p53抑癌基因、nm23肿瘤转移抑制基因在卵巢上皮性癌的表达
作者：李志刚，李孟达
单位：中山医科大学肿瘤防治中心妇科(广州，510060)
关键词：卵巢肿瘤；p53；nm23；预后
癌症99zk23
【摘要】目的：研究p53抑癌基因和nm23肿瘤转移抑制基因与卵巢上皮性癌的关系。方法：采用免疫组化LSAB法检测12例正常卵巢组织，20例卵巢良性肿瘤，16例交界性肿瘤以及79例卵巢上皮性癌组织中p53及nm23的表达情况。结果：p53表达率于卵巢上皮性癌为481%，其他组织均呈阴性，与组织类型无关，但与分化程度成反比，与分期、淋巴结转移成正相关。COX模型单因素及多因素分析显示，p53表达与预后相关；nm23表达率于卵巢上皮性癌中为491%，且与组织类型、细胞分化，临床分期以及淋巴结转移均有相关性，COX模型单因素分析表明nm23表达与预后有关。结论：p53和nm23可作为估计患者预后的指标，前者阳性者预后欠佳，后者阳性者预后较好。
, 百拇医药
中图号：R737.31 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)s0-0067-03
Overexpressions of p53,nm23 in patients with ovarian carcinoma
LI Zhi-gang， LI Meng-da
Gynaecological Department,Cancer Center of Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510060,P. R. China
【Abstract】 Objective： To investigate the correlation between the overexpressions of p53,nm23 and the biological characteristic of ovarian carcinoma. Methods： The expressions of p53,nm23 were detected in formalin-fixed paraffin-embedded tissue from 127 patients by immunohistochemical technique. Results： The expression rate of p53 in ovarian carcinoma was 48.1% ,and not significantly related with the histological type of ovarian carcinoma. However it was significantly related with the grade,stage and lymph node metastasis.In univariate and multivariate analysis,the prognosis of ovarian carcinoma was associated with the overexpression of p53.The expression rate of nm23 in ovarian carcinoma was 49.1% ,and significantly related with histological type,the grade,stage and lymph node metastasis.In a univariate analysis,the prognosis of ovarian carcinoma was associated with the overexprossion of nm23. Conclusions： p53 and nm23 may be used as a prognostic marker in ovarian carcinoma.
, 百拇医药
Key words： Ovarian neoplasms； Expression of oncogene； Prognosis
通过检测基因及其产物，有希望为卵巢上皮性癌的诊断、治疗和预后提供有价值的辅助手段。有关卵巢上皮性癌癌基因和抑癌基因的研究，由于实验方法、病例选择和例数有限等因素的影响，导致研究结果存在着不同程度的差异〔1，2〕。nm23基因与癌的转移密切相关〔3〕，而在卵巢上皮性癌涉及此基因的研究较少。本实验检测卵巢上皮性癌p53及nm23的表达情况，探讨与卵巢上皮性癌生物学特征的内在联系以及临床意义。
1.材料与方法
1.1病例选择
本研究的病例均为中山医科大学肿瘤医院1989年2月至1994年11月妇科住院病人，共127例。其中，正常卵巢组织12例(来自子宫肌瘤和子宫腺肌症的手术患者)，卵巢良性肿瘤20例，卵巢交界性肿瘤16例，卵巢浆液性囊性癌35例，卵巢粘液性囊性癌44例。卵巢上皮性癌中，21例接受盆腔淋巴清扫术，其中8例有淋巴结转移。所有标本均为福尔
, 百拇医药
马林固定、石蜡包埋的存档蜡块，病理诊断由两位病理科主治医师阅片核定。卵巢上皮性癌患者年龄21～73岁，中位数43.5岁，随访13～81月，中位数为47个月。
1.2方法
