胃癌抗转移癌基因nm23_H1mRNA的表达意义
1解放军203医院消化内科 黑龙江省齐齐哈尔市 161000 病理科
2上海第二军医大学病理教研室
施秀清，女，1947-10-18生，黑龙江省哈尔滨市人，汉族.1972年毕业于延边医学院医疗系，主治医师，感染控制科主任，主要从事消化疾病的诊治研究.
项目负责人 施秀清,黑龙江省齐齐哈尔市建设大街59号.
Tel: 0452-2112355-4431
收搞日期 1996-07-08
Gastric carcinoma metastasis suppressor gene nm23_H1mRNA and its significance
, 百拇医药
Xiu_Qing Shi1, Gong Li1, Can_Rong Ni2, Chun_Sheng Li1, Xun Luan1 and Yang Qu11Department of Gastroenterology, Department of Pathology, PLA 203 Hospital, Qiqihar 161000, Heilongjiang Province, China
2Department of Pathology, Second Military Medical University, Shanghai, China
Abstract
AIM To study the relation of nm23_H1mRNA expression in gastric carcinoma with metastasis and prognosis.
, 百拇医药
METHODS In situ hybridization histochemistry (ISH) has been used to examine and analyze the expression of nm23_H1mRNA in 112 cases (men:84, women:28, ages:29～70) of gastric carcinoma tissue, in combination with clinical materials.
RESULTS nm23_H1mRNA expression in the tumor, the abnormal mucosa near the tumor and neighboring regions of the tumor was 42.9%, 27.6% and 18%, which show the tendency of step_down. The positive expression of nm23_H1mRNA was 10.8%(7/65) in the carcinoma with metastasis to lymph nodes, 87.2%(41/47) without metastasis. The nm23_H1mRNA expression rate for patients survived ≥3 years was 68.6%, for those survived <3 years was 37.9%(11/29). The discrepancy of nm23_H1mRNA expression was obvious between the patient with lymph nodes metastasis and without metastasis (P<0.01).
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CONCLUSION The increase of the rate of nm23_H1mRNA expression was negatively related to metastasis of to lymph nodes and positively correlated to survival time.
Subject headings Stomach neoplasms mRNANeoplasm metastasis Prognosis Gene expression
Shi XQ, Li G, Ni CR, Li CS,Luan X,Qu Y.Gastric carcinoma metastasis suppressor gene nm23_H1mRNA and its significance.
, 百拇医药
Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997;5(6):377-378
摘 要目的 探索nm23_H1 mRNA在胃癌中的表达程度与转移及预后的关系.
方法 应用原位分子杂交(ISH)技术，检测胃癌组织112例(男84例，女28例，年龄29岁～70岁)中nm23_H1mRNA的表达，并结合临床资料进行分析.
结果 胃癌肿瘤区、移行区及癌旁区nm23_H1mRNA阳性表达率分别为42.9%，27.6%和18%，阳性表达呈梯度下降趋势；无淋巴结转移的胃癌nm23_H1mRNA表达阳性为87.2%(41/47)，有淋巴结转移的胃癌为10.8%(7/65)；随访88例中，≥3年生存者中68.6%(24/35)nm23_H1mRNA表达阳性，<3年生存者中37.9%(11/29)nm23_H1mRNA表达阳性，故nm23_H1mRNA阳性表达在胃癌患者的淋巴结转移、非转移中差异显著(P<0.01).
, 百拇医药
结论 nm23_H1mRNA表达率的升高与淋巴结的转移呈负相关性，与胃癌患者生存期呈正相关性.
主题词 胃肿瘤 信使RNA 肿瘤转移 预后 基因表达
施秀清,李功,倪灿荣,李春生,栾汛,曲阳.胃癌抗转移癌基因nm23_H1mRNA的表达意义.新消化病学杂志,1997;5(6):377-378
肿瘤的转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因之一，其转移过程极其复杂，近年来，抗转移癌基因nm23在消化道肿瘤中的研究引起了很多学者的关注.作者应用原位分子杂交(ISH)技术检测了胃癌组织112例中抗转移癌基因nm23_H1mRNA的表达情况，结合临床资料分析，探索其表达程度与转移、预后的关系.
