胃癌组织P53蛋白和PCNA的表达意义
1第一军医大学南方医院消化内科研究所 广东省广州市 510515
2济南军区总医院消化科
作者简介 冯福才，男，1937年生，辽宁省沈阳市人，汉族. 1963年大连医科大学医疗系毕业，教授、主任医师，主要从事消化系病及消化内镜的诊治研究，与同志一起共发表论文78篇，其中第一作者29篇，参与编著科技著作5部[电话(020)87705577-3100(办)，-3096(宅)].
Clinical significance of P53 protein and PCNA expression in gastric carcinoma tissues
, 百拇医药
FENG Fu-Cai, HUANG Wen, WANG Ji-De, ZHANG Ya-Li and ZHOU Dian-Yuan
Department of Gastroenterology, Nanfang Hospital, The First Military Medical University, Guangzhou 510515, China
Subject headings stomach neoplasms/metabolism; protein P53/metabolism; proliferating cell nuclear antigen/metabolism; immunohistochemistry
Abstract
, 百拇医药
AIM To study the clinical significance of P53 protein and PCNA expression in gastric carcinoma tissues.
METHODS Expression of P53 protein and PCNA was investigated by ABC immunohistochemical technique in 76 cases of gastric carcinoma and 30 normal gastric mucosa.
RESULTS No P53 protein expression was found in normal gastric mucosa, but 64.4% of gastric carcinoma was positive. The cell proliferative activity in P53-positive cases was significantly higher than that of P53-negative cases (82.1%±17.6% vs 64.2%±14.3%， P<0.01). Expression of P53 and PCNA was related positively with clinical stages and prognosis in gastric carcinoma (P<0.01).
, 百拇医药
CONCLUSION The determination of P53 and PCNA may be useful for diagnosis, clinical staging and prognosis of gastric carcinoma.
主题词 胃肿瘤/代谢； 蛋白质 P53/代谢； 增殖细胞核抗原/代谢； 免疫组织化学
中国图书资料分类号 R735.2
摘要
目的 研究胃癌组织P53蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达意义.
, http://www.100md.com
方法 应用ABC免疫组织化学技术检测76例保存资料完整并经病理学证实的胃癌石蜡包埋组织和30例正常胃粘膜P53蛋白及PCNA的表达进行同步检测.
结果 正常胃粘膜无P53蛋白表达，而64.4%(49/76)胃癌组织中P53蛋白表达阳性，P53蛋白表达阳性者其细胞增殖活性为82.1%±17.6%，明显高于P53蛋白表达阴性组的64.2%±14.3%(P<0.01). P53蛋白阳性率和PCNA计数值与胃癌临床分期及复发呈正相关(P<0.01).
结论 联合检测P53蛋白和PCNA对胃癌诊断、分期及预后有重要价值.
野生型p53基因是肿瘤抑制基因之一，当发生缺失或突变后可促使细胞无限制地生长，是肿瘤增生异常活跃的因素之一，对肿瘤的发生、发展起重要的作用[1，2]. 有关胃癌p53基因突变和表达的研究国内外已有报道，但其表达与细胞增殖状态、淋巴结转移及预后关系的研究尚少报道. 我们应用免疫组化法对胃癌组织P53蛋白及增殖细胞核抗原(proliferating cell neclear antigen, PCNA)的表达进行观察，以探讨P53蛋白表达与细胞增殖状态及预后的关系.
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 对象 选择1986年～1990年保存资料完整且经病理证实的胃癌石蜡包埋组织76例，男42例，女34例，年龄26岁～59岁，平均42.5岁. 正常胃粘膜30例为对照组.
1.2 免疫组化染色采用ABC法[3]. 抗P53蛋白单体和抗PCNA单抗PC-10均为Dako公司产品，ABC试剂盒为Sigma公司产品. 染色过程中设阳性和阴性对照. P53蛋白和PCNA均以细胞核着色呈棕黄色者为阳性细胞，计数1000个细胞中阳性细胞数为PCNA计数值，以百分数表示.
2 结果
2.1 胃癌组织P53蛋白和PCNA的表达 胃癌组织中有64.4%(49/76)可见P53蛋白阳性表达，染色局限于细胞核内，胞膜、胞浆不着色，而30例正常胃粘膜P53蛋白染色均为阴性. PCNA染色也局限于细胞核内，在正常胃粘膜组织中，PCNA阳性细胞主要局限在腺体下2/3区域，上部及上皮表面无PCNA表达，其PCNA计数值为25.6%±11.3%，而在胃癌组织中，PCNA阳性细胞弥散分布. 呈明显异质性，其计数值为74.4%±20.2%，与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01). 进一步对P53蛋白表达与细胞增殖活性关系进行探讨发现，49例P53阳性胃癌组，细胞增殖活跃，其PCNA计数值明显高于P53蛋白阴性组(表1，P<0.01).
