幽门螺杆菌的甲苯胺蓝染色法
江西省人民医院病理科 南昌市 330006项目负责人 刘勇,江西省人民医院病理科 南昌市 330006收搞日期 1996-09-27 接受日期 1996-10-15
Subject headings Helicobacter pylori Toluidine blue Stains and staining
主题词 螺杆菌，幽门 甲苯胺蓝 染剂和染色法 胃粘膜
刘勇.幽门螺杆菌的甲苯胺蓝染色法.新消化病学杂志，1997;5(5):332
我们改良甲苯胺蓝(toluidine blue)染色法显示幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)取得了满意的效果，方法介绍如下.
, http://www.100md.com
1 对象和方法
1.1 对象 我院1992年3月～1996年4月期间胃粘膜活检组织标本共2638例，全部标本经10%福尔马林固定，梯度乙醇脱水，石蜡包埋，常规切片厚4μm.
1.2 方法 ①石蜡切片常规脱蜡至水；②滴加1%甲苯胺蓝液染色5min～8min(染液配制：1g甲苯胺蓝溶于100ml蒸馏水，滴加媒染剂2ml，置于60℃温箱2h，然后移 置室温备用)；③蒸馏水洗；④95%乙醇急速分化；⑤无水乙醇脱水，二甲苯透明中性树胶封固.对照组：任选20例胃粘膜活检组织标本，进行Warthin_Starry(W-S)银染色、Giemsa染色、石碳酸复红染色以作比较，按凌启波[1]介绍方法进行.实验数据统计分析采用χ2检验.
, 百拇医药
2 结果本组2638例胃粘膜活检标本中检出Hp阳性1597例，阳性率为60.5%，Hp在光镜高倍镜下清晰易辨，呈紫兰色，短棒状，较一致，两端钝圆略有弯曲，偶见S、U状.经显微目尺测量，Hp长1.8μm±0.21μm，直径0.46μm±0.13μm.Hp分布特点及阳性强度依次为胃粘膜上皮面粘液深部、腺颈部、腺腔内.多种组织学染色法显示Hp的结果表1，不同染色法显示Hp的阳性率无明显差异(P>0.05).其中W-S银染色显示Hp呈黑色，但组织中可见较多银颗粒沉积，背景较脏；Giemsa染色显示Hp为兰色，着色较淡；石碳酸复红染色显示Hp为红色，着色较淡.
表1 不同组织学染色法显示Hp
, 百拇医药
3 讨论甲苯胺蓝是属醌亚胺噻嗪类的一种碱性染料，对Hp有一定的亲和力，经媒染作用后，对Hp染色强度增加，稳定且鲜明，甲苯胺蓝在醇中的溶解度比水中低，用醇进行分化，易于控制适度[1]. 由于甲苯胺蓝对Hp有较强亲和力，故可采用稍过染、深分化的退行性染色法，这样胃粘膜组织褪色较多，Hp褪色较少，从而加大了Hp与背景的 色差，使Hp更易与组织碎片、污染菌及其它杂菌相鉴别.自从Hp被分离培养成功以来，其与胃部疾病的关系引起人们广泛关注[2].Hp的组织学染色方法现有许多种，但均不够理想，或操作繁琐费时、或染液使用率低成本较高、或染色效果不佳，因而寻求一种染色效果好，操作简便、快速、成本低廉的的检验 方法，对于Hp的临床诊断研究有一定的应用价值.甲苯胺蓝染色法显示Hp具有如下优点：染色步骤少，操作简便、时间短，染液配制简单，所需药品少，染液可反复使用，长期保存，成本低廉.Hp着色稳定鲜明，菌体形态清晰，在光镜下易于观察，无需油镜.W-S银染色操作繁琐，有一定技术要求，费时，成本较高，Giemsa染色和石碳酸复红染色Hp着色较淡，菌体形态不够清晰.根据以上比较，我们认为甲苯胺蓝染色法适于一般医院的Hp组织学检查及大规模流行病的调研工作.
4 参考文献1 凌启波.实用病理特殊染色和组化技术.第1版.广州：广州高等教育出版社，1989：43-45
2 梁后杰，刘为纹.幽门螺杆菌与胃癌关系的研究进展.中国实用内科杂志，1994；14(7)：436-437, 百拇医药
Subject headings Helicobacter pylori Toluidine blue Stains and staining
主题词 螺杆菌，幽门 甲苯胺蓝 染剂和染色法 胃粘膜
刘勇.幽门螺杆菌的甲苯胺蓝染色法.新消化病学杂志，1997;5(5):332
我们改良甲苯胺蓝(toluidine blue)染色法显示幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)取得了满意的效果，方法介绍如下.