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1 对象和方法
1.1 对象 胃癌组织112例均系本院1990年以来胃癌患者手术切除标本，其中男84例，女28例，年龄29岁～70岁，其中29岁～39岁19例，40岁～49岁35例，50岁～59岁40例，60岁～70岁18例.有淋巴结转移者65例，无淋巴结转移者47例.临床分型：蕈伞型9例，溃疡型72例，浸润型31例.病理组织学分类：高分化腺癌37例，中分化腺癌24例，低分化腺癌35例，粘液腺癌16例.有随访结果88例中死亡24例，生存期≥3年35例，生存期<3年29例.
1.2 方法 胃癌组织在4%多聚甲醛(0.1% DEPC消毒水配制)固定18h，15%蔗糖缓冲液浸泡标本24h，新鲜乙醇、二甲苯脱水、透明石蜡包埋，4μm切片，切片时尽量避免RNase污染.nm23_H1cDNA由美国Rosengara博士转赠，用购自德国Boehringer Mannheim公司的Dig_RNA标记Kit(美国Vector公司)，抗Dig金标抗体购自德国Boehringer Mannheim公司.切片用新鲜乙醇、二甲苯脱蜡至无菌水中，无菌PBS洗，按文献报道[1，2]适当修改方法进行，微波三档浸在缓冲柠檬酸盐(0.01mol/L pH 6.0)中5min×2(95℃)，蛋白和核酸分离，PBS洗，蛋白酶K(2μg/ml)37℃ 30min，PBS洗，4%多聚甲醛固定5min，PBS洗，乙醇系列脱水，0.25%乙酸酐(内含0.1mol/L三乙醇胺，0.9%NaCl，pH 8.0)洗10min.预杂交：50%去离子甲酰胺，2×SSC 42℃ 3h，杂交：杂交液中内含探针浓度2μg/ml，5ml去离子甲酰胺，2ml 20×SSC， 0.5ml 10mg/ml变性鲑精DNA，2ml 50%硫酸葡聚糖，0.2ml 50×Denhardt, nm23_H1探针58℃杂交18h，杂交后洗，nm23_H1用抗Dig金标试剂1：30银增强.结果判定标准及对照设计参考相关文献[3].
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2 结果nm23_H1mRNA的表达主要在肿瘤细胞膜和细胞浆内，nm23_H1mRNA在胃癌中的阳性表达及其强度(表1).有无淋巴结转移者nm23_H1mRNA表达有非常显著差异(P<0.01，表2).有随访结果88例，生存期≥3年35例中，nm23_H1阳性者24例，阴性者11例，其中无淋巴结转移者31例，有淋巴结转移者4例；生存期<3年29例中，nm23_H1阳性者11例，阴性者18例，有淋巴结转移者23例，无淋巴结转移者6例.nm23_H1的表达与胃癌的临床分型、病理组织学分类差异无显著性(P>0.05，表3).
表1 nm23_H1mRNA在胃癌中的阳性表达及强度
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表2 nm23_H1mRNA表达与淋巴结转移的关系
bP<0.01，与有淋巴结转移者比较.
