肝胆宁对小鼠肝脏谷胱甘肽及血清谷胱甘肽-S转移酶的影响
项目负责人:吴万垠, 233004, 蚌埠医学院附属医院
摘要目的：探讨复方中药肝胆宁护肝作用的机制。
方法：以肝胆宁作护肝药物，肝泰乐作对照，分别进行了防护与治疗四氯化碳中毒小鼠肝损伤的实验研究。
结果：肝胆宁能提高小鼠肝脏GSH的含量(防护实验组310.4±26.3比对照组118.5μg/100mg±13.5μg/100mg肝组织，n=12, P<0.01)，并能降低其SGST的活性，(防护实验组10.8U/L±2.6U/L比对照组70.3U/L±10.1U/L,n=12, P<0.01)，明显优于对照组。
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结论：肝胆宁通过增强小鼠体内自由基清除剂而达到护肝作用。
主题词 肝胆宁 中医 谷胱甘肽-S转移酶 谷胱甘肽 自由基清除剂
吴万垠, 钟洁.肝胆宁对小鼠肝脏谷胱甘肽及血清谷胱甘肽-S转移酶的影响.新消化病学杂志,1994;2(2):82-83
AIM To explore the mechanism of Chinese liver-protectingmedicine of Gandanning.
METHODS Gandanning was used as study drug and glucurolactoneas control. The expeniment were conducted respectively for prevention and treatment of mice liver damage caused by CCl4.
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RESULTS Gandanning can increase the ammount of glutathione in the liver of mice (for prevention group, 310.4±26.3, vs 118.5±13.5μg per 100mg of liver tissue, n=12, P<0.01) and also canreduce the abnormal activity of SGST (for prevention group, 10.8±2.6 vs 70.3±10.1 units per liter, n=12, P<0.01) Gandanning issignificantly superior to glucurolactone (P<0.01) in preventi on of mice liver from damage.
CONCLUSIONS The action of Chinese liverprotenting medicine of Gandanning is due to its increasing of the free radicals scavenger in the liver of mice.
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Keywords candanning traditional Chinese medicine glutathionstransferase glutathione free radicials scavenger
Wu WY, Zhong J. The effect of Gandanning on liver glutathione and serum glutalithiones-transferase in mice. Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1994;2(2):82-83
肝脏疾病与胆道疾病之间存在着密切的关系[1，2]。我们用一贯煎为基方，组成养肝利胆的肝胆宁，治疗肝阴虚型肝胆疾病取得了较满意的效果，为了进一步证实肝胆宁的护肝功效，并探讨其对肝脏作用的机制，设计了本实验研究。
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1 材料和方法
1.1 动物 昆明种小白鼠，体重20g～25g，雌雄不拘，共96只。
1.2 药物及用量 肝胆宁主含生地10g，沙参10g，当归10g，枸杞子10g，麦冬10g，陈皮10g，首乌10g，甘草6g，由本院制剂室制备。用量每日生药14g/kg，体重；肝泰乐，每日0.05g/kg体重，由上海金山制药厂生产。以上用量均为成人用量的10倍[3]。四氯化碳溶液由徐州化学试剂厂出品。
1.3 实验方法 实验1：48只小鼠随机分成4组，每组12只，I为正常对照组，II为模型对照组，III为肝泰乐防护对照组，Ⅳ为肝胆宁防护组。Ⅲ, IV两组按上述剂量于3d内每日给药1次，待末次给药后6h，给II,III,IV组小鼠腹腔注射0.2% CCl4豆油溶液10mL/kg体重,Ⅰ组小鼠则腹腔注射10mL/kg体重豆油溶液。继之再禁食16h，断头取血标本，以备测SGST，并迅速取肝脏置0生理盐水中漂洗，供测GSH。
