4%、65%和85.7%，T1和T2～T4肿瘤p53蛋白阳性率为45.5%和68.8%，p53基因突变和p53蛋白阳性表达随肿瘤病理分级分期的升级而增强(P<0.01)。5例正常泌尿系粘膜均为阴性表达。
2.2p53基因突变和p53蛋白表达与临床预后关系。
52例尿路上皮肿瘤，随访27例死亡。22例p53基因突变者死亡17例(77.3%)，没有突变者30例死亡10例(33.3%)；33例p53蛋白阳性表达者死亡23例(69.7%)，19例p53阴性表达者死亡4例(21.3%)。异倍体22例中死亡16例(72.7%)，二倍体30例中死亡11例(36.7%)。14例异倍体、p53基因突变和p53蛋白表达死亡13例(92.8%)，13例二倍体、无?53基因突变和p53蛋白阳性表达死亡2例(15.5%)，两者差异显著(P<0.01)。
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2.3DNA倍体与p53基因突变和p53蛋白表达关系
22例异倍体肿瘤，p53基因突变14例(63.6%)，p53蛋白阳性表达18例(81.8%)；30例二倍体肿瘤，p53基因突变8例(26.7%)，p53蛋白阳性表达15例(50.0%)；异倍体肿瘤其p53基因突发率和蛋白表达率均高于二倍体肿瘤(P<0.01)。
3讨论
Wright等〔4〕用免疫组化的方法检测出膀胱肿瘤p53蛋白阳性表达率为54%。Sidrandky等〔3〕用PCR-SSCP检测发现浸润性膀胱癌p53基因突变率为61%，而浅表性肿瘤则未测出p53基因突变。本研究应用PCR-SSCP和流式免疫荧光法检测显示p53基因突变率和蛋白阳性表达率分别为42.3%和63.5%，随肿瘤的病理分级和分期的上升而增加，是重要的预后指数。
DNA倍体是重要的细胞增殖指数，Blomjous等〔5〕报告DNA倍体在预测膀胱肿瘤复发和预后中的作用优于肿瘤的病理分级和分期，是重要的预后指数。本文结果也发现异倍体肿瘤比二倍体肿瘤有一个较差的预后。
, 百拇医药
多方法多参数研究可以更准确研究尿路上皮肿瘤的生物学行为。我们联合PCR-SSCP、流式细胞术和细胞免疫荧光法对泌尿系肿瘤研究提示DNA异倍体肿瘤其p53基因突变和p53蛋白表达明显高于二倍体肿瘤，同时伴有DNA倍体异常、p53基因突变和p53蛋白阳性表达的肿瘤有一个最差的预后。
〔参考文献〕
1 Coates P J, d'Ardenne A J, Khan G, et al. Simplifed procedures for applying the polymerse chain reaction to routinely fixed paraffin wax sections〔J〕 . J Clin Pathol, 1991,44:114～ 118.
2 左连富，刘洪祥，郭建文.流式细胞术检测石蜡包埋肿瘤细胞DNA含量的样品制备方法〔J〕.中华病理杂志，1988，17：232～233.
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3 Sidransky D, Von Eschenbou A,Tsai YC, et al. Identification of P53 gene mutation in bladder cancers and urine samples〔J〕 . Sciences,1991,252:706～ 709.
4 Wright C, Mellonk, Johnston P, etal. Expression of mutant P53,c- erb B- 2 and the epidermal growth factor eceptor in transitional cell carcinoma of the human urinary bladder〔 J〕 . Br J cancer,1991,63:967～ 970.
5 Blomjous E C M,Schipper N W,Baak J P A, et al.The value of morphometry and DNA flow cytomytry in addition to classic prognosticators in superficial urinary bladder carcinoma〔 J〕 . Amer J Cli Pathol, 1989,91:243～ 248.
收稿日期：1998-11-03；修回日期：1999-01-26, http://www.100md.com