表3 nm23_H1mRNA表达与临床分型组织学分类的关系
, 百拇医药
3 讨论抗转移癌基因nm23_H1mRNA在胃癌的肿瘤细胞、移行区、癌旁区粘膜及正常粘膜的阳性表达 分别为42.9%，27.6%，18%和40%，肿瘤细胞的阳性表达明显高于移行区或癌旁区，呈梯度下降趋势，同时反应出正常粘膜也具有nm23_H1的较高表达，肿瘤区与对照粘膜之间差异无显著性(P>0.05).Kodera等[4]对胃癌的研究中nm23 mRNA的表达水平在肿瘤和对照粘膜之间无差异.Hirofumi等[5]对胃癌的研究表明nm23 mRNA的表达升高与肿瘤组织学类型之间无明显关系.本研究亦显示nm23_H1mRNA的阳性表达与胃癌的临床分型、病理组织学分类之间差异无显著性(P>0.05).抗转移癌基因nm23 mRNA的表达水平与多种恶性肿瘤的转移、预后有关，其表达水平高低也各不相同，Kodera等[4]在胃癌的研究中nm23 mRNA表达水平并不高，但在有淋巴结转移的胃癌中显著降低，且患者生存期缩短.本研究显示，65例有淋巴结转移的胃癌中89.2%(58/65)的患者nm23_H1mRNA表达阴性，反之，在无淋巴结转移的47例患者中87.2%(41/47)的患者nm23_H1mRNA表达阳性；生存期≥3年的35例中nm23_H1mRNA表达阳性者24例，阴性者11例，无淋巴结转移者31例，有淋巴结转移者4例；生存期<3年的29例中nm23_ H1mRNA表达阳性者11例，阴性者18例，有淋巴结转移者23例，无淋巴结转移者6例. 总之，通过检测112例胃癌组织的nm23_H1mRNA表达，结合临床资料综合研究显示，nm23_H1mRNA表达率的降低与胃癌患者淋巴结的高转移、生存期短有关.反之，nm23_H1mRNA表达率的升高与淋巴结转移呈负相关性，与患者的生存期呈正相关性，与文献结果一致[6-8].所以，在临床工作中对胃癌患者进行nm23的检测，对胃癌患者的临床治疗、手术成功率及术后肿瘤复发、转移的预测具有积极的指导意义.
, 百拇医药
4 参考文献1 倪灿荣.免疫组织化学实验新技术及应用.北京：北京科学技术出版社，1993：261-269
2 Chan F, Yeger H, Pawlin G, et al. In situhybridization of mRNA with biotin and digoxigenin labeled probes. J Histotechnol,1994;17(3):301-306
3 王江，倪灿荣.P53，rasP21,c_erbB_2癌基因蛋白在胃癌中的表达及分布特征.第二军医大学学报，1994；15(1)：20-22
4 Kodera Y, Isobe K, Yamauchi M, et al. Experssion of nm23_H1mRNA levels in human gastric cancer tissues. Cancer,1994;73(2):259_265
, 百拇医药
5 Nakayama H, Yasui W, Yokozaki H, et al. Reduced experssion of nm23 is associated with metastasis of human gastriccarcinomas.
Jpn J Cancer Ras,1993;84(2):184-189
6 Sawan A, Lascu L, Veron M, et al. NDPK/nm23 expression in human breast cancer relation to relapse survival and other prognostic
factors: an immunohistochemical study. J Pathol, 1994;173(1):27-34
, 百拇医药 7 Tokunaga Y, Urano T, Furukawa K, et al. Reduced expression of nm23 H1, but not of nm23H2, is concordant with the frequency
of lymphnode metastasis of human breast cancer. Int J Cancer, 1994;55(1):66-71
8 Nakayama T, Ohtsru A, Nakao, et al. Expression in human hepatocellular carcinoma of nucleoside diphosphate kinase, a homologue
of the nm23 gene product. J Natl Cancer Inst,1992;84(17):1349-1354, 百拇医药(施秀清 李功 倪灿荣 李春生 栾汛 曲阳)
2上海第二军医大学病理教研室
施秀清，女，1947-10-18生，黑龙江省哈尔滨市人，汉族.1972年毕业于延边医学院医疗系，主治医师，感染控制科主任，主要从事消化疾病的诊治研究.
项目负责人 施秀清,黑龙江省齐齐哈尔市建设大街59号.
