人乳头瘤病毒阳性食管鳞癌E6癌基因蛋白免疫组 化检测及超微结构观察
兰州军区乌鲁木齐总医院病理科 乌鲁木齐 830000
邹赛英，女，1954-06-30生，陕西人，汉族. 1983年兰州军区高等医学 专科学校乌鲁木齐分校医疗大专毕业，副主任医师，从事肿瘤病理的诊断及研究，发表论文30篇，获军队优秀科技成果三等奖一项，四等奖三项.
项目负责人 邹赛英，830000，乌鲁木齐兰州军区乌鲁木齐总医院病理科，新疆乌鲁木齐友好北路41号. Correspondence to Sai-Ying Zou, Department of Pathology, Chinese PLA Urumqi General Hospital of Lanzhou Command Area, 41 Youhao Beilu, Urumqi 830000, Xinjiang Autonomous Region, China
, 百拇医药
Tel. +86·991·4842256-376
收稿日期 1997-07-17 接收日期 1997-11-02
Immunohistochemical and electron microscopic observation on positive HPV16E6 protein in esophagealcancer
Sai-Ying Zou, Xu-Ming Liu, Xin-Ping Tang and Ping Wang
Department Pathology, Chinese PLA Urumqi General Hospital of Lanzhou Command Area,Urumqi 830000, Xinjiang Autonomous Region, China
, 百拇医药
Abstract
AIM To study the expression of HPV16E6 protein and ultrastructure in human esophageal cancer.
METHODS By using immunohistochemical method, 45 patients with positive HPV16E6 protein were studied and microscopic observation was made.
RESULTS Nuclear HPV16E6 protein was present in 45 (84.9%) cases of esophageal squamous cell cancer specimens in HPV DNA positive patients by immunohistochemical method. Under the electron microscope, the inter and perichromatin granules as well as nuclear bodies were increased in the nuclei in all biopsies with positive HPV16E6 protein, but no HPV particle was found in cancer cells.
, 百拇医药
CONCLUSION HPV16DNAE6 was integrated into the cellular genome. The E6 early genes of HPV16DNA were closely related to the inter and perichromatin granules as well as nuclear bodies hyperplasia in the nuclei of esophageal cancer.
Subject headings oncogene proteins, viral/metabolism; esophageal neoplasms/metabolism; carcinoma, squamous cell/metabolism; esophageal neoplasms/ultrastructure; carcinoma, squamous cell/ultrastructure
, http://www.100md.com
Zou SY, Liu XM, Tang XP, Wang P. Immunohistochemical and electron microscopic observation on positive HPV16E6 protein in esophageal cancer. Huaren Xiaohua Zazhi, 1998;6(1):47-48
摘要
目的 观察人乳头瘤病毒(HPV)E6癌基因蛋白阳性食管鳞癌的超微结构特性，探讨食管鳞状细胞癌与E6癌基因蛋白的关系.
方法 采用微波免疫组化技术，对53例食管鳞癌HPV阳性病例进行HPVE6蛋白检测，同时进行电镜观察.
结果 45例阳性的食管鳞癌中，高分化鳞癌2例(4.4%)，中分化鳞癌18例(40.0%)，低分化鳞癌25例(55.6%). 电镜观察：HPV阳性的食管鳞癌主要呈低度分化. 除显示核质比例增加，核外形不规则以外，核小体及染色质间、染色质周围颗粒显著增加.超微结构中未见病毒颗粒.
, 百拇医药
结论 食管鳞状细胞癌中HPVE6蛋白与食管癌细胞的异常增生、代谢旺盛有一定的关系.