, 百拇医药
实验2：分组同实验1，但III, IV均为治疗组。II、III、 IV组小鼠按10mg/kg体重腹腔注射0.2% CCl4豆油溶液，II组作中毒对照，III, IV组注射后立即分别灌服肝泰乐与肝胆宁，Ⅰ, II组分别灌服等体积生理盐水。禁食16h，断头处死，标本采取方法同实验1。
1.4 测定项目 以胡大荣法[4]测血清谷胱甘肽-S转移酶(SGST)；分光光度法[5]测肝组织还原型谷胱甘肽(GSH)含量。
2 结果
2.1 防护作用 肝胆宁与肝泰乐对CCl4中毒小鼠肝损伤的自由基清除剂均有一定的防护作用，而肝胆宁尚能使中毒小鼠肝脏GSH的含量稳定在正常范围内(表1)。
, 百拇医药
表1 防护实验各组小鼠SGST及肝脏GSH测定值 (n=12, x-±s)
, 百拇医药
P<0.01，方差分析，b与I相比，d与**相比。
2.2 治疗作用 肝胆宁对CCl4中毒小鼠肝脏自由基清除剂的消耗有明显的治疗作用，肝泰乐虽亦有一定的作用， 但不如肝胆宁显著，且肝泰乐不能使实验小鼠肝脏GSH含量稳定在正常范围内(见表2)。
表2 治疗实验各组小鼠SGST及肝脏GSH测定值
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P<0.01，方差分析，*与I相比，**与II比。
3 讨论
CCl4所致肝细胞损伤主要是通过生物体内产生过多的自由基-CL·和CCl3O·2引起细胞膜的破坏[6]，而GSH则是细胞清除过氧化物、抵御氧自由基损伤的重要物质[7]。另外，肝组织中的GSH还有较强的解毒功能，对肝细胞起保护作用。从本文复制出的CCl4致小鼠肝脏损伤的模型可见，CCl4组小鼠肝组织中GSH含量显著减少，这可能同CCl4中毒产生过多的自由基，消耗了大量的GSH，同时，肝细胞受损致使其合成GSH不足有关。另一方面，肝损伤时，SGST迅速释放入血中，致血清中SGST活性显著升高，灵敏地反映了肝细胞的受损程度。具养肝利胆功效作用的肝胆宁，其中生地、沙参、枸杞子、麦冬等，现代药理研究已证实该类药物对肝胆有显著的药理作用。本文实验结果说明，以该类药物组成的肝胆宁，除了能作用临床肝胆系统疾病外，更能有效地防护与治疗CCl4中毒小鼠所致的SGST活力升高及提高肝组织中GSH的含量，具明显的增强肝脏清除自由基的功能。SGST活力的降低则反映肝胆宁能防护肝细胞、减轻细胞膜损伤的程度。对照组肝泰乐虽亦能使中毒小鼠SGST活力降低，具一定的护肝作用，但不如肝胆宁作用明显，且其不能使肝组织中的GSH含量稳定在正常范围内。因此，肝泰乐对自由基的清除系统无明显的作用，对肝细胞的防护作用亦较弱。
, 百拇医药
4 参考文献1 胡翔鹄，朱兰香，马克惠，等. 肝炎后肝硬化与胆系结石. 中华医学杂志，1987；67(10)：578-579
2 赵晨阳，聂福华，宋继昌，等. 胆囊炎胆石症100例肝活检分析.临床肝胆病杂志，1988；4(1)：33-34
3 徐淑云，卞如氵兼，陈修，等. 药理实验方法学. 第2版，北京：人民卫生出版社，1991：179
4 胡大荣，李梦东. 血清谷胱甘肽-S转移酶活性的测定及其临床应用. 中华医学检验杂志，1987；10(5)：266-267
5 张平，孟宪钧. 分光光度法测定大鼠不同组织还原型谷胱甘肽含量. 中华实验外科杂志，1989；6(3)：141-143
6 李向泉，许国铭. 自由基清除剂在肝损伤治疗中的作用. 临床肝胆病杂志，1989；5(1)：8-9
7 张平，孟宪钧，李新建，等. 谷胱甘肽代谢障碍在多器官衰竭时组织损伤作用.中华实验外科杂志，1990；7(1)：23-24, 百拇医药(吴万垠,钟洁)
摘要目的：探讨复方中药肝胆宁护肝作用的机制。
方法：以肝胆宁作护肝药物，肝泰乐作对照，分别进行了防护与治疗四氯化碳中毒小鼠肝损伤的实验研究。
结果：肝胆宁能提高小鼠肝脏GSH的含量(防护实验组310.4±26.3比对照组118.5μg/100mg±13.5μg/100mg肝组织，n=12, P<0.01)，并能降低其SGST的活性，(防护实验组10.8U/L±2.6U/L比对照组70.3U/L±10.1U/L,n=12, P<0.01)，明显优于对照组。
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结论：肝胆宁通过增强小鼠体内自由基清除剂而达到护肝作用。
主题词 肝胆宁 中医 谷胱甘肽-S转移酶 谷胱甘肽 自由基清除剂
吴万垠, 钟洁.肝胆宁对小鼠肝脏谷胱甘肽及血清谷胱甘肽-S转移酶的影响.新消化病学杂志,1994;2(2):82-83
AIM To explore the mechanism of Chinese liver-protectingmedicine of Gandanning.
