免疫组化与粘液组化套染技术的应用
江西省人民医院病理科 南昌市 330006项目负责人 路名芝,江西省人民医院病理科 南昌市 330006收搞日期 1996-09-27 接受日期 1996-10-26
Subject headings Stomach neoplasms Adenocarcinoma lmmunohisto chemistry Mucous
主题词 胃肿瘤 腺癌 免疫组织化学 粘液
路名芝, 刘勇.免疫组化与粘液组化套染技术的应用.新消化病学杂志，1997；5(5)：282
1 对象和方法1.1 对象 选取我院1990年～1995年期间外科手术胃癌标本46例，均 为腺癌并癌旁伴肠上皮 化生，肿瘤及癌旁组织分别取材2块.全部标本经福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片4μm厚 ，HE染色.
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1.2 方法 ①试剂：单克隆抗PCNA抗体(PC10)和单克隆抗p53抗体(DO-7) 均购自福州迈新公司，即用型，p53需微波修复抗原. 链霉菌素-生物素(LSAB)试剂盒购自Dako公司.AB(pH＝1.0)染液的配制按文献进行[1 ] .②套染方法：切片先经LSAB免疫组织化学染色，严格按试剂盒说明书操作，DAB显色.流 水冲洗切片20min，滴加盐酸水溶液(pH＝1.0)1min，滴加AB(pH＝1.0)染液染色 15min，盐酸水溶液洗，复染，封片.
2 结果
2.1 判断标准 免疫组化染色阳性信号为棕黄色，PCNA计算癌旁肠化生 腺体内阳性细胞 ，p53计算肿瘤区阳性细胞，根据阳性细胞的数量及显色强弱分为阴性(-)-PCNA阳性细胞 数 <15%,且着色较弱，p53无阳性细胞；阳性(+)-PCNA阳性细胞数<50%，P p53阳性细胞 <30%，强阳性(++)-PCNA阳性细胞数>50%，p53阳性细胞数>30%，且着色较强.粘液组化A B(pH＝1.0)显示硫酸化粘液为蓝色.实验数据统计分析采用X2检验和相关性检验.
, 百拇医药
2.2 结果分析 ①PCNA和p53染色阳性均定位于细胞核，棕黄色，硫酸化 粘液物质呈蓝色， 色彩鲜明，对比度好，易于观察.46例胃癌癌旁肠化生组织中，腺上皮细胞含硫酸化粘液27 例，阳性率58.7%；PCNA阳性24例，阳性率52.2%，其中7例呈强阳性表达；46例胃癌组织中p 53阳性21例，阳性率45.7%.②46例胃癌癌旁肠化生组织中PCNA的表达与硫酸化粘液的关 系.27例含硫酸化粘液肠化生中PCNA阳性18例，阳性率66.7%；19例无硫酸化粘液肠化生中PC NA阳性6例，阳性率31.6%，两者有显著性差异(X2＝5.502，P<0.025)，肠化生细胞 中粘液成分与PCNA的表达有显著相关性(r＝0.346).③46例胃癌中p53的表达与癌旁含硫酸化 粘液肠化生的伴随关系.21例p53阳性胃癌中16例伴癌旁含硫酸化粘液的肠化生，伴随率为76 .2%，25例p53阴性胃癌中11例伴癌旁含硫酸化粘液的肠化生，两者的伴随率有差异(X2 ＝4.878，P<0.05)，胃癌p53的表达与癌旁肠化生细胞的粘液成份之间有一定关系(r＝0. 326).
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3 讨论在胃粘膜肠上皮化生与胃癌发生之间关系的研究中，粘液组织化学染色是最常用的方法之一 ，近年有关细胞增殖的检测也已开始应用于肿瘤研究中，特别是在同一切片上显示多种成分 的套染技术发展很快.核仁组成区相关嗜银蛋白(AgNOR)与粘液组化套染以及AgNOR与免疫组 化套染的方法已陆续报道[1，2].本文研究建立的在同一切片中显示细胞核抗原和 粘液成分的免疫组化与粘液组化套染技术，操作简便，结果稳定，色彩鲜明，对比度好，易 于观察，此项套染技术在探讨胃粘膜肠化生的组织发生及其与胃癌发生的关系方面有一定 的应用价值. PCNA是一种36KD的核蛋白，它的出现与细胞周期中的DNA合成期(S期)有密切的相关性，表明 细 胞处于活跃的增殖状态.应用抗PCNA单克隆抗体通过免疫组织化学方法显示组织内处于增殖 状态的细胞核是研究细胞增殖活性的有效指标.本组实验结果显示含硫酸化粘液肠化生上皮 细胞的PCNA阳性率显著高于无硫酸化粘液的肠化生.提示含硫酸化粘液的肠化生细胞比无硫 酸化粘液的肠化生细胞具有更高的增殖活性，高增殖活性的细胞，DNA合成加快，增加了 基因突变的机率，在细胞癌变中具有重要意义.p53基因编码53KD的核内磷蛋白，野生型p53具有抗细胞增殖功能，限制细胞生长分裂，而突 变型p53失去抑制细胞增殖的作用，导致细胞增殖失控.单克隆抗p53抗体通过免疫组化方法能特异性地检测细胞内突变型p53.我们发现，p53阳性胃癌的 癌旁组织中含硫酸化粘液肠化生的伴随率高于p53阳性胃癌.有关含硫酸化粘液肠化生与胃癌 细癌p53异常表达的关系，有待进一步探讨.