, http://www.100md.com
表1 P53蛋白表达与PCNA计数值关系(%，x±s)
表2 胃癌分期与P53蛋白及PCNA表达的关系(x±s)
, http://www.100md.com
2.2 胃癌分期与P53蛋白及PCNA表达的关系 临床Ⅲ～Ⅳ期胃癌组P53阳性率及PCNA计数值均高于Ⅰ～Ⅱ期胃癌组(表2，P<0.01).
2.3 胃癌复发与P53蛋白及PCNA表达的关系 表3，随访5a内复发组P53蛋白阳性率及PCNA计数值显著高于5a内无复发组(P<0.01).
表3 复发情况与P53蛋白及PCNA表达的关系(x±s)
, http://www.100md.com
3 讨论
p53基因是迄今发现的与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因，P53蛋白为其表达的一种磷酸蛋白，包含375个氨基酸，位于细胞核内与DNA相结合. 正常细胞内的野生型p53基因是细胞分裂的负性调节因子，将其导入已转化的细胞可促使细胞停止增殖，终止在G1期[4]. 突变后的p53基因丧失了负性调节作用，并具有促进细胞增殖，抑制野生型P53活性的功能，在肿瘤的发生、发展及转归过程中起重要的作用. 野生型P53蛋白由于半衰期短，一般方法不易检出，而突变型P53蛋白半衰期长，并能稳定在P53蛋白的较高水平上，故用免疫组化方法可以检测[5]. 本结果表明，64.4%的胃癌组织中P53蛋白表达为阳性，且随临床分期进展和复发情况表现增高趋势，提示在人类胃癌的发生、发展及转归方面，p53基因突变是一个重要的遗传学事件.
, 百拇医药
PCNA是近年发展的原位检测细胞增殖活性的新型探针，由261个氨基酸组成的酸性核蛋白，是DNA聚合酶δ的辅助蛋白，表达于细胞周期的G1期，S期达高峰，G2～M期下降，其量的变化与DNA合成一致，能反映细胞的增殖活性[6]. 我们对P53表达阳性的胃癌细胞增殖状态进行同步检测，结果发现，P53蛋白表达阳性胃癌细胞增殖活性明显高于阳性者，这一结果目前认为是突变型p53基因缺乏野生型p53基因对细胞增殖的负性调节作用，野生型p53基因一旦发生突变将有可能导致细胞的恶性增殖[7]. 本文联合检测P53和PCNA的表达，结果表明，两者的表达在胃癌诊断、临床分期及预后判断方面有良好的协同性，将其用于临床实践有一定的实用价值.
4 参考文献
1 Baker S, Markowitz S, Fearon E, et al. Suppressor of human colorectal carcinoma cell growth by wild-type P53.
, http://www.100md.com
Scince,1990;294(6):921-925
2 Ullrich SJ, Arderson CW, Edward WE, et al. The P53 tumour suppressor protein: a modulator of cell proliferation.
J Biol Chem, 1992;267(14):15259-15264
3 Hsu SM, Raine L, Fanger H. Use of avidin-biotin peroxidase complex (ABC) in immunoperoxidase techniques: a comparison
between ABC and unlablled antibody(PAP) procedures. J Histochem Cytochem, 1981;29(6):577-580
, http://www.100md.com
4 Finaly CA, Hinds PW, Levine AJ. The P53 protogene can act as a suppresser of transfornation. Cell, 1989;57(11):1083-1089
5 Finaly CA, Hinds PW, Tan TH, et al. Activating mutations for transformation by P53 produce a gene product that forms an
hsp -P53 complex with an altered half-life. Mol Cell Biol, 1988;8(3):531-536
6 Bravo R, Frank R, Blundell PA, et al. Cylin/PCNA is the auxliary protein of DNA polymerase-δ. Nature, 1987;328(6):515-519
7 Yamaguchi A, Kurosaka Y, Fushida S, et al. Expression of P53 protein in colorectal cancer and its relationship to
short-term prognosis. Cancer, 1992;70(18):2778-2783(收稿 1996-11-28), 百拇医药(冯福才1 黄 文2 王继德1 张亚历1 周殿元1 )
2济南军区总医院消化科
作者简介 冯福才，男，1937年生，辽宁省沈阳市人，汉族. 1963年大连医科大学医疗系毕业，教授、主任医师，主要从事消化系病及消化内镜的诊治研究，与同志一起共发表论文78篇，其中第一作者29篇，参与编著科技著作5部[电话(020)87705577-3100(办)，-3096(宅)].