METHODS Gandanning was used as study drug and glucurolactoneas control. The expeniment were conducted respectively for prevention and treatment of mice liver damage caused by CCl4.
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RESULTS Gandanning can increase the ammount of glutathione in the liver of mice (for prevention group, 310.4±26.3, vs 118.5±13.5μg per 100mg of liver tissue, n=12, P<0.01) and also canreduce the abnormal activity of SGST (for prevention group, 10.8±2.6 vs 70.3±10.1 units per liter, n=12, P<0.01) Gandanning issignificantly superior to glucurolactone (P<0.01) in preventi on of mice liver from damage.
CONCLUSIONS The action of Chinese liverprotenting medicine of Gandanning is due to its increasing of the free radicals scavenger in the liver of mice.
, http://www.100md.com
Keywords candanning traditional Chinese medicine glutathionstransferase glutathione free radicials scavenger
Wu WY, Zhong J. The effect of Gandanning on liver glutathione and serum glutalithiones-transferase in mice. Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1994;2(2):82-83
肝脏疾病与胆道疾病之间存在着密切的关系[1，2]。我们用一贯煎为基方，组成养肝利胆的肝胆宁，治疗肝阴虚型肝胆疾病取得了较满意的效果，为了进一步证实肝胆宁的护肝功效，并探讨其对肝脏作用的机制，设计了本实验研究。
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1 材料和方法
1.1 动物 昆明种小白鼠，体重20g～25g，雌雄不拘，共96只。
1.2 药物及用量 肝胆宁主含生地10g，沙参10g，当归10g，枸杞子10g，麦冬10g，陈皮10g，首乌10g，甘草6g，由本院制剂室制备。用量每日生药14g/kg，体重；肝泰乐，每日0.05g/kg体重，由上海金山制药厂生产。以上用量均为成人用量的10倍[3]。四氯化碳溶液由徐州化学试剂厂出品。
1.3 实验方法 实验1：48只小鼠随机分成4组，每组12只，I为正常对照组，II为模型对照组，III为肝泰乐防护对照组，Ⅳ为肝胆宁防护组。Ⅲ, IV两组按上述剂量于3d内每日给药1次，待末次给药后6h，给II,III,IV组小鼠腹腔注射0.2% CCl4豆油溶液10mL/kg体重,Ⅰ组小鼠则腹腔注射10mL/kg体重豆油溶液。继之再禁食16h，断头取血标本，以备测SGST，并迅速取肝脏置0生理盐水中漂洗，供测GSH。
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实验2：分组同实验1，但III, IV均为治疗组。II、III、 IV组小鼠按10mg/kg体重腹腔注射0.2% CCl4豆油溶液，II组作中毒对照，III, IV组注射后立即分别灌服肝泰乐与肝胆宁，Ⅰ, II组分别灌服等体积生理盐水。禁食16h，断头处死，标本采取方法同实验1。
