子宫内膜癌端粒酶活性的研究
作者：万小云 石一复 程琪
单位：浙江大学附属妇产科医院(杭州，310006)
关键词：端粒酶；子宫内膜癌
癌症99zk36
中图号：R737.33；R730.231文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)s0-0098-01
为了探讨端粒酶在子宫内膜癌发生发展中可能起的作用，本研究采用端粒重复扩增法(Telomererepeatamplificationprotocal,TRAP)检测子宫内膜癌及癌前病变组织的端粒酶活性表达情况。
1.材料与方法
, 百拇医药
1.1组织来源
1996年6月至同年12月间子宫内膜癌及癌前病变患者共15例纳入本研究，年龄39～63岁，平均51.5岁。组织学检查子宫内膜腺癌9例，腺棘细胞癌3例，腺鳞癌1例，复合型重复不典型增生2例；FIGO分期Ⅰa期3例，Ⅰb期4例，Ⅰc期3例，Ⅱa、Ⅱb、Ⅲc期各1例。所有患者术前均未接受化疗或放疗，手术取下子宫后立即取材，其中6例同时采取癌旁组织(癌组织周围正常子宫内膜组织)。选取同期6例正常增生早期子宫内膜组织作为对照，组织经刮宫取得。组织标本快速冷冻于液氮中，后贮存于-80℃冰箱中直至使用。
1.2试剂与方法
端粒酶活性测定采用美国Oncor公司TRAP测定端粒酶活性试剂盒，经抽提端粒酶，准备反应混合物及PCR扩增。
电泳体系为12.5%非变性聚丙烯酰胺，凝胶规格为110mm×100mm×1mm。电泳条件为0.5×TBE缓冲剂，电压120V。每次实验均设置阳性和阴性对照。
, 百拇医药
硝酸银染色，振荡显色5～10分钟即可显示DNA带。
1.3阳性结果的判断
银染后凝胶上呈现典型间隔6个碱基对(bp)的阶梯形条带为端粒活性阳性，其中胶底部的条带为36bp内参照带，产物带开始于50bp，依次为56、62、68等。
2.结果
本研究用TRAP法测定了6例正常增生早期子宫内膜，2例子宫癌前病变，13例子宫内膜癌的癌组织，6例癌旁组织的端粒酶活性。其结果见表1
表1 TRAP测定子宫内膜癌端粒酶活性结果
组织类型
例数
端粒酶活性
, 百拇医药
未测得
阳性
子宫内膜癌组织
13
1
12
癌旁组织
6
3
3
癌前病变组织
2
0
, 百拇医药 2
正常增生早期子宫内膜
6
6
0
由表1可见13例子宫内膜癌的癌组织端粒酶活性显示占923%(12/13)，6例癌旁组织中3例表达，而2例癌前病变端粒酶也阳性，6例正常增生早期子宫内膜组织不表达端粒酶活性，见图1。阴性对照行出现数条不规则条带为引物二聚体形成所致，这些条带的特征是间隔不规则，除50bp条带颜色较深外，其余条带色淡，且条带数目少(一般少于6条)。
图1 TRAP测定子宫内膜癌端粒酶活性结果
1.阴性对照
3.癌组织(阳性)
, 百拇医药
5.癌组织(阳性)
7.癌前病变(阳性)
2.癌旁组织(阴性)
4.正常增生早期子宫内膜(阴性)
6.癌旁组织(阳性)
8.阳性对照
表1显示仅1例子宫内膜癌组织未测得端粒酶活性，该例为Ⅰc期，而其余各例癌组织端粒酶均阳性。癌前病变组织也表达端粒酶活性，提示子宫内膜癌形成早期即表达端粒酶活性。有关子宫内膜癌不同期别之间、癌组织与癌前病变组织之间，癌组织与癌旁组织之间端粒酶的表达是否存在数量上的差异，尚有待进一步进行定量研究。
3.讨论
, 百拇医药 当今，世界范围内子宫内膜癌的发病率不同程度增加，已成为目前最常见妇科恶性肿瘤之一〔1〕，国内各医院统计也明显增加〔2〕，但其发生发展的机理尚未阐明。近年研究〔3〕端粒酶在恶性肿瘤形成，发展过程中起重要作用。
近年研究除了造血细胞〔4〕及生殖细胞〔3〕外，其他正常组织和细胞均不表达端粒酶活性。本组6例正常增生早期子宫内膜组织端粒酶也阴性，而923%子宫内膜癌组织端粒酶阳性，这与人类其他恶性肿瘤所观察的结果基本一致〔3，5〕，表明端粒酶在子宫内膜癌发展过程中可能起重要作用。
研究表明端粒酶常在恶性肿瘤晚期被激活〔5，6，7〕。然而，本研究发现子宫内膜癌早期(Ⅰa)及癌前病变也表达端粒酶活性，由此可见，端粒酶的激活不仅在肿瘤发展中起了重要作用，或许在肿瘤产生过程中也是一个关键的步骤。提示通过端粒酶活性可协助早期诊断子宫内膜癌，同时通过应用端粒酶抑制药物或许能为抗肿瘤(包括早期肿瘤)治疗提供一种新途径。
, 百拇医药
本组资料发现50%的癌旁组织表达端粒酶活性，可能为癌旁组织标本中存在癌细胞的微小浸润，也可能癌旁组织中部分细胞已处于获得“永生”的准备或早期阶段。结合正常早期增生子宫内膜端粒酶活性均阴性，而随着癌前病变、癌组织和癌肿组织端粒酶活性阳性表达逐渐增强，也说明端粒酶对子宫内膜癌的发生、发展等一系列变化起重要作用。