4μm切片，常规HE染色和免疫组化LSAB法染色。p53蛋白单克隆抗体以及LSAB试剂盒为美国DAKO公司生产，nm23蛋白单克隆抗体是美国ONCOGENESCIENCES公司生产。p53和nm23工作浓度分别为1∶100、1∶160及1∶100。已知p53阳性的鼻咽癌切片和nm23阳性的乳腺癌切片为阳性对照，用PBS代替第一抗体作阴性对照。
1.3评价标准
p53阳性的切片细胞核内有棕色颗粒状物质，偶尔可见细胞浆内有染色，nm23阳性切片棕色颗粒主要出现在细胞浆中。
依照阳性细胞数的多少而分为：阴性(-)，切片中细胞核和胞浆中未见染色颗粒；弱阳性(+)，切片中仅见细胞核或细胞浆内浅而淡的染色颗粒；中度阳性(++)，切片中少于50%的细胞核或细胞浆内见到染色颗粒；强阳性(+++)，切片中大于50%的细胞核或细胞浆中见到染色颗粒。
, 百拇医药
1.4统计学处理
采用χ2检验及Fisher＇s精确检验，生命表法统计生存率，COX模型单因素与多因素分析。
2结果
2.1p53以及nm23的表达
p53的表达率卵巢上皮性癌为48.10%，其他组织中均无表达。
nm23正常卵巢、卵巢良性肿瘤中均为阴性反应，交界性肿瘤表达率为12.50%，卵巢上皮性癌的表达率为49.3%三者之间有差异，(P<0.01)。
2.2p53及nm23的表达率与卵巢上皮性癌临床病理特点的关系
p53的表达与卵巢上皮性癌组织学类型无关(P>0.01)；但与细胞分化程度、临床分期和淋巴结转移有关。低分化细胞表达率高于高分化者(P<0.05)；临床分期限越高，表达率越高，早期满(Ⅰ、Ⅱ)表达率为32.40%,晚期(Ⅲ、Ⅳ)表达率为61.90%(P<0.01)；淋巴结有转移者表达率升高(P<0.01)。见表1。
, http://www.100md.com
表1 p53与nm23阳性表达与病理类型、分化程度和临床分期的关系
类别
总例数
p53
nm23
阳性
%
阳性
%
病理类型
浆液性
35
17
, 百拇医药
48.5
13
37.1
粘液性
44
21
47.7
26
59.0
分化程度
高分化
47
21
, 百拇医药
44.6
29
61.7
低分化
32
17
53.1
10
31.2
临床分期
Ⅰ
13
2
, 百拇医药 15.3
9
69.2
Ⅱ
24
10
41.6
15
63.3
Ⅲ
38
22
57.0
15
, http://www.100md.com
39.4
Ⅳ
4
4
4/4
0
0/4
nm23的表达与卵巢上皮性癌组织学类型、细胞分化程度以及临床分期有关。卵巢浆液性囊腺癌的表达率低于粘液性囊腺癌(P<0.05)，高分化的表达率高于低分化者(P<0.01)；临床分期越高，表达率低(P<0.01)；淋巴结转移者表达率降低(P<0.01)，见表2。
表2 21例盆腔清扫术患者p53与nm23基因表达与淋巴结转移的关系
, http://www.100md.com 淋巴结转移
n
p53
nm23
-
+
-
+
有
8
2
6
7
1
, 百拇医药
无
13
11
2
6
7
2.3预后分析
本组卵巢癌患者79例全部有完整随访资料，随访率达100.0%，按生命表法，3年生存率6.0%，5年生存率45.6%。
2.3.1单因素分析：79例卵巢上皮性癌资料进行分析。从结果看临床分期、细胞分化程度、组织学类型、残留癌、p53及nm23表达均影响患者的预后。
2.3.2多因素分析进一步作COX模型多因素分析，显示临床分期、细胞分化程度、残留癌及p53表达仍然是影响预后的主要因素，但nm23表达对预后的影响却不明显。
, 百拇医药
3.讨论
3.1卵巢上皮性癌中突变型p53蛋白的表达及其临床意义
本研究卵巢上皮性癌p53的表达率为48.1%，其他组织均为阴性反应，与文献报道的基本一致〔4〕，说明p53表达不是卵巢良性和交界性肿瘤的特征，而是在卵巢上皮性癌中是较为普遍存在的现象。尽管多数报道中都能看到p53突变率和表达率增高，p53蛋白与卵巢上皮性癌生物学行为之间关系的研究结果却不甚一致。有认为p53表达与卵巢上皮性癌的分期有关，表达率晚期比早期高〔5〕。亦有认为〔6〕p53蛋白的表达与分期无关。本研究早期病例阳性率为324%，晚期为61.9%；还提示p53表达与细胞分化程度有关，分化程度低者表达率高，盆腔淋巴结转移者表达率高。
本资料采用COX模型进行分析，反映出分期、细胞分化程度与残留癌仍然为影响预后的主要因素，同时不论是单因素还是多因素分析，p53对预后的影响都有显著意义，提示p53表达可以作为一个判断预后的指标。
, 百拇医药
3.2肿瘤转移抑制基因nm23在卵巢上皮性癌中的表达及其临床意义
本研究于卵巢癌和淋巴结组织中nm23总的表达率为49.3%，nm23表达与组织学类型、恶性程度的低与高、细胞分化程度的好与差和临床分期的早与晚均有相关性(P<0.01)，具有较高转移倾向或发生转移者nm23表达率低。为此可推测，nm23基因表达阴性者腹后淋巴结发生转移的机会可能较大。由于病例少，是否可以用之作为判断卵巢上皮性腹膜后淋巴结转移的指标，有待证实。
本组病例COX模型单因素分析认为nm23表达与卵巢上皮性癌的预后有关，阳性者预后较好；但多因素分析结果显示两者无明显相关。
〔参考文献〕
1 Frank TS,Bartos ER,Haefner HK,et al.Loss of heterozygosity and over expression of the p53 gene in ovarian carcinoma〔J〕 .Mod Pathol,1994,791):3- 8.