Tel: 0452-2112355-4431
收搞日期 1996-07-08
Gastric carcinoma metastasis suppressor gene nm23_H1mRNA and its significance
, 百拇医药
Xiu_Qing Shi1, Gong Li1, Can_Rong Ni2, Chun_Sheng Li1, Xun Luan1 and Yang Qu11Department of Gastroenterology, Department of Pathology, PLA 203 Hospital, Qiqihar 161000, Heilongjiang Province, China
2Department of Pathology, Second Military Medical University, Shanghai, China
Abstract
AIM To study the relation of nm23_H1mRNA expression in gastric carcinoma with metastasis and prognosis.
, 百拇医药
METHODS In situ hybridization histochemistry (ISH) has been used to examine and analyze the expression of nm23_H1mRNA in 112 cases (men:84, women:28, ages:29～70) of gastric carcinoma tissue, in combination with clinical materials.
RESULTS nm23_H1mRNA expression in the tumor, the abnormal mucosa near the tumor and neighboring regions of the tumor was 42.9%, 27.6% and 18%, which show the tendency of step_down. The positive expression of nm23_H1mRNA was 10.8%(7/65) in the carcinoma with metastasis to lymph nodes, 87.2%(41/47) without metastasis. The nm23_H1mRNA expression rate for patients survived ≥3 years was 68.6%, for those survived <3 years was 37.9%(11/29). The discrepancy of nm23_H1mRNA expression was obvious between the patient with lymph nodes metastasis and without metastasis (P<0.01).
, http://www.100md.com
CONCLUSION The increase of the rate of nm23_H1mRNA expression was negatively related to metastasis of to lymph nodes and positively correlated to survival time.
Subject headings Stomach neoplasms mRNANeoplasm metastasis Prognosis Gene expression
Shi XQ, Li G, Ni CR, Li CS,Luan X,Qu Y.Gastric carcinoma metastasis suppressor gene nm23_H1mRNA and its significance.
, 百拇医药
Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997;5(6):377-378
摘 要目的 探索nm23_H1 mRNA在胃癌中的表达程度与转移及预后的关系.
方法 应用原位分子杂交(ISH)技术，检测胃癌组织112例(男84例，女28例，年龄29岁～70岁)中nm23_H1mRNA的表达，并结合临床资料进行分析.
结果 胃癌肿瘤区、移行区及癌旁区nm23_H1mRNA阳性表达率分别为42.9%，27.6%和18%，阳性表达呈梯度下降趋势；无淋巴结转移的胃癌nm23_H1mRNA表达阳性为87.2%(41/47)，有淋巴结转移的胃癌为10.8%(7/65)；随访88例中，≥3年生存者中68.6%(24/35)nm23_H1mRNA表达阳性，<3年生存者中37.9%(11/29)nm23_H1mRNA表达阳性，故nm23_H1mRNA阳性表达在胃癌患者的淋巴结转移、非转移中差异显著(P<0.01).
, 百拇医药
结论 nm23_H1mRNA表达率的升高与淋巴结的转移呈负相关性，与胃癌患者生存期呈正相关性.
主题词 胃肿瘤 信使RNA 肿瘤转移 预后 基因表达
施秀清,李功,倪灿荣,李春生,栾汛,曲阳.胃癌抗转移癌基因nm23_H1mRNA的表达意义.新消化病学杂志,1997;5(6):377-378
肿瘤的转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因之一，其转移过程极其复杂，近年来，抗转移癌基因nm23在消化道肿瘤中的研究引起了很多学者的关注.作者应用原位分子杂交(ISH)技术检测了胃癌组织112例中抗转移癌基因nm23_H1mRNA的表达情况，结合临床资料分析，探索其表达程度与转移、预后的关系.
, http://www.100md.com
1 对象和方法
1.1 对象 胃癌组织112例均系本院1990年以来胃癌患者手术切除标本，其中男84例，女28例，年龄29岁～70岁，其中29岁～39岁19例，40岁～49岁35例，50岁～59岁40例，60岁～70岁18例.有淋巴结转移者65例，无淋巴结转移者47例.临床分型：蕈伞型9例，溃疡型72例，浸润型31例.病理组织学分类：高分化腺癌37例，中分化腺癌24例，低分化腺癌35例，粘液腺癌16例.有随访结果88例中死亡24例，生存期≥3年35例，生存期<3年29例.
