乙型慢活肝患者肝组织内乙肝病毒抗原表达与病变程度的关系
项目负责人:乔汉臣，男。1942-08-17生。河南省许昌人，汉族。1965年新乡医学院毕业。副教授，传染科主任，欧州科学编辑学会会员。学报编辑部主任，副主编。[河南省卫辉市(453100)，电话：0373-44216]。(1993-10-25 收稿 1994-04-16 修回)
摘要目的：通过肝穿刺病理学检查，研究慢活肝患者肝组织内HBsAg及HBcAg的表达与肝脏病理损害程度的关系。
方法：40例乙型慢活肝患者血清HBV标志物检测，采用固相放射免疫法，肝穿刺活检标本采用HE及Masson染色法检查肝组织病理损害程度。肝组织内HBsAg及HBcAg表达的检测采用双桥PAP法。
结果：肝组织病理损害较重的中型及重型慢活肝患者，肝组织内HBsAg表达多呈胞质包涵体型及膜型(74.3%，26/35)；5例轻型慢活肝中4例为均质型，无1例属胞质包涵体型者。中型慢活肝患者肝细胞内HBcAg表达半数呈弥漫型和膜型(51.5%，16/31)；4例重型慢活肝患者肝细胞内HBcAg表达均属弥漫型和膜型，轻型慢活肝无1例呈此两种表达者。
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结论：肝细胞内HBsAg表达呈胞质包涵体型和膜型，HBcAg呈弥漫型和膜型者，由于易受免疫攻击，肝脏病理损害较重。单纯核型HBcAg者肝损害轻，且少见。
主题词 慢性活动性肝炎 乙型肝炎病毒 免疫病理学 肝组织
乔汉臣, 孙屹峰, 李灵敏, 高文军, 毛乾国, 张光文, 刀文彬.乙型慢活肝患者肝组织内乙肝病毒抗原表达与病变程度的关系.新消化病学杂志,1994;2(3):152-153
AIM The expressions of HBsAg and HBcAg in liver tissues and the relationship between the expression patterns and pathological lesions of liver tissues were studied.
, 百拇医药
METHODS Hepatits B virus markers in serum were determined by solid phase radioimmunoassay in 40 patients with chronic active hepatits B (CAH). The HE stain and masson stain were used in examination of liver pathological changes. The expressions of HBsAg and HBcAg in hepatic cells were determined using double-bridge PAP method.
RESULTS The expression of HBsAg in hepatic cells mostly was mem branous pattern and cytoplasmic inclussion pattern in middle and severe CAH (74.3%, 26/35), and 4 patients were diffusion pattern in 5 patients with mild CAH (80%). The expression of HBcAg in hepatic cells was diffusion pattern and membranous pattern in about half patients with middle CAH (51.5%, 16/?31). The HBcAg expression of 4 patients was diffusion and membranous patterns in 5 patients with severe CAH, but the diffusion and membranous patterns of HBcAg expression weren＇t observed in 4 mild CAH patients.
, 百拇医药
CONCLUSIONS In CAH patients with cytoplasmic inclusion pattern and membranous pattern of HBsAg expression, and with diffusion and membranous patterns of HBcAg expression, the pathological lesions of liver are sevre. In the patients with nuclear pattern of HBcAg, the liver lesions are slighter and scarcer. It is suggested that HBsAg and HBcAg are target antigen of immune competent cells.