4 参考文献1 蒋家康，鲍晓霞，杨美云，等.核仁组成区相关嗜银蛋白与粘液组织化学染色套染方法探讨.肿瘤，1994；14(6)：317-319
2 Murray PG,Boldy DAR,Crocker J,et al.Sequential demonstration of antigens and AgNORs in frozen and paraffin sections.
J Pathol,1989;159(2):169-172, 百拇医药(路名芝 刘勇)
Subject headings Stomach neoplasms Adenocarcinoma lmmunohisto chemistry Mucous
主题词 胃肿瘤 腺癌 免疫组织化学 粘液
路名芝, 刘勇.免疫组化与粘液组化套染技术的应用.新消化病学杂志，1997；5(5)：282
1 对象和方法1.1 对象 选取我院1990年～1995年期间外科手术胃癌标本46例，均 为腺癌并癌旁伴肠上皮 化生，肿瘤及癌旁组织分别取材2块.全部标本经福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片4μm厚 ，HE染色.
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1.2 方法 ①试剂：单克隆抗PCNA抗体(PC10)和单克隆抗p53抗体(DO-7) 均购自福州迈新公司，即用型，p53需微波修复抗原. 链霉菌素-生物素(LSAB)试剂盒购自Dako公司.AB(pH＝1.0)染液的配制按文献进行[1 ] .②套染方法：切片先经LSAB免疫组织化学染色，严格按试剂盒说明书操作，DAB显色.流 水冲洗切片20min，滴加盐酸水溶液(pH＝1.0)1min，滴加AB(pH＝1.0)染液染色 15min，盐酸水溶液洗，复染，封片.
2 结果
2.1 判断标准 免疫组化染色阳性信号为棕黄色，PCNA计算癌旁肠化生 腺体内阳性细胞 ，p53计算肿瘤区阳性细胞，根据阳性细胞的数量及显色强弱分为阴性(-)-PCNA阳性细胞 数 <15%,且着色较弱，p53无阳性细胞；阳性(+)-PCNA阳性细胞数<50%，P p53阳性细胞 <30%，强阳性(++)-PCNA阳性细胞数>50%，p53阳性细胞数>30%，且着色较强.粘液组化A B(pH＝1.0)显示硫酸化粘液为蓝色.实验数据统计分析采用X2检验和相关性检验.
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2.2 结果分析 ①PCNA和p53染色阳性均定位于细胞核，棕黄色，硫酸化 粘液物质呈蓝色， 色彩鲜明，对比度好，易于观察.46例胃癌癌旁肠化生组织中，腺上皮细胞含硫酸化粘液27 例，阳性率58.7%；PCNA阳性24例，阳性率52.2%，其中7例呈强阳性表达；46例胃癌组织中p 53阳性21例，阳性率45.7%.②46例胃癌癌旁肠化生组织中PCNA的表达与硫酸化粘液的关 系.27例含硫酸化粘液肠化生中PCNA阳性18例，阳性率66.7%；19例无硫酸化粘液肠化生中PC NA阳性6例，阳性率31.6%，两者有显著性差异(X2＝5.502，P<0.025)，肠化生细胞 中粘液成分与PCNA的表达有显著相关性(r＝0.346).③46例胃癌中p53的表达与癌旁含硫酸化 粘液肠化生的伴随关系.21例p53阳性胃癌中16例伴癌旁含硫酸化粘液的肠化生，伴随率为76 .2%，25例p53阴性胃癌中11例伴癌旁含硫酸化粘液的肠化生，两者的伴随率有差异(X2 ＝4.878，P<0.05)，胃癌p53的表达与癌旁肠化生细胞的粘液成份之间有一定关系(r＝0. 326).
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3 讨论在胃粘膜肠上皮化生与胃癌发生之间关系的研究中，粘液组织化学染色是最常用的方法之一 ，近年有关细胞增殖的检测也已开始应用于肿瘤研究中，特别是在同一切片上显示多种成分 的套染技术发展很快.核仁组成区相关嗜银蛋白(AgNOR)与粘液组化套染以及AgNOR与免疫组 化套染的方法已陆续报道[1，2].本文研究建立的在同一切片中显示细胞核抗原和 粘液成分的免疫组化与粘液组化套染技术，操作简便，结果稳定，色彩鲜明，对比度好，易 于观察，此项套染技术在探讨胃粘膜肠化生的组织发生及其与胃癌发生的关系方面有一定 的应用价值. PCNA是一种36KD的核蛋白，它的出现与细胞周期中的DNA合成期(S期)有密切的相关性，表明 细 胞处于活跃的增殖状态.应用抗PCNA单克隆抗体通过免疫组织化学方法显示组织内处于增殖 状态的细胞核是研究细胞增殖活性的有效指标.本组实验结果显示含硫酸化粘液肠化生上皮 细胞的PCNA阳性率显著高于无硫酸化粘液的肠化生.提示含硫酸化粘液的肠化生细胞比无硫 酸化粘液的肠化生细胞具有更高的增殖活性，高增殖活性的细胞，DNA合成加快，增加了 基因突变的机率，在细胞癌变中具有重要意义.p53基因编码53KD的核内磷蛋白，野生型p53具有抗细胞增殖功能，限制细胞生长分裂，而突 变型p53失去抑制细胞增殖的作用，导致细胞增殖失控.单克隆抗p53抗体通过免疫组化方法能特异性地检测细胞内突变型p53.我们发现，p53阳性胃癌的 癌旁组织中含硫酸化粘液肠化生的伴随率高于p53阳性胃癌.有关含硫酸化粘液肠化生与胃癌 细癌p53异常表达的关系，有待进一步探讨.
4 参考文献1 蒋家康，鲍晓霞，杨美云，等.核仁组成区相关嗜银蛋白与粘液组织化学染色套染方法探讨.肿瘤，1994；14(6)：317-319
2 Murray PG,Boldy DAR,Crocker J,et al.Sequential demonstration of antigens and AgNORs in frozen and paraffin sections.
J Pathol,1989;159(2):169-172, 百拇医药(路名芝 刘勇)