1.2 方法 胃癌组织在4%多聚甲醛(0.1% DEPC消毒水配制)固定18h，15%蔗糖缓冲液浸泡标本24h，新鲜乙醇、二甲苯脱水、透明石蜡包埋，4μm切片，切片时尽量避免RNase污染.nm23_H1cDNA由美国Rosengara博士转赠，用购自德国Boehringer Mannheim公司的Dig_RNA标记Kit(美国Vector公司)，抗Dig金标抗体购自德国Boehringer Mannheim公司.切片用新鲜乙醇、二甲苯脱蜡至无菌水中，无菌PBS洗，按文献报道[1，2]适当修改方法进行，微波三档浸在缓冲柠檬酸盐(0.01mol/L pH 6.0)中5min×2(95℃)，蛋白和核酸分离，PBS洗，蛋白酶K(2μg/ml)37℃ 30min，PBS洗，4%多聚甲醛固定5min，PBS洗，乙醇系列脱水，0.25%乙酸酐(内含0.1mol/L三乙醇胺，0.9%NaCl，pH 8.0)洗10min.预杂交：50%去离子甲酰胺，2×SSC 42℃ 3h，杂交：杂交液中内含探针浓度2μg/ml，5ml去离子甲酰胺，2ml 20×SSC， 0.5ml 10mg/ml变性鲑精DNA，2ml 50%硫酸葡聚糖，0.2ml 50×Denhardt, nm23_H1探针58℃杂交18h，杂交后洗，nm23_H1用抗Dig金标试剂1：30银增强.结果判定标准及对照设计参考相关文献[3].
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2 结果nm23_H1mRNA的表达主要在肿瘤细胞膜和细胞浆内，nm23_H1mRNA在胃癌中的阳性表达及其强度(表1).有无淋巴结转移者nm23_H1mRNA表达有非常显著差异(P<0.01，表2).有随访结果88例，生存期≥3年35例中，nm23_H1阳性者24例，阴性者11例，其中无淋巴结转移者31例，有淋巴结转移者4例；生存期<3年29例中，nm23_H1阳性者11例，阴性者18例，有淋巴结转移者23例，无淋巴结转移者6例.nm23_H1的表达与胃癌的临床分型、病理组织学分类差异无显著性(P>0.05，表3).
表1 nm23_H1mRNA在胃癌中的阳性表达及强度
| 部位 | nm23阳性表达 | nm23表达强度 | ||||
| n | % | - | + | ++ | +++ | |
| 肿瘤区 | 48 | 42.9 | 64 | 5 | 26 | 17 |
| 移行区 | 31 | 27.6 | 81 | 14 | 10 | 7 |
| 癌旁区 | 21 | 18.0 | 91 | 8 | 13 | 0 |
| 正常粘膜(5例) | 2 | 40.0 | 3 | 1 | 1 | 0 |
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表2 nm23_H1mRNA表达与淋巴结转移的关系
| 淋巴结转移 | n | nm23表达 | |
| + | - | ||
| 有 | 65 | 7 | 58 |
| 无 | 47 | 41b | 6 |
bP<0.01，与有淋巴结转移者比较.