Keywords chronic active hepatitis viral hepatitis Bimmunopathology liver tissue
, 百拇医药
Qiao HC, Sun YF, Li LM, Gao WJ, Mao QG, Zhang GW, Dao WB. The relationship between the expression of HBV antigen and patho-logical lesions of liver tissues in patients with chronic active hepatits B. Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1994;2(3):152-153
近几年来，在乙型病毒性肝炎的发病机制中，乙肝病毒抗原在肝细胞内表达模式与肝脏病理损害之间的关系己受到重视。采用免疫病理法研究肝穿刺活检标本中HBsAg及HBcAg的分布情况虽有报道，但所得结果存在着差异，且HBV抗原表达模式的分型方法不同。我们从1993年1月起对40例临床诊断为乙型慢活肝的患者肝内HBsAg及HBcAg的表达与病变程度的关系进行了研究，现报告如下。
1 对象和方法
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1.1 对象 40例均为男性乙型慢活肝患者。年龄20岁～60岁，病史均在6mo以上，均经甲肝、乙肝、丙肝、丁肝病原学检查证实为单纯HBV感染，临床症状及体征符合慢性肝炎经过。临床诊断依据1990年上海肝炎会议的诊断标准。全部病例均经过肝穿刺组织切片病理学证实。
1.2 HBV血清标志检测 血清抗HBV IgM、抗HDV均采用山东潍坊3V诊断技术公司商品化试剂盒，ELISA法检测；血清抗HCV检测采用上海实业科华生物技术有限公司商品试剂盒，ELISA法；血清HBVM检测采用潍坊3V诊断技术公司商品化试剂盒，固相放射免疫法(SP-RIA)法。肝功能诸项结果依据国内统一标准，由我院检验科采用COBAS MIRA全自动分析仪检测。
1.3 肝组织免疫病理学检查 采用Menghin吸入式肝脏穿刺活检针，双人操作，1s肝穿刺技术，取材均包括3个以上肝小叶，标本经中性福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片，HE及Masson染色。肝组织内HBsAg及HBcAg检测采用Dako公司试剂盒双桥PAP法。
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2 结果
2.1 血清HBV M 40例乙型慢活肝患者均有轻重不同的肝炎症状，肝功能示ALT和(或)AST明显异常，出现黄疸者29例(72.5%)。除1例(2.5%)血清HBV M阴性外，39例血清HBsAg和(或)抗-HBC均阳性。HBeAg阳性者35例(87.5%)，抗-HBe阳性者4例(10%)。
2.2 肝组织病理学检查 40例患者肝组织病理学检查均符合慢性活动性肝炎病理改变。其中属轻型慢活肝者5例，中型慢活肝病变者31例，重型慢活肝病变者4例。
2.3 肝组织内HBsAg表达 肝组织内HBsAg阳性者33例(825%)，其表达模式分为胞质匀质型、胞质包涵体型、膜型3种。HBsAg表达与病变程度的关系见表1。
表1 乙型慢活肝40例肝组织内HBsAg表达与病变的关系 n (%)
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2.4 肝组织内HBcAg表达
肝组织内HBcAg阳性者23例(57。5%)，其中HBsAg及HBcAg均阳性者18例，占HBcAg阳性病例的78。3%。肝组织内HBcAg表达模式分为核型、过渡型、弥漫型及膜型4种。HBcAg表达与病变的关系见表2。
表2 乙型慢活肝40例肝组织内HBcAg表达与病变的关系
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3 讨论
3.1 血清与肝组织HBV的关系 本组临床病例首先经SP-RIA法初筛外周血HBV M确立病原学诊断，在此基础上进行肝组织学检查(其中血清HBV M阴性者肝组织内HBV M阳性1例)。血清HBV M阳性者肝组织内HBsAg阳性率为84.6%，HBcAg阳性率为57.5%，与国内此项研究结果相一致[1]。本组资料表明，血清HBV M检测虽然简单方便，且与肝活检资料高度相关，但血清HBV M(如HBsAg)的出现与消失与肝组织内存在的HBsAg时相并不同步，故前者不能表示肝组织内HBV感染的真实情况。临床肝功能诸项指标的检测方法虽不断改进，但机体其他病理因素的干扰仍不可避免，故不能完全反映肝脏HBV感染后免疫损伤的程度，而肝活检组织内HBV M的检查则可弥补以上之不足，且可评估预后及考证治疗效果。
3.2 肝组内HBsAg表达与病变的关系 本组资料表明，肝组织内HBsAg呈胞质包涵体型和膜型者肝脏病理损害较重，多见于中型及重型慢活肝患者。由此推测，肝内膜型及胞质包涵体型HBsAg可能参于免疫攻击的靶抗原成分的构成，此与国内部分学者的研究结果基本一致[2]。但本组病例中尚发现肝细胞内呈均质型分布的HBsAg患者中有3例为中型慢活肝，此型表达之HBsAg是否也是靶抗原成分之一，尚待进一步研究。
, 百拇医药
3.3 肝组织HBcAg表达与病变的关系 本研究结果表明，肝组织内HBcAg呈弥漫型和膜型分布的患者，病毒复制活跃，肝脏病理损害的程度较重，临床上多属中型及重型慢活肝，此结论支持HBcAg浆膜型表达是免疫攻击的靶抗原，且与慢活肝的病变严重程度有关[3,4]。近年来国内学者对HBcAg膜型及核型表达进行了一些研究[5]，但对HBcAg的膜型与核型之间的关系探讨较少。我们通过肝组织切片双桥PAP法，将HBcAg在肝细胞内的分布分为4型，此种分型方法国内尚未见报道。我们认为这种分型可阐明HBcAg由核型向膜型转化或过渡，从而使临床慢活肝患者病情加重。但此种演变的始动因素尚待进一步研究，此种演变能否逆转也无结论。进一步的研究可能有助于阐明慢活肝和慢迁肝的内在关系。肝组织内HBcAg的表达模式的研究结果表明HBcAg浆膜型表达，并非是免疫攻击的唯一靶抗原。
4 参考文献1 郝连杰，张永源.乙型肝炎肝组织内HBV抗原表达与分布及其意义.中华内科杂志，1986；25(3)：162-164
, http://www.100md.com
2 胡克勤，宋佩辉，郝连杰.慢性肝病患者肝组织内HBV抗原表达与肝细胞坏死的关系的初步探讨.
