胃溃灵免疫调节作用的实验研究
湖北中医学院附属医院消化内科 湖北省 武汉市 430061
项目负责人 甘爱萍,430061,湖北省 武汉市,湖北中医学院附属医院消化内科 收搞日期 1995-03-18 接收日期 1995-07-03
Experimental studies on immunoregulatory function of weikuiling
Ai-Ping Gan and SongYe
Department of Gastroenterology, Affiliated Hospital of Hubei Traditional Chinese Medical College, Wuhan 430061 China
, http://www.100md.com
Abstract
AIMS To study the immunologic function of Chinese medicine weikuiling in experimental mice.
METHODS NIH white mice were randomly divided into groups. The serum agglutination test was used to detect the serum antibody level of the mice. Yang's and Li's methods were used to detect the serum lysozyme contents and the phagocytosis index of mononuclear-macrophage.
, 百拇医药
RESULTS Compared with the control group, the serum antibody level of the weikuiling group was increased and was positively correlated to the doses. Statistical differences were remarkable (P<0.01 or P<0.05). The serum lysozyme contents in group of the different doses of weikuiling were improved obviously (P<0.01 or P<0.01). So were ranitidine group (P<0.01 or P<0.01). Moreover, weikuiling is better than ranitidine. The phagocytosis index of mononuclear-macrophage in weikuiling group was higher than that of normal group(P<0.05 or P<0.01).
, http://www.100md.com
CONCLUSIONS Weikuiling can regulate and improve the immunologic function of experimental animals.
Keywords weikuiling traditional Chinese medicine immunologic adjuvants
Gan AP，Ye S. Experimental studies on immunoregulatory function of weikuiling.Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1996；4(3)：125-127
摘要
目的 探讨中药胃溃灵对实验性小鼠的免疫调节作用.
, 百拇医药
方法 将NIH系小鼠随机分组实验. 小鼠血清抗体效价水平采用血清凝集素测定法. 血清溶菌酶含量用杨贵贞法检测，单核巨噬细胞用李仪奎法
检测.
结果 与正常对照组比较胃溃灵组能显著提高小鼠血清抗体效价水平(P<0.01或P<0.05)且抗体效价与药物剂量成正比. 与生理盐水组比较，胃溃灵组、雷尼替丁组均能明显提高小鼠血清溶菌酶含量(P<0.01或P<0.01)，且胃溃灵组优于雷尼替丁组. 胃溃灵组小鼠单核巨噬细胞吞噬指数明显高于生理盐水组(P<0.05或P<0.01).
结论 胃溃灵能调节实验动物的免疫功能，有免疫增强作用，对治疗消化性溃疡和抗溃疡复发有着重要意义.
胃溃灵是我院魏喜保教授根据多年的临床经验，研制的治疗消化性溃疡(PU)的一种复方中药制剂.(半夏、黄连、白芨等)通过大量临床及实验研究，该药具有抑制基础胃酸分泌、降低其胃蛋白酶活性、促进溃疡患者胃粘膜分泌前列腺素E2(PGE2)，补充锌元素，保护胃粘膜屏障，消除幽门螺杆菌(Hp)，抑制溃疡形成，减少复发等作用，其安全范围广，无任何毒副作用.临床治疗PU，止痛迅速、愈合率高，总有效率为95%.本文在魏喜保教授指导下，主要探讨胃溃灵在动物实验研究中，对部分免疫功能—血清抗体形成、血清溶菌酶含量、单核巨噬细胞吞噬功能变化等方面的影响.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 胃溃灵冲剂：本院药厂加工生产，批号930428，每包10g，含原生药16.6g.雷尼替丁(Ran)：浙江康恩贝制药公司出品，批号920735，每片150mg.盐酸左旋咪唑片：广东江门制药厂出品，批号910662，每片25mg.注射用环磷酰胺：上海第十二制药厂产品，批号920404，每瓶200mg.20%四君子汤：本院中心实验室药化组提供.
动物：昆明种NIH系小白鼠，体重18-22g，♀♂各半，由湖北省医学科学院实验动物室提供，合格证号：鄂动管证字012.