Clinical significance of P53 protein and PCNA expression in gastric carcinoma tissues
, 百拇医药
FENG Fu-Cai, HUANG Wen, WANG Ji-De, ZHANG Ya-Li and ZHOU Dian-Yuan
Department of Gastroenterology, Nanfang Hospital, The First Military Medical University, Guangzhou 510515, China
Subject headings stomach neoplasms/metabolism; protein P53/metabolism; proliferating cell nuclear antigen/metabolism; immunohistochemistry
Abstract
, 百拇医药
AIM To study the clinical significance of P53 protein and PCNA expression in gastric carcinoma tissues.
METHODS Expression of P53 protein and PCNA was investigated by ABC immunohistochemical technique in 76 cases of gastric carcinoma and 30 normal gastric mucosa.
RESULTS No P53 protein expression was found in normal gastric mucosa, but 64.4% of gastric carcinoma was positive. The cell proliferative activity in P53-positive cases was significantly higher than that of P53-negative cases (82.1%±17.6% vs 64.2%±14.3%， P<0.01). Expression of P53 and PCNA was related positively with clinical stages and prognosis in gastric carcinoma (P<0.01).
, 百拇医药
CONCLUSION The determination of P53 and PCNA may be useful for diagnosis, clinical staging and prognosis of gastric carcinoma.
主题词 胃肿瘤/代谢； 蛋白质 P53/代谢； 增殖细胞核抗原/代谢； 免疫组织化学
中国图书资料分类号 R735.2
摘要
目的 研究胃癌组织P53蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达意义.
, http://www.100md.com
方法 应用ABC免疫组织化学技术检测76例保存资料完整并经病理学证实的胃癌石蜡包埋组织和30例正常胃粘膜P53蛋白及PCNA的表达进行同步检测.
结果 正常胃粘膜无P53蛋白表达，而64.4%(49/76)胃癌组织中P53蛋白表达阳性，P53蛋白表达阳性者其细胞增殖活性为82.1%±17.6%，明显高于P53蛋白表达阴性组的64.2%±14.3%(P<0.01). P53蛋白阳性率和PCNA计数值与胃癌临床分期及复发呈正相关(P<0.01).
结论 联合检测P53蛋白和PCNA对胃癌诊断、分期及预后有重要价值.
野生型p53基因是肿瘤抑制基因之一，当发生缺失或突变后可促使细胞无限制地生长，是肿瘤增生异常活跃的因素之一，对肿瘤的发生、发展起重要的作用[1，2]. 有关胃癌p53基因突变和表达的研究国内外已有报道，但其表达与细胞增殖状态、淋巴结转移及预后关系的研究尚少报道. 我们应用免疫组化法对胃癌组织P53蛋白及增殖细胞核抗原(proliferating cell neclear antigen, PCNA)的表达进行观察，以探讨P53蛋白表达与细胞增殖状态及预后的关系.
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 对象 选择1986年～1990年保存资料完整且经病理证实的胃癌石蜡包埋组织76例，男42例，女34例，年龄26岁～59岁，平均42.5岁. 正常胃粘膜30例为对照组.
1.2 免疫组化染色采用ABC法[3]. 抗P53蛋白单体和抗PCNA单抗PC-10均为Dako公司产品，ABC试剂盒为Sigma公司产品. 染色过程中设阳性和阴性对照. P53蛋白和PCNA均以细胞核着色呈棕黄色者为阳性细胞，计数1000个细胞中阳性细胞数为PCNA计数值，以百分数表示.
2 结果
2.1 胃癌组织P53蛋白和PCNA的表达 胃癌组织中有64.4%(49/76)可见P53蛋白阳性表达，染色局限于细胞核内，胞膜、胞浆不着色，而30例正常胃粘膜P53蛋白染色均为阴性. PCNA染色也局限于细胞核内，在正常胃粘膜组织中，PCNA阳性细胞主要局限在腺体下2/3区域，上部及上皮表面无PCNA表达，其PCNA计数值为25.6%±11.3%，而在胃癌组织中，PCNA阳性细胞弥散分布. 呈明显异质性，其计数值为74.4%±20.2%，与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01). 进一步对P53蛋白表达与细胞增殖活性关系进行探讨发现，49例P53阳性胃癌组，细胞增殖活跃，其PCNA计数值明显高于P53蛋白阴性组(表1，P<0.01).