中华病理学杂志，1987；16(2)：86-88
3 Ray MB. Differential distribution of hepatitis B surface antigen and hepatitis B patients.
Gastroenterology, 1976;71：462-473
4 谭承项，蒋大明，郑铣，等. 乙型肝炎肝组织内HBcAg的免疫组化研究.中华病理学杂志，1987；16(2)：90-93
5 葛沅，李佩娟，吴秀兰，等. 小儿乙型病毒性肝炎肝内HBV抗原特点与临床.北京医学，1993；15(2)：72-74, http://www.100md.com(乔汉臣,孙屹峰,李灵敏,高文军,毛乾国,张光文,刀文彬)
摘要目的：通过肝穿刺病理学检查，研究慢活肝患者肝组织内HBsAg及HBcAg的表达与肝脏病理损害程度的关系。
方法：40例乙型慢活肝患者血清HBV标志物检测，采用固相放射免疫法，肝穿刺活检标本采用HE及Masson染色法检查肝组织病理损害程度。肝组织内HBsAg及HBcAg表达的检测采用双桥PAP法。
结果：肝组织病理损害较重的中型及重型慢活肝患者，肝组织内HBsAg表达多呈胞质包涵体型及膜型(74.3%，26/35)；5例轻型慢活肝中4例为均质型，无1例属胞质包涵体型者。中型慢活肝患者肝细胞内HBcAg表达半数呈弥漫型和膜型(51.5%，16/31)；4例重型慢活肝患者肝细胞内HBcAg表达均属弥漫型和膜型，轻型慢活肝无1例呈此两种表达者。
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结论：肝细胞内HBsAg表达呈胞质包涵体型和膜型，HBcAg呈弥漫型和膜型者，由于易受免疫攻击，肝脏病理损害较重。单纯核型HBcAg者肝损害轻，且少见。
主题词 慢性活动性肝炎 乙型肝炎病毒 免疫病理学 肝组织
乔汉臣, 孙屹峰, 李灵敏, 高文军, 毛乾国, 张光文, 刀文彬.乙型慢活肝患者肝组织内乙肝病毒抗原表达与病变程度的关系.新消化病学杂志,1994;2(3):152-153
AIM The expressions of HBsAg and HBcAg in liver tissues and the relationship between the expression patterns and pathological lesions of liver tissues were studied.
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METHODS Hepatits B virus markers in serum were determined by solid phase radioimmunoassay in 40 patients with chronic active hepatits B (CAH). The HE stain and masson stain were used in examination of liver pathological changes. The expressions of HBsAg and HBcAg in hepatic cells were determined using double-bridge PAP method.
RESULTS The expression of HBsAg in hepatic cells mostly was mem branous pattern and cytoplasmic inclussion pattern in middle and severe CAH (74.3%, 26/35), and 4 patients were diffusion pattern in 5 patients with mild CAH (80%). The expression of HBcAg in hepatic cells was diffusion pattern and membranous pattern in about half patients with middle CAH (51.5%, 16/?31). The HBcAg expression of 4 patients was diffusion and membranous patterns in 5 patients with severe CAH, but the diffusion and membranous patterns of HBcAg expression weren＇t observed in 4 mild CAH patients.
