肠道脱落细胞DNA含量图象分析诊断大肠癌中的意义
北京军区总医院 1肿瘤科 2消化科 3病理科 北京市 100700
项目负责人 吴显文,北京军区总医院1肿瘤科2消化科3病理科 北京市 100700 收稿日期 1997-09-02 接收日期1997-10-18
Subject headings colonic neoplasms/diagnosis; rectal neoplasms/diagnosis; DNA,neoplasm/analysis; cytodiagnosis
主题词 结肠肿瘤/诊断；直肠肿瘤/诊断；DNA，肿瘤/分析；细胞诊断学
, http://www.100md.com
吴显文, 李世荣, 田玉旺, 王志红, 邢惠清. 肠道脱落细胞DNA含量图象分析诊断大肠癌中的意义. 华人消化杂志, 1998;6(1):88-89
1995-01/1997-02对116例肠镜检查患者和部分大肠癌术前患者进行了肠道脱落细胞DNA含量图象分析研究，以期用于大肠癌普查，报告如下.
1 对象和方法
1.1 对象 大部分病例为我科结肠镜检查患者，部分结肠癌和上消化道肿瘤为外科术前患者. 年龄18岁～72岁，男72例，女44例，肠镜报告未见异常40例，慢性结肠炎 23例，肠腺瘤21例，大肠癌22例，食管癌5例，贲门癌4例，胃窦癌1例. 全部肿瘤均有病理证实.
1.2 方法 清肠饮主要成分为NaCl,NaHCO3，KCl的等渗溶液3000ml；多聚甲醛；林格液；细胞DNA图象自动分析仪系统：包括386微机一台，荧光显微镜一台，软件由空军总医院和 北京航空航天大学联合研制. ①标本留取方法：嘱患者留取服清肠饮后的清水样便50ml～100ml于盛有15ml 10%多聚甲醛塑料瓶中，肠镜检查时带来实验室. ②细胞离心及洗涤方法：将标本在50ml试管中以2000r/min速度离心10min，弃上清液，用林格液洗涤沉淀3次，最后用林格液将沉淀制成细胞悬液，将细胞悬液2～3滴于离心涂片机以1200r/min涂于明胶载波片上. ③细胞DNA图象分析：用同一标本上的淋巴细胞平均积分光密度(ⅠOD～2)作为标准二倍体(2C)，每张片至少取两个视野内可凝细胞核的积分光密度(ⅠOD1)进行分析，以NDⅠ=ⅠOD1/ⅠOD～2作为分析细胞的倍体值，并绘制倍体直方图. 细胞核DNA指数均值，即平均倍体值NDⅠ～=ⅠOD～1/ⅠOD～2.
, 百拇医药
统计学处理 〖HTBS〗应用协力医学统计软件，在计算机上完成.
2 结果
细胞DNA分析结果表1. 大肠癌组患者诊断的灵敏度为72.73%、特异度为91.49%、阳性预示值为66.67%、阴性预示值为93.48%，而腺瘤患者分别为 14.29%、93.15%、37.50%和79.07%.