〔参考文献〕
1 Parazzini F,Vechia CL,Bocciolone L,et al.The epidemiology of endometrial cancer〔J〕 .Gynecol Oncol,1991,41:1.
2 邓小虹，王大琬.北京妇产科医院17年子宫恶性肿瘤发病趋势的探讨〔J〕.中华妇产科杂志，1993，28：748.
3 Kim NW,Piatyszek MA,Prowse KR,et al.Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer〔J〕 .Science,1994,226:2011.
, 百拇医药
4 Hiyama K,Hirai Y,Kyoizumi S,et al.Activation of telomerase in human lymphocytes and hematopoietic progenitor cells〔J〕 .J Immunol,1995,155:3711.
5 Hiyama E,Yokoyama T,Tatsumoto N,et al.Telomerase activity in gastric cancer〔J〕 .Cancer Research,1995,55:3258.
6 Blasco MY,Rizen M,Greider CW,et al.Differential regulation of telomerase activity and telomerase RNA during multi stage tumorigenesis〔J〕 .Nat Genet,1996,12:200.
7 Hiyama E, Gollahow L,Kataoka T,et al. Telomerase activity in human breast tumors〔J〕 .J Natl Cancer Inst,1996,88:116.
收稿日期：1998-12-29；修回日期：1999-02-24, 百拇医药
单位：浙江大学附属妇产科医院(杭州，310006)
关键词：端粒酶；子宫内膜癌
癌症99zk36
中图号：R737.33；R730.231文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)s0-0098-01
为了探讨端粒酶在子宫内膜癌发生发展中可能起的作用，本研究采用端粒重复扩增法(Telomererepeatamplificationprotocal,TRAP)检测子宫内膜癌及癌前病变组织的端粒酶活性表达情况。
1.材料与方法
, 百拇医药
1.1组织来源
1996年6月至同年12月间子宫内膜癌及癌前病变患者共15例纳入本研究，年龄39～63岁，平均51.5岁。组织学检查子宫内膜腺癌9例，腺棘细胞癌3例，腺鳞癌1例，复合型重复不典型增生2例；FIGO分期Ⅰa期3例，Ⅰb期4例，Ⅰc期3例，Ⅱa、Ⅱb、Ⅲc期各1例。所有患者术前均未接受化疗或放疗，手术取下子宫后立即取材，其中6例同时采取癌旁组织(癌组织周围正常子宫内膜组织)。选取同期6例正常增生早期子宫内膜组织作为对照，组织经刮宫取得。组织标本快速冷冻于液氮中，后贮存于-80℃冰箱中直至使用。
1.2试剂与方法
端粒酶活性测定采用美国Oncor公司TRAP测定端粒酶活性试剂盒，经抽提端粒酶，准备反应混合物及PCR扩增。
电泳体系为12.5%非变性聚丙烯酰胺，凝胶规格为110mm×100mm×1mm。电泳条件为0.5×TBE缓冲剂，电压120V。每次实验均设置阳性和阴性对照。
, 百拇医药
硝酸银染色，振荡显色5～10分钟即可显示DNA带。
1.3阳性结果的判断
银染后凝胶上呈现典型间隔6个碱基对(bp)的阶梯形条带为端粒活性阳性，其中胶底部的条带为36bp内参照带，产物带开始于50bp，依次为56、62、68等。
2.结果
本研究用TRAP法测定了6例正常增生早期子宫内膜，2例子宫癌前病变，13例子宫内膜癌的癌组织，6例癌旁组织的端粒酶活性。其结果见表1
表1 TRAP测定子宫内膜癌端粒酶活性结果
组织类型
例数
端粒酶活性
, 百拇医药
未测得
阳性
子宫内膜癌组织
13
1
12
癌旁组织
6
3
3
癌前病变组织
2
0
, 百拇医药 2
正常增生早期子宫内膜
6
6
0