1.2 方法 小鼠血清抗体效价形成的检测.实验取84只小鼠，随机分为7组，每组12只，第1组生理盐水组(25ml/kg)，第2组为12g/kg胃溃灵冲剂组，第3组为6g/kg胃溃灵冲剂组，第4组为3g/kg胃溃灵冲剂组，第5组为5g/kg四君子汤组，第6组为30mg/kg Ran组，第7组为40mg/kg环磷酰胺组.1-6组小白鼠按上述剂量连续灌胃12d，第7组于免疫当日起连续皮下注射3d.首先，完成10%和0.5%绵羊红细胞悬液(抗原)的制备.7组动物均在给药的第5天同时用10%绵羊红细胞液0.5ml腹腔注射免疫1次，免疫后第7天采血分离血清、灭活、测抗体效价.根据致敏动物血凝素(循环抗体之一)的水平，可以通过血球凝集程度来检测的原理，我们采用血清凝集素测定法[1].在小鼠免疫后第7天，眼球采血：每只取0.5ml.将每只小鼠的血液各放入1只试管内，室温下放置1h，用长针将凝固的血与管壁剥离，使血清充分渗出，然后以2000rpm离心10min，吸取上层血清，置56℃水浴中灭活30min.用生理盐水将血清作对倍稀释.将不同稀释度的血清分别置于微量试验板(8×12孔)，每孔0.1ml，再加入0.5%绵羊红细胞悬液0.1ml，混匀，并置37℃孵箱温育过夜.观察血球凝集程度，一般分、、、+、-之五级记录，以为准计算每组小鼠抗体效价.
, http://www.100md.com
小鼠血清溶菌酶含量的检测.取72只小鼠，随机分为7组，每组10-11只.第一组生理盐水组(25mg/kg)，第2组为12g/kg胃溃灵冲剂组，第3组为6g/kg胃溃灵冲剂组，第4组为3g/kg胃溃灵冲剂组，第5组为30mg/kgRan组，第6组为5g/kg四君子汤组，第7组为5mg/kg左旋咪唑组，每组动物按上述剂量连续灌胃10d，后采血分离血清，用平板打孔法测定溶菌酶含量(杨贵贞法)[2].
小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的检测.实验取30只小鼠，随机分为3组，每组10只.第1组为生理盐水组(25mg/kg)，第2组为6g/kg胃溃灵冲剂组，第3组为3g/kg胃溃灵冲剂组.每组动物按上述剂量连续灌胃9d，在末次给药1h后，尾静脉注射墨汁稀释液0.1ml/10g，然后分别在3min及12min从眼眶后静脉丛提取血30μl于试管中，加0.1mol/L Na2CO3混均匀，用721分光光度计(波长620nm)比色，测定不同时间血炭浓度，按李仪奎等介绍的方法[3]计算血炭清除速度，以吞噬指数的大小代表吞噬功能的变化.
, 百拇医药
2 结果
2.1 胃溃灵对小鼠血清抗体的影响 表1.
表1 各组小鼠血清抗体效价 (x-±s)
, 百拇医药
aP<0.05，bP<0.01,与生理盐水组比较;dP<0.01(抑制).
结果表明，各胃溃灵冲剂组与生理盐水组比较，三组均能提高小白鼠血清抗体水平，经统计学处理P<0.01或P<0.05，有非常显著差异，抗体效价与药物剂量成正比.Ran组与四君子汤组水平也比生理盐水组显著提高，经统计学处理P<0.01.免疫抑制剂环磷酰胺组能明显抑制小白鼠血清抗体形成，与生理盐水组比较有非常显著性差异P<0.01.
2.2 胃溃灵对血清溶菌酶含量的影响 表2.
表2 各组小鼠血清溶菌酶的测定结果 (x-±S,mg/L)
, 百拇医药
bP<0.01，与生理盐水组比较;dP<0.01，与Ran组比较.
结果经t检验和方差分析后表明，不同剂量的胃溃灵冲剂组，四君子汤组，Ran组血清溶菌酶含量均比生理盐水组明显提高，经统计学处理P<0.01，有非常显著性差异.同时还发现，各胃溃灵冲剂组与Ran组比较溶菌酶含量明显提高，统计分析P<0.01，有非常显著性差异.免疫增强剂左旋咪唑组明显提高了小白鼠血清溶菌酶含量，与生理盐水组比较P<0.01，有非常显著性差异.上述提示了胃溃灵能明显提高小白鼠血清溶菌酶含量，且优于Ran组.
2.3 胃溃灵对单核巨噬细胞功能的影响 表3.
表3 各组小鼠单核巨噬细胞吞噬指数的测定结果 (x-±s)
, 百拇医药
aP<0.05，bP<0.01,与生理盐水组比较.
结果表明，各胃溃灵冲剂组小白鼠巨噬细胞吞噬指数明显高于生理盐水组，统计学分析P<0.05和P<0.01，且胃溃灵6g/kg组优于胃溃灵3g/kg组，与剂量成正比，提示胃溃灵能增强单核巨噬细胞的吞噬功能.