主题词 癌基因蛋白质类，病毒性/代谢；食管肿瘤/超微结构；食管肿瘤/代谢；癌，鳞状细胞/超微结构；癌，鳞状细胞/代谢
邹赛英, 刘旭明, 唐新萍, 王萍. 人乳头瘤病毒阳性食管鳞癌E6癌基因蛋白免疫组化检测及超微结构观察. 华人消化杂志, 1998;6(1):47-48
0 引言
在近年乳头瘤病毒与人类鳞状细胞癌的研究中，高危HPV16/18DNA的早期转化基因E6蛋白与鳞癌的密切关系已开始得到证明[1，2]，食管鳞状细胞癌中HPVE6的表达及超微结构变化尚未见报道. 我们采用免疫组化技术，对53例经多重PCR检测人乳头瘤病毒阳性的食管鳞癌标本进行HPVE6蛋白检测，同时进行电镜观察，结合资料特点予以探讨分析.
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 对象 HPV阳性食管鳞癌53例，将手术切除的食管鳞状细胞癌标本肿瘤区域组织10%福尔马林固定，常规石蜡切片2张，一张HE染色，病理诊断分型. 另一张进行免疫组化E6蛋白检测.
1.2 方法 ①免疫组化检测：使用浙江产YWY781型医用微波炉. 先进行抗原修复，然后进行微波ABC免疫组化法. 光镜观察：以胞核内出现棕黄色颗粒计为阳性，设正常胎儿食管粘膜和非癌食管组织为阴性对照. ②电镜观察：食管鳞癌标本经3.75%戊二醛及1%锇酸双重固定，梯度丙酮脱水，低粘度包埋剂浸透并包埋. 半薄切片定位于鳞状细胞癌组织，超薄切片经铅铀双重染色，用JEM-1010电镜观察.
, 百拇医药
2 结果
多重引物PCR检测HPV阳性的53例食管鳞癌中，HPVE6癌基因蛋白免疫组化检测阳性45例，其中高分化鳞癌2例(4.4%)，中分化鳞癌18例(40.0%)，低分化鳞癌25例(55.6%)；其表达特征为：阳性颗粒位于胞核内，呈点灶状或片状、全层性分布，以低分化鳞癌的表达强度最高. 正常胎儿和非癌食管鳞状上皮呈阴性.
食管鳞癌的电镜样品10例中，HPVE6阳性6例，电镜观察：癌巢外层的基底膜基本消失，细胞间隙变窄，部分出现微突及绒毛样结构并出现假腺腔；桥粒明显减少甚至消失. 胞浆内张力原纤维束减少，杂乱排列，偶见桥粒；游离核糖体及糖元颗粒呈片状湖状区域性分布；滑面内质网及粗面内质网或明显减少或明显增多，分布不均匀；线粒体较少者胞浆呈空泡状，多者则呈明显畸形、拥挤肿胀状态. 胞核增大，畸形、核突起明显增多，核浆比例明显失调；常染色质及异染色质增多、分布异常；核小体及染色质间、染色质周围颗粒增多；核仁增多、增大，常见核内包含体. 核内未见到病毒颗粒；间质内淋巴细胞及浆细胞浸润显著.
, http://www.100md.com
3 讨论
人乳头瘤病毒是一种具有异质性的致瘤病毒，在高危HPV16/18DNA读码框架早期区列的亚基因片段中，E6属于早期转化基因，编码一种158个氨基酸的核蛋白. 近年的研究证实，HPV16及18E6基因所编码的E6蛋白属于肿瘤早期特异转化蛋白，是具有生物活性的病毒癌蛋白，表达于与HPV有关的癌细胞中；889%的HPV16DNA阳性宫颈癌病例中可以检出E6基因. 在HPV16导致宫颈癌的过程 中，E6基因多位点整合在宿主细胞基因组DNA上，始终完整保留并活跃转录，从而构成宫颈鳞状细胞转化为癌的关键因素[1-3]. 本组资料检测结果表明在HPV阳性的食管鳞癌标本中，HPVE6有明显的表达，HPVE6基因存在于食管鳞癌细胞核内，进行转录编码，生成E6蛋白表达，并参与食管鳞癌的发生发展过程.