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CONCLUSIONS In CAH patients with cytoplasmic inclusion pattern and membranous pattern of HBsAg expression, and with diffusion and membranous patterns of HBcAg expression, the pathological lesions of liver are sevre. In the patients with nuclear pattern of HBcAg, the liver lesions are slighter and scarcer. It is suggested that HBsAg and HBcAg are target antigen of immune competent cells.
Keywords chronic active hepatitis viral hepatitis Bimmunopathology liver tissue
, 百拇医药
Qiao HC, Sun YF, Li LM, Gao WJ, Mao QG, Zhang GW, Dao WB. The relationship between the expression of HBV antigen and patho-logical lesions of liver tissues in patients with chronic active hepatits B. Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1994;2(3):152-153
近几年来，在乙型病毒性肝炎的发病机制中，乙肝病毒抗原在肝细胞内表达模式与肝脏病理损害之间的关系己受到重视。采用免疫病理法研究肝穿刺活检标本中HBsAg及HBcAg的分布情况虽有报道，但所得结果存在着差异，且HBV抗原表达模式的分型方法不同。我们从1993年1月起对40例临床诊断为乙型慢活肝的患者肝内HBsAg及HBcAg的表达与病变程度的关系进行了研究，现报告如下。
1 对象和方法
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1.1 对象 40例均为男性乙型慢活肝患者。年龄20岁～60岁，病史均在6mo以上，均经甲肝、乙肝、丙肝、丁肝病原学检查证实为单纯HBV感染，临床症状及体征符合慢性肝炎经过。临床诊断依据1990年上海肝炎会议的诊断标准。全部病例均经过肝穿刺组织切片病理学证实。
1.2 HBV血清标志检测 血清抗HBV IgM、抗HDV均采用山东潍坊3V诊断技术公司商品化试剂盒，ELISA法检测；血清抗HCV检测采用上海实业科华生物技术有限公司商品试剂盒，ELISA法；血清HBVM检测采用潍坊3V诊断技术公司商品化试剂盒，固相放射免疫法(SP-RIA)法。肝功能诸项结果依据国内统一标准，由我院检验科采用COBAS MIRA全自动分析仪检测。
1.3 肝组织免疫病理学检查 采用Menghin吸入式肝脏穿刺活检针，双人操作，1s肝穿刺技术，取材均包括3个以上肝小叶，标本经中性福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片，HE及Masson染色。肝组织内HBsAg及HBcAg检测采用Dako公司试剂盒双桥PAP法。
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2 结果
2.1 血清HBV M 40例乙型慢活肝患者均有轻重不同的肝炎症状，肝功能示ALT和(或)AST明显异常，出现黄疸者29例(72.5%)。除1例(2.5%)血清HBV M阴性外，39例血清HBsAg和(或)抗-HBC均阳性。HBeAg阳性者35例(87.5%)，抗-HBe阳性者4例(10%)。
2.2 肝组织病理学检查 40例患者肝组织病理学检查均符合慢性活动性肝炎病理改变。其中属轻型慢活肝者5例，中型慢活肝病变者31例，重型慢活肝病变者4例。
2.3 肝组织内HBsAg表达 肝组织内HBsAg阳性者33例(825%)，其表达模式分为胞质匀质型、胞质包涵体型、膜型3种。HBsAg表达与病变程度的关系见表1。
表1 乙型慢活肝40例肝组织内HBsAg表达与病变的关系 n (%)
| 病理学类型 | n | HBsAg(-) | 匀质型 | 胞质包涵体型 | 膜型 |
| 轻型 | 5 | 1(20.0) | 4(80.0) | 0 (0.0) | 0 (0.0) |