3 讨论
我们在胃溃灵免疫功能的临床研究中已得知，该药能调节消化性溃疡患者胃液中IgG,sIgA水平，有免疫增强作用，调节机体免疫功能.本文从动物药理实验方面进一步证实了胃溃灵的免疫调节功能.我们知道抗体是免疫应答的主要产物，主要存在于体液中，其重要作用是介导机体体液免疫，可中和细菌外毒素，抑制细菌吸附、吞噬、溶解、杀伤细菌.溶菌酶则有使细菌细胞壁表面失去坚韧性，使细菌发生低渗性裂解，从而杀伤细菌.而单核巨噬细胞本身就是一种免疫细胞，可吞噬和杀伤多种病原微生物，处理损伤的细胞，是机体非特性免疫的重要因素，还分泌多种生物活性物质如蛋白酶、凝血因子、补体成分、前列腺素E2(PGE2)等，并涉及免疫调节.我们的实验正好表明，胃溃灵就能明显提高实验动物的血清抗体水平，增加溶菌酶含量，增强单核巨噬细胞的吞噬功能，有免疫增强作用.
4 参考文献
1 徐淑云，卞如濂，陈修.药理学实验方法.北京：人民卫生出版社，1981：944-945
2 杨贵贞.医学免疫学.长春：吉林人民出版社，1980：469-470
3 李仪奎，王钦茂.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1991：157-158, 百拇医药(甘爱萍,叶松)
项目负责人 甘爱萍,430061,湖北省 武汉市,湖北中医学院附属医院消化内科 收搞日期 1995-03-18 接收日期 1995-07-03
Experimental studies on immunoregulatory function of weikuiling
Ai-Ping Gan and SongYe
Department of Gastroenterology, Affiliated Hospital of Hubei Traditional Chinese Medical College, Wuhan 430061 China
, http://www.100md.com
Abstract
AIMS To study the immunologic function of Chinese medicine weikuiling in experimental mice.
METHODS NIH white mice were randomly divided into groups. The serum agglutination test was used to detect the serum antibody level of the mice. Yang's and Li's methods were used to detect the serum lysozyme contents and the phagocytosis index of mononuclear-macrophage.
, 百拇医药
RESULTS Compared with the control group, the serum antibody level of the weikuiling group was increased and was positively correlated to the doses. Statistical differences were remarkable (P<0.01 or P<0.05). The serum lysozyme contents in group of the different doses of weikuiling were improved obviously (P<0.01 or P<0.01). So were ranitidine group (P<0.01 or P<0.01). Moreover, weikuiling is better than ranitidine. The phagocytosis index of mononuclear-macrophage in weikuiling group was higher than that of normal group(P<0.05 or P<0.01).
, http://www.100md.com
CONCLUSIONS Weikuiling can regulate and improve the immunologic function of experimental animals.
Keywords weikuiling traditional Chinese medicine immunologic adjuvants
Gan AP，Ye S. Experimental studies on immunoregulatory function of weikuiling.Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1996；4(3)：125-127
摘要
目的 探讨中药胃溃灵对实验性小鼠的免疫调节作用.
, 百拇医药
方法 将NIH系小鼠随机分组实验. 小鼠血清抗体效价水平采用血清凝集素测定法. 血清溶菌酶含量用杨贵贞法检测，单核巨噬细胞用李仪奎法
检测.
结果 与正常对照组比较胃溃灵组能显著提高小鼠血清抗体效价水平(P<0.01或P<0.05)且抗体效价与药物剂量成正比. 与生理盐水组比较，胃溃灵组、雷尼替丁组均能明显提高小鼠血清溶菌酶含量(P<0.01或P<0.01)，且胃溃灵组优于雷尼替丁组. 胃溃灵组小鼠单核巨噬细胞吞噬指数明显高于生理盐水组(P<0.05或P<0.01).
结论 胃溃灵能调节实验动物的免疫功能，有免疫增强作用，对治疗消化性溃疡和抗溃疡复发有着重要意义.