表3 nm23_H1mRNA表达与临床分型组织学分类的关系
| 临床分型 组织分类 | n | nm23_H1表达 | |
| + | % | ||
| 蕈伞型 | 9 | 7 | 77.7 |
| 溃疡型 | 72 | 29 | 40.2 |
| 浸润型 | 31 | 12 | 38.7 |
| 高分化腺癌 | 37 | 18 | 48.6 |
| 中分化腺癌 | 24 | 10 | 41.6 |
| 低分化腺癌 | 35 | 14 | 40.0 |
| 粘液腺癌 | 16 | 6 | 37.5 |
, 百拇医药
3 讨论抗转移癌基因nm23_H1mRNA在胃癌的肿瘤细胞、移行区、癌旁区粘膜及正常粘膜的阳性表达 分别为42.9%，27.6%，18%和40%，肿瘤细胞的阳性表达明显高于移行区或癌旁区，呈梯度下降趋势，同时反应出正常粘膜也具有nm23_H1的较高表达，肿瘤区与对照粘膜之间差异无显著性(P>0.05).Kodera等[4]对胃癌的研究中nm23 mRNA的表达水平在肿瘤和对照粘膜之间无差异.Hirofumi等[5]对胃癌的研究表明nm23 mRNA的表达升高与肿瘤组织学类型之间无明显关系.本研究亦显示nm23_H1mRNA的阳性表达与胃癌的临床分型、病理组织学分类之间差异无显著性(P>0.05).抗转移癌基因nm23 mRNA的表达水平与多种恶性肿瘤的转移、预后有关，其表达水平高低也各不相同，Kodera等[4]在胃癌的研究中nm23 mRNA表达水平并不高，但在有淋巴结转移的胃癌中显著降低，且患者生存期缩短.本研究显示，65例有淋巴结转移的胃癌中89.2%(58/65)的患者nm23_H1mRNA表达阴性，反之，在无淋巴结转移的47例患者中87.2%(41/47)的患者nm23_H1mRNA表达阳性；生存期≥3年的35例中nm23_H1mRNA表达阳性者24例，阴性者11例，无淋巴结转移者31例，有淋巴结转移者4例；生存期<3年的29例中nm23_ H1mRNA表达阳性者11例，阴性者18例，有淋巴结转移者23例，无淋巴结转移者6例. 总之，通过检测112例胃癌组织的nm23_H1mRNA表达，结合临床资料综合研究显示，nm23_H1mRNA表达率的降低与胃癌患者淋巴结的高转移、生存期短有关.反之，nm23_H1mRNA表达率的升高与淋巴结转移呈负相关性，与患者的生存期呈正相关性，与文献结果一致[6-8].所以，在临床工作中对胃癌患者进行nm23的检测，对胃癌患者的临床治疗、手术成功率及术后肿瘤复发、转移的预测具有积极的指导意义.
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4 参考文献1 倪灿荣.免疫组织化学实验新技术及应用.北京：北京科学技术出版社，1993：261-269
2 Chan F, Yeger H, Pawlin G, et al. In situhybridization of mRNA with biotin and digoxigenin labeled probes. J Histotechnol,1994;17(3):301-306
3 王江，倪灿荣.P53，rasP21,c_erbB_2癌基因蛋白在胃癌中的表达及分布特征.第二军医大学学报，1994；15(1)：20-22
4 Kodera Y, Isobe K, Yamauchi M, et al. Experssion of nm23_H1mRNA levels in human gastric cancer tissues. Cancer,1994;73(2):259_265
, 百拇医药
5 Nakayama H, Yasui W, Yokozaki H, et al. Reduced experssion of nm23 is associated with metastasis of human gastriccarcinomas.
Jpn J Cancer Ras,1993;84(2):184-189
6 Sawan A, Lascu L, Veron M, et al. NDPK/nm23 expression in human breast cancer relation to relapse survival and other prognostic
factors: an immunohistochemical study. J Pathol, 1994;173(1):27-34
, 百拇医药 7 Tokunaga Y, Urano T, Furukawa K, et al. Reduced expression of nm23 H1, but not of nm23H2, is concordant with the frequency
of lymphnode metastasis of human breast cancer. Int J Cancer, 1994;55(1):66-71
8 Nakayama T, Ohtsru A, Nakao, et al. Expression in human hepatocellular carcinoma of nucleoside diphosphate kinase, a homologue
of the nm23 gene product. J Natl Cancer Inst,1992;84(17):1349-1354, 百拇医药(施秀清 李功 倪灿荣 李春生 栾汛 曲阳)