突变型与野生型HPV16 DNA疫苗的免疫原性评价
为研制一种新的安全、高效的人乳头状瘤病毒(HPV)16 DNA疫苗，本研究对构建的HPV-16 E7的突变型和野生型疫苗的抗原性进行了比较，以评价突变型疫苗的免疫原性。
我们将24只C57BL/6小鼠(雌性，6～8周龄)分为4组，其中3组分别接种pcDNA3.1、pcDNA3.1/16E7、pcDNA3.1/16ME7 DNA疫苗(1.0 μg/μk)，另1组作为空白对照组。完成免疫2周后处死小鼠取脾脏，对IL-2、γ干扰素(IFN-γ)和细胞毒T细胞(CTL)进行检测。
结果显示，对IL-2的检测中，pcDNA3.1/16ME7产生的斑点数明显高于pcDNA3.1/16E7、pcDNA3.1和空白对照组。野生型E7和突变型E7 DNA疫苗组与空载体组及未免疫组之间均有显著性差异(P<0.01)，野生型和突变型疫苗组间亦有显著性差异(P<0.05)。pcDNA3.1/16ME7产生的IFN-γ明显高于 pcDNA3.1/16E7和空白对照。各组间差异显著，而未加E7多肽组，各组间差异不显著。
随着效应细胞与靶细胞比值(ET)的增大，杀伤作用越明显。在ET为51和151时， pcDNA16/E7、pcDNA16/ME7、pcDNA3.1及未经免疫的小鼠组间无显著差异，但在ET为451时，CTL细胞杀伤率分别为28.7%、55%、12.5%和11.5%，前2组与后2组中任一组间均有显著差异。前2组间亦有显著差异。
本研究构建的突变型和野生型HPV-16 E7 DNA疫苗，可增强E7特异性CTL反应。用突变型ME7 DNA疫苗免疫的小鼠比野生型E7疫苗产生的IL-2、IFN-γ高数倍。突变型E7 DNA疫苗免疫小鼠后，采用含有MHCⅠ类分子结合位点的E7多肽刺激免疫后的小鼠脾细胞，产生特异的E7 IL-2、IFN-γ和CTL反应，而未经E7多肽刺激者各组之间无显著差异。
各组疫苗免疫后的小鼠脾细胞经E7特异性多肽刺激后作为效应细胞，含有HPV-16全长基因的C3细胞作为靶细胞，经E7特异性多肽刺激后，在ET为451时突变型E7 DNA疫苗较野生型E7 DNA疫苗对HPV的杀伤作用明显增强。
以上结果提示，突变型HPV-16 E7 DNA疫苗免疫原性明显高于野生型疫苗，亦进一步证实E7蛋白呈递途径是通过MHCⅠ类抗原呈递途径来完成的。本研究通过突变HPV-16 E7锌指结合区两个关键位点，显著增强DNA疫苗的潜力，为进一步研制HPV治疗性疫苗奠定基础。, 百拇医药(北京协和医院 左亚刚 王家璧 为研制一种新的安全、高效的人乳头状瘤病毒(HPV)16 DNA疫苗，本研究)
我们将24只C57BL/6小鼠(雌性，6～8周龄)分为4组，其中3组分别接种pcDNA3.1、pcDNA3.1/16E7、pcDNA3.1/16ME7 DNA疫苗(1.0 μg/μk)，另1组作为空白对照组。完成免疫2周后处死小鼠取脾脏，对IL-2、γ干扰素(IFN-γ)和细胞毒T细胞(CTL)进行检测。
结果显示，对IL-2的检测中，pcDNA3.1/16ME7产生的斑点数明显高于pcDNA3.1/16E7、pcDNA3.1和空白对照组。野生型E7和突变型E7 DNA疫苗组与空载体组及未免疫组之间均有显著性差异(P<0.01)，野生型和突变型疫苗组间亦有显著性差异(P<0.05)。pcDNA3.1/16ME7产生的IFN-γ明显高于 pcDNA3.1/16E7和空白对照。各组间差异显著，而未加E7多肽组，各组间差异不显著。
随着效应细胞与靶细胞比值(ET)的增大，杀伤作用越明显。在ET为51和151时， pcDNA16/E7、pcDNA16/ME7、pcDNA3.1及未经免疫的小鼠组间无显著差异，但在ET为451时，CTL细胞杀伤率分别为28.7%、55%、12.5%和11.5%，前2组与后2组中任一组间均有显著差异。前2组间亦有显著差异。
本研究构建的突变型和野生型HPV-16 E7 DNA疫苗，可增强E7特异性CTL反应。用突变型ME7 DNA疫苗免疫的小鼠比野生型E7疫苗产生的IL-2、IFN-γ高数倍。突变型E7 DNA疫苗免疫小鼠后，采用含有MHCⅠ类分子结合位点的E7多肽刺激免疫后的小鼠脾细胞，产生特异的E7 IL-2、IFN-γ和CTL反应，而未经E7多肽刺激者各组之间无显著差异。
各组疫苗免疫后的小鼠脾细胞经E7特异性多肽刺激后作为效应细胞，含有HPV-16全长基因的C3细胞作为靶细胞，经E7特异性多肽刺激后，在ET为451时突变型E7 DNA疫苗较野生型E7 DNA疫苗对HPV的杀伤作用明显增强。
以上结果提示，突变型HPV-16 E7 DNA疫苗免疫原性明显高于野生型疫苗，亦进一步证实E7蛋白呈递途径是通过MHCⅠ类抗原呈递途径来完成的。本研究通过突变HPV-16 E7锌指结合区两个关键位点，显著增强DNA疫苗的潜力，为进一步研制HPV治疗性疫苗奠定基础。, 百拇医药(北京协和医院 左亚刚 王家璧 为研制一种新的安全、高效的人乳头状瘤病毒(HPV)16 DNA疫苗，本研究)