表1 细胞DNA图象分析有可疑癌细胞(>5C)统计表
, http://www.100md.com
3 讨论
Feulgen染色细胞DNA原位定量分析是近10a来迅速发展起来的一种方法，尤其是近几年，随着计算机的发展和医学软件的开发，已将计算机自动分析替代了以前的细胞光密度计测量法，更便于临床应用和发展. 大量研究结果表明，随正常粘膜经腺瘤向腺癌的发展，DNA含量呈逐渐增加的趋势. 恶性组织细胞DNA含量显著地高于正常组织，96%的恶性肿瘤患者的肿瘤细胞为非整倍体或多倍体的DNA含量，DNA直方图的峰向右偏离2C值，一些肿瘤细胞的DNA值可达6C或 8C. 因此，DNA细胞化学定量分析对肿瘤的早期诊断，组织学的分级和预后的判断以及治疗方案的选择具有重要意义. 虽然判断细胞的性质与很多相关参数有关， 本组主要选择了两个重要的参数即脱落细胞的 N-DⅠ值和DNA倍体值. 本组结果经对N-DⅠ值进行组间t′检验，结肠癌组N-DI值与其他各组之间存在显著性差异(P<0.01)，而其他四组之间无显著性差异. 倍体直方图结果表明，正常人的肠道脱落细胞以二倍体为主，腺瘤患者倍体直方图主峰向3C～4C偏移，而癌组患者向>5C偏移，与组织细胞分析结果一致. 根据>5C细胞为可疑癌细胞，其统计结果表1，经计算有关指标，其灵敏度高(72.73%)，特异性好 (91.49%)，因此我们认为这一检测方法应用于肠道脱落细胞的临床研究，有重要价值. 综上所述，我们认为细胞DNA图象分析用于肠道脱落细胞学检查优点在于：第一，可以将标本上的任何细胞作为分析细胞，进行客观分析，克服了HE染色光镜观察，主观判断成分较多的缺陷. 第二，DNA分析所用的Feulgen染色可以对任何细胞染色，克服了免疫组化染色，受细胞表面抗原表达率的影响. 第三，试验方法简便，可用于普查现场，还可做多因素分析，进一步提高检出的敏感性. 从本试验结果可以看出，肠道脱落细胞分析，对腺瘤的诊断尚存在一定不足，我们认为主要原因是腺瘤细胞脱落的数量较癌细胞少，且腺瘤的DNA含量变化小，核型图象分析对腺瘤细胞的判断方法仍有待进一步探索., 百拇医药(吴显文1 李世荣2 田玉旺3 王志红2 邢惠清3)
项目负责人 吴显文,北京军区总医院1肿瘤科2消化科3病理科 北京市 100700 收稿日期 1997-09-02 接收日期1997-10-18
Subject headings colonic neoplasms/diagnosis; rectal neoplasms/diagnosis; DNA,neoplasm/analysis; cytodiagnosis
主题词 结肠肿瘤/诊断；直肠肿瘤/诊断；DNA，肿瘤/分析；细胞诊断学
, http://www.100md.com
吴显文, 李世荣, 田玉旺, 王志红, 邢惠清. 肠道脱落细胞DNA含量图象分析诊断大肠癌中的意义. 华人消化杂志, 1998;6(1):88-89
1995-01/1997-02对116例肠镜检查患者和部分大肠癌术前患者进行了肠道脱落细胞DNA含量图象分析研究，以期用于大肠癌普查，报告如下.
1 对象和方法
1.1 对象 大部分病例为我科结肠镜检查患者，部分结肠癌和上消化道肿瘤为外科术前患者. 年龄18岁～72岁，男72例，女44例，肠镜报告未见异常40例，慢性结肠炎 23例，肠腺瘤21例，大肠癌22例，食管癌5例，贲门癌4例，胃窦癌1例. 全部肿瘤均有病理证实.
1.2 方法 清肠饮主要成分为NaCl,NaHCO3，KCl的等渗溶液3000ml；多聚甲醛；林格液；细胞DNA图象自动分析仪系统：包括386微机一台，荧光显微镜一台，软件由空军总医院和 北京航空航天大学联合研制. ①标本留取方法：嘱患者留取服清肠饮后的清水样便50ml～100ml于盛有15ml 10%多聚甲醛塑料瓶中，肠镜检查时带来实验室. ②细胞离心及洗涤方法：将标本在50ml试管中以2000r/min速度离心10min，弃上清液，用林格液洗涤沉淀3次，最后用林格液将沉淀制成细胞悬液，将细胞悬液2～3滴于离心涂片机以1200r/min涂于明胶载波片上. ③细胞DNA图象分析：用同一标本上的淋巴细胞平均积分光密度(ⅠOD～2)作为标准二倍体(2C)，每张片至少取两个视野内可凝细胞核的积分光密度(ⅠOD1)进行分析，以NDⅠ=ⅠOD1/ⅠOD～2作为分析细胞的倍体值，并绘制倍体直方图. 细胞核DNA指数均值，即平均倍体值NDⅠ～=ⅠOD～1/ⅠOD～2.