, 百拇医药
2 Ratsaros D. Prognostic value of p53 Protein accumulation in ovarian carcinoma〔J〕 .Proc Annu Meet Assoc Cancer Res,1994,35:A1399.
3 Steeg PS. nm23 and breast metastasis〔J〕 .Breast Cancer.Res Treat,1993;25:175- 187.
4 Berchuck,A, Matthew,F,Michaelp,et al. Overexpression of p53 is not a feature of benign and early stage borderline epithelial ovarian tumours〔J〕 .Gynecol Oncol,1994;52(2)232- 236.
, http://www.100md.com 5 Berchuck A,Kohler MF,Marks JR， et al. The p53 tumour supression gene frequently is alterated in gynelolgic cancers〔J〕 . Am J Obstet Gynecol,1994,170:246.
6 Marks JR,Davidoff AM,Kerns E， et al. Overexpression and mutation of p53 in epithelial ovarian cancer〔J〕 .Cancer Res,1991,51:2979.
收稿日期：1998-08-05；修回日期：1998-11-13, http://www.100md.com
单位：中山医科大学肿瘤防治中心妇科(广州，510060)
关键词：卵巢肿瘤；p53；nm23；预后
癌症99zk23
【摘要】目的：研究p53抑癌基因和nm23肿瘤转移抑制基因与卵巢上皮性癌的关系。方法：采用免疫组化LSAB法检测12例正常卵巢组织，20例卵巢良性肿瘤，16例交界性肿瘤以及79例卵巢上皮性癌组织中p53及nm23的表达情况。结果：p53表达率于卵巢上皮性癌为481%，其他组织均呈阴性，与组织类型无关，但与分化程度成反比，与分期、淋巴结转移成正相关。COX模型单因素及多因素分析显示，p53表达与预后相关；nm23表达率于卵巢上皮性癌中为491%，且与组织类型、细胞分化，临床分期以及淋巴结转移均有相关性，COX模型单因素分析表明nm23表达与预后有关。结论：p53和nm23可作为估计患者预后的指标，前者阳性者预后欠佳，后者阳性者预后较好。
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中图号：R737.31 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)s0-0067-03
Overexpressions of p53,nm23 in patients with ovarian carcinoma
LI Zhi-gang， LI Meng-da
Gynaecological Department,Cancer Center of Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510060,P. R. China
【Abstract】 Objective： To investigate the correlation between the overexpressions of p53,nm23 and the biological characteristic of ovarian carcinoma. Methods： The expressions of p53,nm23 were detected in formalin-fixed paraffin-embedded tissue from 127 patients by immunohistochemical technique. Results： The expression rate of p53 in ovarian carcinoma was 48.1% ,and not significantly related with the histological type of ovarian carcinoma. However it was significantly related with the grade,stage and lymph node metastasis.In univariate and multivariate analysis,the prognosis of ovarian carcinoma was associated with the overexpression of p53.The expression rate of nm23 in ovarian carcinoma was 49.1% ,and significantly related with histological type,the grade,stage and lymph node metastasis.In a univariate analysis,the prognosis of ovarian carcinoma was associated with the overexprossion of nm23. Conclusions： p53 and nm23 may be used as a prognostic marker in ovarian carcinoma.