胃溃灵是我院魏喜保教授根据多年的临床经验，研制的治疗消化性溃疡(PU)的一种复方中药制剂.(半夏、黄连、白芨等)通过大量临床及实验研究，该药具有抑制基础胃酸分泌、降低其胃蛋白酶活性、促进溃疡患者胃粘膜分泌前列腺素E2(PGE2)，补充锌元素，保护胃粘膜屏障，消除幽门螺杆菌(Hp)，抑制溃疡形成，减少复发等作用，其安全范围广，无任何毒副作用.临床治疗PU，止痛迅速、愈合率高，总有效率为95%.本文在魏喜保教授指导下，主要探讨胃溃灵在动物实验研究中，对部分免疫功能—血清抗体形成、血清溶菌酶含量、单核巨噬细胞吞噬功能变化等方面的影响.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 胃溃灵冲剂：本院药厂加工生产，批号930428，每包10g，含原生药16.6g.雷尼替丁(Ran)：浙江康恩贝制药公司出品，批号920735，每片150mg.盐酸左旋咪唑片：广东江门制药厂出品，批号910662，每片25mg.注射用环磷酰胺：上海第十二制药厂产品，批号920404，每瓶200mg.20%四君子汤：本院中心实验室药化组提供.
动物：昆明种NIH系小白鼠，体重18-22g，♀♂各半，由湖北省医学科学院实验动物室提供，合格证号：鄂动管证字012.
1.2 方法 小鼠血清抗体效价形成的检测.实验取84只小鼠，随机分为7组，每组12只，第1组生理盐水组(25ml/kg)，第2组为12g/kg胃溃灵冲剂组，第3组为6g/kg胃溃灵冲剂组，第4组为3g/kg胃溃灵冲剂组，第5组为5g/kg四君子汤组，第6组为30mg/kg Ran组，第7组为40mg/kg环磷酰胺组.1-6组小白鼠按上述剂量连续灌胃12d，第7组于免疫当日起连续皮下注射3d.首先，完成10%和0.5%绵羊红细胞悬液(抗原)的制备.7组动物均在给药的第5天同时用10%绵羊红细胞液0.5ml腹腔注射免疫1次，免疫后第7天采血分离血清、灭活、测抗体效价.根据致敏动物血凝素(循环抗体之一)的水平，可以通过血球凝集程度来检测的原理，我们采用血清凝集素测定法[1].在小鼠免疫后第7天，眼球采血：每只取0.5ml.将每只小鼠的血液各放入1只试管内，室温下放置1h，用长针将凝固的血与管壁剥离，使血清充分渗出，然后以2000rpm离心10min，吸取上层血清，置56℃水浴中灭活30min.用生理盐水将血清作对倍稀释.将不同稀释度的血清分别置于微量试验板(8×12孔)，每孔0.1ml，再加入0.5%绵羊红细胞悬液0.1ml，混匀，并置37℃孵箱温育过夜.观察血球凝集程度，一般分、、、+、-之五级记录，以为准计算每组小鼠抗体效价.
, http://www.100md.com
小鼠血清溶菌酶含量的检测.取72只小鼠，随机分为7组，每组10-11只.第一组生理盐水组(25mg/kg)，第2组为12g/kg胃溃灵冲剂组，第3组为6g/kg胃溃灵冲剂组，第4组为3g/kg胃溃灵冲剂组，第5组为30mg/kgRan组，第6组为5g/kg四君子汤组，第7组为5mg/kg左旋咪唑组，每组动物按上述剂量连续灌胃10d，后采血分离血清，用平板打孔法测定溶菌酶含量(杨贵贞法)[2].
小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的检测.实验取30只小鼠，随机分为3组，每组10只.第1组为生理盐水组(25mg/kg)，第2组为6g/kg胃溃灵冲剂组，第3组为3g/kg胃溃灵冲剂组.每组动物按上述剂量连续灌胃9d，在末次给药1h后，尾静脉注射墨汁稀释液0.1ml/10g，然后分别在3min及12min从眼眶后静脉丛提取血30μl于试管中，加0.1mol/L Na2CO3混均匀，用721分光光度计(波长620nm)比色，测定不同时间血炭浓度，按李仪奎等介绍的方法[3]计算血炭清除速度，以吞噬指数的大小代表吞噬功能的变化.
, 百拇医药
2 结果
2.1 胃溃灵对小鼠血清抗体的影响 表1.
表1 各组小鼠血清抗体效价 (x-±s)
| 组 别 | 剂 量 | 抗体效价 |
| 生理盐水组 | 25ml/kg | 673.3±408 |
| 胃溃灵冲剂组 | 12g/kg | 5643.6±603.6b |
| 胃溃灵冲剂组 | 6g/kg | 2400±418b |
| 胃溃灵冲剂组 | 3g/kg | 1483±908a |
| 四君子汤组 | 5g/kg | 7253±1540b |
| Ran组 | 30mg/kg | 5440±3325b |
| 环磷酰胺组 | 40mg/kg | 267±245d |
, 百拇医药
aP<0.05，bP<0.01,与生理盐水组比较;dP<0.01(抑制).