, http://www.100md.com
1 对象和方法
1.1 对象 我院1992年3月～1996年4月期间胃粘膜活检组织标本共2638例，全部标本经10%福尔马林固定，梯度乙醇脱水，石蜡包埋，常规切片厚4μm.
1.2 方法 ①石蜡切片常规脱蜡至水；②滴加1%甲苯胺蓝液染色5min～8min(染液配制：1g甲苯胺蓝溶于100ml蒸馏水，滴加媒染剂2ml，置于60℃温箱2h，然后移 置室温备用)；③蒸馏水洗；④95%乙醇急速分化；⑤无水乙醇脱水，二甲苯透明中性树胶封固.对照组：任选20例胃粘膜活检组织标本，进行Warthin_Starry(W-S)银染色、Giemsa染色、石碳酸复红染色以作比较，按凌启波[1]介绍方法进行.实验数据统计分析采用χ2检验.
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2 结果本组2638例胃粘膜活检标本中检出Hp阳性1597例，阳性率为60.5%，Hp在光镜高倍镜下清晰易辨，呈紫兰色，短棒状，较一致，两端钝圆略有弯曲，偶见S、U状.经显微目尺测量，Hp长1.8μm±0.21μm，直径0.46μm±0.13μm.Hp分布特点及阳性强度依次为胃粘膜上皮面粘液深部、腺颈部、腺腔内.多种组织学染色法显示Hp的结果表1，不同染色法显示Hp的阳性率无明显差异(P>0.05).其中W-S银染色显示Hp呈黑色，但组织中可见较多银颗粒沉积，背景较脏；Giemsa染色显示Hp为兰色，着色较淡；石碳酸复红染色显示Hp为红色，着色较淡.
表1 不同组织学染色法显示Hp
| 染色方法 | n | Hp阳性 | Hp阴性 | 阳性率(%) |
| 甲苯胺蓝法 | 20 | 13 | 7 | 65.0 |
| W-S银染法 | 20 | 13 | 7 | 65.0 |
| Giemsa染色法 | 20 | 12 | 8 | 60.0 |
| 石碳酸复红法 | 20 | 11 | 9 | 55.0 |
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3 讨论甲苯胺蓝是属醌亚胺噻嗪类的一种碱性染料，对Hp有一定的亲和力，经媒染作用后，对Hp染色强度增加，稳定且鲜明，甲苯胺蓝在醇中的溶解度比水中低，用醇进行分化，易于控制适度[1]. 由于甲苯胺蓝对Hp有较强亲和力，故可采用稍过染、深分化的退行性染色法，这样胃粘膜组织褪色较多，Hp褪色较少，从而加大了Hp与背景的 色差，使Hp更易与组织碎片、污染菌及其它杂菌相鉴别.自从Hp被分离培养成功以来，其与胃部疾病的关系引起人们广泛关注[2].Hp的组织学染色方法现有许多种，但均不够理想，或操作繁琐费时、或染液使用率低成本较高、或染色效果不佳，因而寻求一种染色效果好，操作简便、快速、成本低廉的的检验 方法，对于Hp的临床诊断研究有一定的应用价值.甲苯胺蓝染色法显示Hp具有如下优点：染色步骤少，操作简便、时间短，染液配制简单，所需药品少，染液可反复使用，长期保存，成本低廉.Hp着色稳定鲜明，菌体形态清晰，在光镜下易于观察，无需油镜.W-S银染色操作繁琐，有一定技术要求，费时，成本较高，Giemsa染色和石碳酸复红染色Hp着色较淡，菌体形态不够清晰.根据以上比较，我们认为甲苯胺蓝染色法适于一般医院的Hp组织学检查及大规模流行病的调研工作.
4 参考文献1 凌启波.实用病理特殊染色和组化技术.第1版.广州：广州高等教育出版社，1989：43-45
2 梁后杰，刘为纹.幽门螺杆菌与胃癌关系的研究进展.中国实用内科杂志，1994；14(7)：436-437, 百拇医药