由表1可见13例子宫内膜癌的癌组织端粒酶活性显示占923%(12/13)，6例癌旁组织中3例表达，而2例癌前病变端粒酶也阳性，6例正常增生早期子宫内膜组织不表达端粒酶活性，见图1。阴性对照行出现数条不规则条带为引物二聚体形成所致，这些条带的特征是间隔不规则，除50bp条带颜色较深外，其余条带色淡，且条带数目少(一般少于6条)。
图1 TRAP测定子宫内膜癌端粒酶活性结果
1.阴性对照
3.癌组织(阳性)
, 百拇医药
5.癌组织(阳性)
7.癌前病变(阳性)
2.癌旁组织(阴性)
4.正常增生早期子宫内膜(阴性)
6.癌旁组织(阳性)
8.阳性对照
表1显示仅1例子宫内膜癌组织未测得端粒酶活性，该例为Ⅰc期，而其余各例癌组织端粒酶均阳性。癌前病变组织也表达端粒酶活性，提示子宫内膜癌形成早期即表达端粒酶活性。有关子宫内膜癌不同期别之间、癌组织与癌前病变组织之间，癌组织与癌旁组织之间端粒酶的表达是否存在数量上的差异，尚有待进一步进行定量研究。
3.讨论
, 百拇医药 当今，世界范围内子宫内膜癌的发病率不同程度增加，已成为目前最常见妇科恶性肿瘤之一〔1〕，国内各医院统计也明显增加〔2〕，但其发生发展的机理尚未阐明。近年研究〔3〕端粒酶在恶性肿瘤形成，发展过程中起重要作用。
近年研究除了造血细胞〔4〕及生殖细胞〔3〕外，其他正常组织和细胞均不表达端粒酶活性。本组6例正常增生早期子宫内膜组织端粒酶也阴性，而923%子宫内膜癌组织端粒酶阳性，这与人类其他恶性肿瘤所观察的结果基本一致〔3，5〕，表明端粒酶在子宫内膜癌发展过程中可能起重要作用。
研究表明端粒酶常在恶性肿瘤晚期被激活〔5，6，7〕。然而，本研究发现子宫内膜癌早期(Ⅰa)及癌前病变也表达端粒酶活性，由此可见，端粒酶的激活不仅在肿瘤发展中起了重要作用，或许在肿瘤产生过程中也是一个关键的步骤。提示通过端粒酶活性可协助早期诊断子宫内膜癌，同时通过应用端粒酶抑制药物或许能为抗肿瘤(包括早期肿瘤)治疗提供一种新途径。
, 百拇医药
本组资料发现50%的癌旁组织表达端粒酶活性，可能为癌旁组织标本中存在癌细胞的微小浸润，也可能癌旁组织中部分细胞已处于获得“永生”的准备或早期阶段。结合正常早期增生子宫内膜端粒酶活性均阴性，而随着癌前病变、癌组织和癌肿组织端粒酶活性阳性表达逐渐增强，也说明端粒酶对子宫内膜癌的发生、发展等一系列变化起重要作用。
〔参考文献〕
1 Parazzini F,Vechia CL,Bocciolone L,et al.The epidemiology of endometrial cancer〔J〕 .Gynecol Oncol,1991,41:1.
2 邓小虹，王大琬.北京妇产科医院17年子宫恶性肿瘤发病趋势的探讨〔J〕.中华妇产科杂志，1993，28：748.
3 Kim NW,Piatyszek MA,Prowse KR,et al.Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer〔J〕 .Science,1994,226:2011.
, 百拇医药
4 Hiyama K,Hirai Y,Kyoizumi S,et al.Activation of telomerase in human lymphocytes and hematopoietic progenitor cells〔J〕 .J Immunol,1995,155:3711.
5 Hiyama E,Yokoyama T,Tatsumoto N,et al.Telomerase activity in gastric cancer〔J〕 .Cancer Research,1995,55:3258.
6 Blasco MY,Rizen M,Greider CW,et al.Differential regulation of telomerase activity and telomerase RNA during multi stage tumorigenesis〔J〕 .Nat Genet,1996,12:200.
7 Hiyama E, Gollahow L,Kataoka T,et al. Telomerase activity in human breast tumors〔J〕 .J Natl Cancer Inst,1996,88:116.
收稿日期：1998-12-29；修回日期：1999-02-24, 百拇医药