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Key words： Ovarian neoplasms； Expression of oncogene； Prognosis
通过检测基因及其产物，有希望为卵巢上皮性癌的诊断、治疗和预后提供有价值的辅助手段。有关卵巢上皮性癌癌基因和抑癌基因的研究，由于实验方法、病例选择和例数有限等因素的影响，导致研究结果存在着不同程度的差异〔1，2〕。nm23基因与癌的转移密切相关〔3〕，而在卵巢上皮性癌涉及此基因的研究较少。本实验检测卵巢上皮性癌p53及nm23的表达情况，探讨与卵巢上皮性癌生物学特征的内在联系以及临床意义。
1.材料与方法
1.1病例选择
本研究的病例均为中山医科大学肿瘤医院1989年2月至1994年11月妇科住院病人，共127例。其中，正常卵巢组织12例(来自子宫肌瘤和子宫腺肌症的手术患者)，卵巢良性肿瘤20例，卵巢交界性肿瘤16例，卵巢浆液性囊性癌35例，卵巢粘液性囊性癌44例。卵巢上皮性癌中，21例接受盆腔淋巴清扫术，其中8例有淋巴结转移。所有标本均为福尔
, 百拇医药
马林固定、石蜡包埋的存档蜡块，病理诊断由两位病理科主治医师阅片核定。卵巢上皮性癌患者年龄21～73岁，中位数43.5岁，随访13～81月，中位数为47个月。
1.2方法
4μm切片，常规HE染色和免疫组化LSAB法染色。p53蛋白单克隆抗体以及LSAB试剂盒为美国DAKO公司生产，nm23蛋白单克隆抗体是美国ONCOGENESCIENCES公司生产。p53和nm23工作浓度分别为1∶100、1∶160及1∶100。已知p53阳性的鼻咽癌切片和nm23阳性的乳腺癌切片为阳性对照，用PBS代替第一抗体作阴性对照。
1.3评价标准
p53阳性的切片细胞核内有棕色颗粒状物质，偶尔可见细胞浆内有染色，nm23阳性切片棕色颗粒主要出现在细胞浆中。
依照阳性细胞数的多少而分为：阴性(-)，切片中细胞核和胞浆中未见染色颗粒；弱阳性(+)，切片中仅见细胞核或细胞浆内浅而淡的染色颗粒；中度阳性(++)，切片中少于50%的细胞核或细胞浆内见到染色颗粒；强阳性(+++)，切片中大于50%的细胞核或细胞浆中见到染色颗粒。
, 百拇医药
1.4统计学处理
采用χ2检验及Fisher＇s精确检验，生命表法统计生存率，COX模型单因素与多因素分析。
2结果
2.1p53以及nm23的表达
p53的表达率卵巢上皮性癌为48.10%，其他组织中均无表达。
nm23正常卵巢、卵巢良性肿瘤中均为阴性反应，交界性肿瘤表达率为12.50%，卵巢上皮性癌的表达率为49.3%三者之间有差异，(P<0.01)。
2.2p53及nm23的表达率与卵巢上皮性癌临床病理特点的关系
p53的表达与卵巢上皮性癌组织学类型无关(P>0.01)；但与细胞分化程度、临床分期和淋巴结转移有关。低分化细胞表达率高于高分化者(P<0.05)；临床分期限越高，表达率越高，早期满(Ⅰ、Ⅱ)表达率为32.40%,晚期(Ⅲ、Ⅳ)表达率为61.90%(P<0.01)；淋巴结有转移者表达率升高(P<0.01)。见表1。
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表1 p53与nm23阳性表达与病理类型、分化程度和临床分期的关系
类别
总例数
p53
nm23
阳性
%
阳性
%
病理类型
浆液性
35
17
, 百拇医药
48.5
13
37.1
粘液性
44
21
47.7
26
59.0
分化程度
高分化
47
21
, 百拇医药
44.6
29
61.7
低分化
32
17
53.1
10
31.2
临床分期
Ⅰ
13
2
, 百拇医药 15.3
9
69.2
Ⅱ
24
10
41.6
15
63.3
Ⅲ
38
22
57.0
15
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39.4
Ⅳ
4
4
4/4
0
0/4
nm23的表达与卵巢上皮性癌组织学类型、细胞分化程度以及临床分期有关。卵巢浆液性囊腺癌的表达率低于粘液性囊腺癌(P<0.05)，高分化的表达率高于低分化者(P<0.01)；临床分期越高，表达率低(P<0.01)；淋巴结转移者表达率降低(P<0.01)，见表2。
表2 21例盆腔清扫术患者p53与nm23基因表达与淋巴结转移的关系
, http://www.100md.com 淋巴结转移
n
p53
nm23
-
+
-