, 百拇医药
统计学处理 〖HTBS〗应用协力医学统计软件，在计算机上完成.
2 结果
细胞DNA分析结果表1. 大肠癌组患者诊断的灵敏度为72.73%、特异度为91.49%、阳性预示值为66.67%、阴性预示值为93.48%，而腺瘤患者分别为 14.29%、93.15%、37.50%和79.07%.
表1 细胞DNA图象分析有可疑癌细胞(>5C)统计表
| 见>5C细胞 | 未见>5C细胞 | 合计 | N-DⅠ值 | |
| 大肠癌 | 16 | 6 | 22 | 3.201441 |
| 大肠腺瘤 | 3 | 18 | 21 | 1.563071 |
| 慢性结肠炎 | 2 | 21 | 23 | 1.426396 |
| 肠镜正常 | 3 | 37 | 40 | 1.661183 |
| 上消化道肿瘤 | 10 | 10 | 1.58272 | |
| 合计 | 24 | 92 | 116 |
, http://www.100md.com
3 讨论
Feulgen染色细胞DNA原位定量分析是近10a来迅速发展起来的一种方法，尤其是近几年，随着计算机的发展和医学软件的开发，已将计算机自动分析替代了以前的细胞光密度计测量法，更便于临床应用和发展. 大量研究结果表明，随正常粘膜经腺瘤向腺癌的发展，DNA含量呈逐渐增加的趋势. 恶性组织细胞DNA含量显著地高于正常组织，96%的恶性肿瘤患者的肿瘤细胞为非整倍体或多倍体的DNA含量，DNA直方图的峰向右偏离2C值，一些肿瘤细胞的DNA值可达6C或 8C. 因此，DNA细胞化学定量分析对肿瘤的早期诊断，组织学的分级和预后的判断以及治疗方案的选择具有重要意义. 虽然判断细胞的性质与很多相关参数有关， 本组主要选择了两个重要的参数即脱落细胞的 N-DⅠ值和DNA倍体值. 本组结果经对N-DⅠ值进行组间t′检验，结肠癌组N-DI值与其他各组之间存在显著性差异(P<0.01)，而其他四组之间无显著性差异. 倍体直方图结果表明，正常人的肠道脱落细胞以二倍体为主，腺瘤患者倍体直方图主峰向3C～4C偏移，而癌组患者向>5C偏移，与组织细胞分析结果一致. 根据>5C细胞为可疑癌细胞，其统计结果表1，经计算有关指标，其灵敏度高(72.73%)，特异性好 (91.49%)，因此我们认为这一检测方法应用于肠道脱落细胞的临床研究，有重要价值. 综上所述，我们认为细胞DNA图象分析用于肠道脱落细胞学检查优点在于：第一，可以将标本上的任何细胞作为分析细胞，进行客观分析，克服了HE染色光镜观察，主观判断成分较多的缺陷. 第二，DNA分析所用的Feulgen染色可以对任何细胞染色，克服了免疫组化染色，受细胞表面抗原表达率的影响. 第三，试验方法简便，可用于普查现场，还可做多因素分析，进一步提高检出的敏感性. 从本试验结果可以看出，肠道脱落细胞分析，对腺瘤的诊断尚存在一定不足，我们认为主要原因是腺瘤细胞脱落的数量较癌细胞少，且腺瘤的DNA含量变化小，核型图象分析对腺瘤细胞的判断方法仍有待进一步探索., 百拇医药(吴显文1 李世荣2 田玉旺3 王志红2 邢惠清3)