, http://www.100md.com
表1 P53蛋白表达与PCNA计数值关系(%，x±s)
| P53蛋白表达 | n | PCNA计数值 |
| 阴性 | 27 | 64.2±14.3 |
| 阳性 | 49 | 82.1±17.6 |
表2 胃癌分期与P53蛋白及PCNA表达的关系(x±s)
| 临床分期 | n | P53阳性表达 | PCNA计值% | |
| n | % | |||
| Ⅰ～Ⅱ | 42 | 21 | 50.0 | 66.8±21.2 |
| Ⅲ～Ⅳ | 34 | 28 | 82.4 | 79.2±28.5 |
, http://www.100md.com
2.2 胃癌分期与P53蛋白及PCNA表达的关系 临床Ⅲ～Ⅳ期胃癌组P53阳性率及PCNA计数值均高于Ⅰ～Ⅱ期胃癌组(表2，P<0.01).
2.3 胃癌复发与P53蛋白及PCNA表达的关系 表3，随访5a内复发组P53蛋白阳性率及PCNA计数值显著高于5a内无复发组(P<0.01).
表3 复发情况与P53蛋白及PCNA表达的关系(x±s)
| 随访5a | n | P53阳性表达 | PCNA计值% | |
| n | % | |||
| 无复发 | 40 | 21 | 63.8 | 63.8±19.3 |
| 复发 | 36 | 28 | 77.8 | 80.6±22.6 |
, http://www.100md.com
3 讨论
p53基因是迄今发现的与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因，P53蛋白为其表达的一种磷酸蛋白，包含375个氨基酸，位于细胞核内与DNA相结合. 正常细胞内的野生型p53基因是细胞分裂的负性调节因子，将其导入已转化的细胞可促使细胞停止增殖，终止在G1期[4]. 突变后的p53基因丧失了负性调节作用，并具有促进细胞增殖，抑制野生型P53活性的功能，在肿瘤的发生、发展及转归过程中起重要的作用. 野生型P53蛋白由于半衰期短，一般方法不易检出，而突变型P53蛋白半衰期长，并能稳定在P53蛋白的较高水平上，故用免疫组化方法可以检测[5]. 本结果表明，64.4%的胃癌组织中P53蛋白表达为阳性，且随临床分期进展和复发情况表现增高趋势，提示在人类胃癌的发生、发展及转归方面，p53基因突变是一个重要的遗传学事件.
, 百拇医药
PCNA是近年发展的原位检测细胞增殖活性的新型探针，由261个氨基酸组成的酸性核蛋白，是DNA聚合酶δ的辅助蛋白，表达于细胞周期的G1期，S期达高峰，G2～M期下降，其量的变化与DNA合成一致，能反映细胞的增殖活性[6]. 我们对P53表达阳性的胃癌细胞增殖状态进行同步检测，结果发现，P53蛋白表达阳性胃癌细胞增殖活性明显高于阳性者，这一结果目前认为是突变型p53基因缺乏野生型p53基因对细胞增殖的负性调节作用，野生型p53基因一旦发生突变将有可能导致细胞的恶性增殖[7]. 本文联合检测P53和PCNA的表达，结果表明，两者的表达在胃癌诊断、临床分期及预后判断方面有良好的协同性，将其用于临床实践有一定的实用价值.
4 参考文献
1 Baker S, Markowitz S, Fearon E, et al. Suppressor of human colorectal carcinoma cell growth by wild-type P53.
, http://www.100md.com
Scince,1990;294(6):921-925
2 Ullrich SJ, Arderson CW, Edward WE, et al. The P53 tumour suppressor protein: a modulator of cell proliferation.
J Biol Chem, 1992;267(14):15259-15264
3 Hsu SM, Raine L, Fanger H. Use of avidin-biotin peroxidase complex (ABC) in immunoperoxidase techniques: a comparison
between ABC and unlablled antibody(PAP) procedures. J Histochem Cytochem, 1981;29(6):577-580
, http://www.100md.com
4 Finaly CA, Hinds PW, Levine AJ. The P53 protogene can act as a suppresser of transfornation. Cell, 1989;57(11):1083-1089
5 Finaly CA, Hinds PW, Tan TH, et al. Activating mutations for transformation by P53 produce a gene product that forms an
hsp -P53 complex with an altered half-life. Mol Cell Biol, 1988;8(3):531-536
6 Bravo R, Frank R, Blundell PA, et al. Cylin/PCNA is the auxliary protein of DNA polymerase-δ. Nature, 1987;328(6):515-519
7 Yamaguchi A, Kurosaka Y, Fushida S, et al. Expression of P53 protein in colorectal cancer and its relationship to
short-term prognosis. Cancer, 1992;70(18):2778-2783(收稿 1996-11-28), 百拇医药(冯福才1 黄 文2 王继德1 张亚历1 周殿元1 )