| 中型 | 31 | 6(19.3) | 3(9.7) | 8(25.8) | 14(45.2) |
| 重型 | 4 | 0 (0.0) | 0 (0.0) | 2(50.0) | 2(50.0) |
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2.4 肝组织内HBcAg表达
肝组织内HBcAg阳性者23例(57。5%)，其中HBsAg及HBcAg均阳性者18例，占HBcAg阳性病例的78。3%。肝组织内HBcAg表达模式分为核型、过渡型、弥漫型及膜型4种。HBcAg表达与病变的关系见表2。
表2 乙型慢活肝40例肝组织内HBcAg表达与病变的关系
| 病理学类型 | n | HBcAg(-) | 核型 | 过渡型 | 弥漫型 | 膜型 |
| 轻型 | 5 | 4(80.0) | 1 | 0 (0.0) | 0 (0.0) | 0 (0.0) |
| 中型 | 31 | 13(41.9) | 1 | 1 | 5(16.1) | 11(35.5) |
| 重型 | 4 | 0 (0.0) | 0 (0.0) | 0 (0.0) | 3(75.0) | 1 |
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3 讨论
3.1 血清与肝组织HBV的关系 本组临床病例首先经SP-RIA法初筛外周血HBV M确立病原学诊断，在此基础上进行肝组织学检查(其中血清HBV M阴性者肝组织内HBV M阳性1例)。血清HBV M阳性者肝组织内HBsAg阳性率为84.6%，HBcAg阳性率为57.5%，与国内此项研究结果相一致[1]。本组资料表明，血清HBV M检测虽然简单方便，且与肝活检资料高度相关，但血清HBV M(如HBsAg)的出现与消失与肝组织内存在的HBsAg时相并不同步，故前者不能表示肝组织内HBV感染的真实情况。临床肝功能诸项指标的检测方法虽不断改进，但机体其他病理因素的干扰仍不可避免，故不能完全反映肝脏HBV感染后免疫损伤的程度，而肝活检组织内HBV M的检查则可弥补以上之不足，且可评估预后及考证治疗效果。
3.2 肝组内HBsAg表达与病变的关系 本组资料表明，肝组织内HBsAg呈胞质包涵体型和膜型者肝脏病理损害较重，多见于中型及重型慢活肝患者。由此推测，肝内膜型及胞质包涵体型HBsAg可能参于免疫攻击的靶抗原成分的构成，此与国内部分学者的研究结果基本一致[2]。但本组病例中尚发现肝细胞内呈均质型分布的HBsAg患者中有3例为中型慢活肝，此型表达之HBsAg是否也是靶抗原成分之一，尚待进一步研究。
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3.3 肝组织HBcAg表达与病变的关系 本研究结果表明，肝组织内HBcAg呈弥漫型和膜型分布的患者，病毒复制活跃，肝脏病理损害的程度较重，临床上多属中型及重型慢活肝，此结论支持HBcAg浆膜型表达是免疫攻击的靶抗原，且与慢活肝的病变严重程度有关[3,4]。近年来国内学者对HBcAg膜型及核型表达进行了一些研究[5]，但对HBcAg的膜型与核型之间的关系探讨较少。我们通过肝组织切片双桥PAP法，将HBcAg在肝细胞内的分布分为4型，此种分型方法国内尚未见报道。我们认为这种分型可阐明HBcAg由核型向膜型转化或过渡，从而使临床慢活肝患者病情加重。但此种演变的始动因素尚待进一步研究，此种演变能否逆转也无结论。进一步的研究可能有助于阐明慢活肝和慢迁肝的内在关系。肝组织内HBcAg的表达模式的研究结果表明HBcAg浆膜型表达，并非是免疫攻击的唯一靶抗原。
4 参考文献1 郝连杰，张永源.乙型肝炎肝组织内HBV抗原表达与分布及其意义.中华内科杂志，1986；25(3)：162-164
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2 胡克勤，宋佩辉，郝连杰.慢性肝病患者肝组织内HBV抗原表达与肝细胞坏死的关系的初步探讨.
中华病理学杂志，1987；16(2)：86-88
3 Ray MB. Differential distribution of hepatitis B surface antigen and hepatitis B patients.
Gastroenterology, 1976;71：462-473
4 谭承项，蒋大明，郑铣，等. 乙型肝炎肝组织内HBcAg的免疫组化研究.中华病理学杂志，1987；16(2)：90-93
5 葛沅，李佩娟，吴秀兰，等. 小儿乙型病毒性肝炎肝内HBV抗原特点与临床.北京医学，1993；15(2)：72-74, http://www.100md.com(乔汉臣,孙屹峰,李灵敏,高文军,毛乾国,张光文,刀文彬)