1.4 测定项目 以胡大荣法[4]测血清谷胱甘肽-S转移酶(SGST)；分光光度法[5]测肝组织还原型谷胱甘肽(GSH)含量。
2 结果
2.1 防护作用 肝胆宁与肝泰乐对CCl4中毒小鼠肝损伤的自由基清除剂均有一定的防护作用，而肝胆宁尚能使中毒小鼠肝脏GSH的含量稳定在正常范围内(表1)。
, 百拇医药
表1 防护实验各组小鼠SGST及肝脏GSH测定值 (n=12, x-±s)
| 组别 | SGST(μ/L) | GSH(μg/100mg肝) |
| I | 6.8±3.9 | 306.7±18.9 |
| II | 70.3±10.1b | 118.5±13.5b |
| III | 50.3±10.5bd | 126.7±14.6b |
| IV | 10.8±2.6d | 310.4±26.3b |
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P<0.01，方差分析，b与I相比，d与**相比。
2.2 治疗作用 肝胆宁对CCl4中毒小鼠肝脏自由基清除剂的消耗有明显的治疗作用，肝泰乐虽亦有一定的作用， 但不如肝胆宁显著，且肝泰乐不能使实验小鼠肝脏GSH含量稳定在正常范围内(见表2)。
表2 治疗实验各组小鼠SGST及肝脏GSH测定值
| 组别 | SGST(μ/L) | GSH(μg/100mg肝) |
| I | 9.3±4.1 | 296.8±17.5 |
| II | 80.6±11.5b | 109.4±11.2b |
| III | 51.9±4.8bd | 113.4±22.4b |
| IV | 11.7±4.5d | 283.5±13.2d |
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P<0.01，方差分析，*与I相比，**与II比。
3 讨论
CCl4所致肝细胞损伤主要是通过生物体内产生过多的自由基-CL·和CCl3O·2引起细胞膜的破坏[6]，而GSH则是细胞清除过氧化物、抵御氧自由基损伤的重要物质[7]。另外，肝组织中的GSH还有较强的解毒功能，对肝细胞起保护作用。从本文复制出的CCl4致小鼠肝脏损伤的模型可见，CCl4组小鼠肝组织中GSH含量显著减少，这可能同CCl4中毒产生过多的自由基，消耗了大量的GSH，同时，肝细胞受损致使其合成GSH不足有关。另一方面，肝损伤时，SGST迅速释放入血中，致血清中SGST活性显著升高，灵敏地反映了肝细胞的受损程度。具养肝利胆功效作用的肝胆宁，其中生地、沙参、枸杞子、麦冬等，现代药理研究已证实该类药物对肝胆有显著的药理作用。本文实验结果说明，以该类药物组成的肝胆宁，除了能作用临床肝胆系统疾病外，更能有效地防护与治疗CCl4中毒小鼠所致的SGST活力升高及提高肝组织中GSH的含量，具明显的增强肝脏清除自由基的功能。SGST活力的降低则反映肝胆宁能防护肝细胞、减轻细胞膜损伤的程度。对照组肝泰乐虽亦能使中毒小鼠SGST活力降低，具一定的护肝作用，但不如肝胆宁作用明显，且其不能使肝组织中的GSH含量稳定在正常范围内。因此，肝泰乐对自由基的清除系统无明显的作用，对肝细胞的防护作用亦较弱。
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4 参考文献1 胡翔鹄，朱兰香，马克惠，等. 肝炎后肝硬化与胆系结石. 中华医学杂志，1987；67(10)：578-579
2 赵晨阳，聂福华，宋继昌，等. 胆囊炎胆石症100例肝活检分析.临床肝胆病杂志，1988；4(1)：33-34
3 徐淑云，卞如氵兼，陈修，等. 药理实验方法学. 第2版，北京：人民卫生出版社，1991：179
4 胡大荣，李梦东. 血清谷胱甘肽-S转移酶活性的测定及其临床应用. 中华医学检验杂志，1987；10(5)：266-267
5 张平，孟宪钧. 分光光度法测定大鼠不同组织还原型谷胱甘肽含量. 中华实验外科杂志，1989；6(3)：141-143
6 李向泉，许国铭. 自由基清除剂在肝损伤治疗中的作用. 临床肝胆病杂志，1989；5(1)：8-9
7 张平，孟宪钧，李新建，等. 谷胱甘肽代谢障碍在多器官衰竭时组织损伤作用.中华实验外科杂志，1990；7(1)：23-24, 百拇医药(吴万垠,钟洁)