结果表明，各胃溃灵冲剂组与生理盐水组比较，三组均能提高小白鼠血清抗体水平，经统计学处理P<0.01或P<0.05，有非常显著差异，抗体效价与药物剂量成正比.Ran组与四君子汤组水平也比生理盐水组显著提高，经统计学处理P<0.01.免疫抑制剂环磷酰胺组能明显抑制小白鼠血清抗体形成，与生理盐水组比较有非常显著性差异P<0.01.
2.2 胃溃灵对血清溶菌酶含量的影响 表2.
表2 各组小鼠血清溶菌酶的测定结果 (x-±S,mg/L)
| 组 别 | 剂 量 | 溶菌酶含量 |
| 生理盐水组 | 25ml/kg | 6.32±0.86 |
| 胃溃灵冲剂组 | 12g/kg | 20.4±5.99bd |
| 胃溃灵冲剂组 | 6g/kg | 16.7±5.4bd |
| 胃溃灵冲剂组 | 3g/kg | 19.6±7.27bd |
| Ran组 | 30g/kg | 11±2.22b |
| 四君子汤组 | 5mg/kg | 14.7±3.2b |
| 左旋咪唑组 | 5mg/kg | 26.5±9.0b |
, 百拇医药
bP<0.01，与生理盐水组比较;dP<0.01，与Ran组比较.
结果经t检验和方差分析后表明，不同剂量的胃溃灵冲剂组，四君子汤组，Ran组血清溶菌酶含量均比生理盐水组明显提高，经统计学处理P<0.01，有非常显著性差异.同时还发现，各胃溃灵冲剂组与Ran组比较溶菌酶含量明显提高，统计分析P<0.01，有非常显著性差异.免疫增强剂左旋咪唑组明显提高了小白鼠血清溶菌酶含量，与生理盐水组比较P<0.01，有非常显著性差异.上述提示了胃溃灵能明显提高小白鼠血清溶菌酶含量，且优于Ran组.
2.3 胃溃灵对单核巨噬细胞功能的影响 表3.
表3 各组小鼠单核巨噬细胞吞噬指数的测定结果 (x-±s)
| 组 别 | 剂 量 | 吞噬指数 |
| 生理盐水组 | 25ml/kg | 0.036±0.0081 |
| 胃溃灵冲剂组 | 6g/kg | 0.064±0.0037b |
| 胃溃灵冲剂组 | 3g/kg | 0.045±0.0051a |
, 百拇医药
aP<0.05，bP<0.01,与生理盐水组比较.
结果表明，各胃溃灵冲剂组小白鼠巨噬细胞吞噬指数明显高于生理盐水组，统计学分析P<0.05和P<0.01，且胃溃灵6g/kg组优于胃溃灵3g/kg组，与剂量成正比，提示胃溃灵能增强单核巨噬细胞的吞噬功能.
3 讨论
我们在胃溃灵免疫功能的临床研究中已得知，该药能调节消化性溃疡患者胃液中IgG,sIgA水平，有免疫增强作用，调节机体免疫功能.本文从动物药理实验方面进一步证实了胃溃灵的免疫调节功能.我们知道抗体是免疫应答的主要产物，主要存在于体液中，其重要作用是介导机体体液免疫，可中和细菌外毒素，抑制细菌吸附、吞噬、溶解、杀伤细菌.溶菌酶则有使细菌细胞壁表面失去坚韧性，使细菌发生低渗性裂解，从而杀伤细菌.而单核巨噬细胞本身就是一种免疫细胞，可吞噬和杀伤多种病原微生物，处理损伤的细胞，是机体非特性免疫的重要因素，还分泌多种生物活性物质如蛋白酶、凝血因子、补体成分、前列腺素E2(PGE2)等，并涉及免疫调节.我们的实验正好表明，胃溃灵就能明显提高实验动物的血清抗体水平，增加溶菌酶含量，增强单核巨噬细胞的吞噬功能，有免疫增强作用.
4 参考文献
1 徐淑云，卞如濂，陈修.药理学实验方法.北京：人民卫生出版社，1981：944-945
2 杨贵贞.医学免疫学.长春：吉林人民出版社，1980：469-470
3 李仪奎，王钦茂.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1991：157-158, 百拇医药(甘爱萍,叶松)