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有
8
2
6
7
1
, 百拇医药
无
13
11
2
6
7
2.3预后分析
本组卵巢癌患者79例全部有完整随访资料，随访率达100.0%，按生命表法，3年生存率6.0%，5年生存率45.6%。
2.3.1单因素分析：79例卵巢上皮性癌资料进行分析。从结果看临床分期、细胞分化程度、组织学类型、残留癌、p53及nm23表达均影响患者的预后。
2.3.2多因素分析进一步作COX模型多因素分析，显示临床分期、细胞分化程度、残留癌及p53表达仍然是影响预后的主要因素，但nm23表达对预后的影响却不明显。
, 百拇医药
3.讨论
3.1卵巢上皮性癌中突变型p53蛋白的表达及其临床意义
本研究卵巢上皮性癌p53的表达率为48.1%，其他组织均为阴性反应，与文献报道的基本一致〔4〕，说明p53表达不是卵巢良性和交界性肿瘤的特征，而是在卵巢上皮性癌中是较为普遍存在的现象。尽管多数报道中都能看到p53突变率和表达率增高，p53蛋白与卵巢上皮性癌生物学行为之间关系的研究结果却不甚一致。有认为p53表达与卵巢上皮性癌的分期有关，表达率晚期比早期高〔5〕。亦有认为〔6〕p53蛋白的表达与分期无关。本研究早期病例阳性率为324%，晚期为61.9%；还提示p53表达与细胞分化程度有关，分化程度低者表达率高，盆腔淋巴结转移者表达率高。
本资料采用COX模型进行分析，反映出分期、细胞分化程度与残留癌仍然为影响预后的主要因素，同时不论是单因素还是多因素分析，p53对预后的影响都有显著意义，提示p53表达可以作为一个判断预后的指标。
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3.2肿瘤转移抑制基因nm23在卵巢上皮性癌中的表达及其临床意义
本研究于卵巢癌和淋巴结组织中nm23总的表达率为49.3%，nm23表达与组织学类型、恶性程度的低与高、细胞分化程度的好与差和临床分期的早与晚均有相关性(P<0.01)，具有较高转移倾向或发生转移者nm23表达率低。为此可推测，nm23基因表达阴性者腹后淋巴结发生转移的机会可能较大。由于病例少，是否可以用之作为判断卵巢上皮性腹膜后淋巴结转移的指标，有待证实。
本组病例COX模型单因素分析认为nm23表达与卵巢上皮性癌的预后有关，阳性者预后较好；但多因素分析结果显示两者无明显相关。
〔参考文献〕
1 Frank TS,Bartos ER,Haefner HK,et al.Loss of heterozygosity and over expression of the p53 gene in ovarian carcinoma〔J〕 .Mod Pathol,1994,791):3- 8.
, 百拇医药
2 Ratsaros D. Prognostic value of p53 Protein accumulation in ovarian carcinoma〔J〕 .Proc Annu Meet Assoc Cancer Res,1994,35:A1399.
3 Steeg PS. nm23 and breast metastasis〔J〕 .Breast Cancer.Res Treat,1993;25:175- 187.
4 Berchuck,A, Matthew,F,Michaelp,et al. Overexpression of p53 is not a feature of benign and early stage borderline epithelial ovarian tumours〔J〕 .Gynecol Oncol,1994;52(2)232- 236.
, http://www.100md.com 5 Berchuck A,Kohler MF,Marks JR， et al. The p53 tumour supression gene frequently is alterated in gynelolgic cancers〔J〕 . Am J Obstet Gynecol,1994,170:246.
6 Marks JR,Davidoff AM,Kerns E， et al. Overexpression and mutation of p53 in epithelial ovarian cancer〔J〕 .Cancer Res,1991,51:2979.
收稿日期：1998-08-05；修回日期：1998-11-13, http://www.100md.com