我们在HPVE6蛋白阳性的食管鳞癌电镜观察中，未查见病毒颗粒，其主要的超微结构变化为核常染色质明显增多，核内小体及染色质间、染色质周围颗粒增多等核物质代谢旺盛的表现；核内小体的出现在HPV16DNAE6阳性表达者中多见，二者呈正相关的关系；各细胞器的变化表现为低分化鳞癌的特征. 提示HPV16感染宿主的鳞状细胞后，E6基因在核内整合、复制，从而干扰细胞的正常代谢，核物质异常增殖，导致细胞发生恶性转化，尤其与低分化鳞癌的发生发展可能有密切的关系，有待于深入研究.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 Chang FJ, Syrianen S, Shen Q, Ji HX, Syrjianen K. Human papilloma virus (HPV) DNA in the esophageal precancer lesions and
squamous cell carcinomas from China. Int J Cancer, 1990;45(1):21-25
2 Si JY, Lee K, Han R, Zhang W, Tan BB, Song GX et al. A research for the relationship between human papillomavirus and
human uterine cervical carcinoma. I. The identification of viral genome and subgenomic sequences in biopsies of Chinese patients.
J Cancer Res Clin Oncol, 1991;117(5):454-459, 百拇医药(邹赛英 刘旭明 唐新萍 王萍)
邹赛英，女，1954-06-30生，陕西人，汉族. 1983年兰州军区高等医学 专科学校乌鲁木齐分校医疗大专毕业，副主任医师，从事肿瘤病理的诊断及研究，发表论文30篇，获军队优秀科技成果三等奖一项，四等奖三项.
项目负责人 邹赛英，830000，乌鲁木齐兰州军区乌鲁木齐总医院病理科，新疆乌鲁木齐友好北路41号. Correspondence to Sai-Ying Zou, Department of Pathology, Chinese PLA Urumqi General Hospital of Lanzhou Command Area, 41 Youhao Beilu, Urumqi 830000, Xinjiang Autonomous Region, China
, 百拇医药
Tel. +86·991·4842256-376
收稿日期 1997-07-17 接收日期 1997-11-02
Immunohistochemical and electron microscopic observation on positive HPV16E6 protein in esophagealcancer
Sai-Ying Zou, Xu-Ming Liu, Xin-Ping Tang and Ping Wang
Department Pathology, Chinese PLA Urumqi General Hospital of Lanzhou Command Area,Urumqi 830000, Xinjiang Autonomous Region, China
, 百拇医药
Abstract
AIM To study the expression of HPV16E6 protein and ultrastructure in human esophageal cancer.
METHODS By using immunohistochemical method, 45 patients with positive HPV16E6 protein were studied and microscopic observation was made.
RESULTS Nuclear HPV16E6 protein was present in 45 (84.9%) cases of esophageal squamous cell cancer specimens in HPV DNA positive patients by immunohistochemical method. Under the electron microscope, the inter and perichromatin granules as well as nuclear bodies were increased in the nuclei in all biopsies with positive HPV16E6 protein, but no HPV particle was found in cancer cells.
, 百拇医药
CONCLUSION HPV16DNAE6 was integrated into the cellular genome. The E6 early genes of HPV16DNA were closely related to the inter and perichromatin granules as well as nuclear bodies hyperplasia in the nuclei of esophageal cancer.
Subject headings oncogene proteins, viral/metabolism; esophageal neoplasms/metabolism; carcinoma, squamous cell/metabolism; esophageal neoplasms/ultrastructure; carcinoma, squamous cell/ultrastructure
, http://www.100md.com
Zou SY, Liu XM, Tang XP, Wang P. Immunohistochemical and electron microscopic observation on positive HPV16E6 protein in esophageal cancer. Huaren Xiaohua Zazhi, 1998;6(1):47-48
摘要
目的 观察人乳头瘤病毒(HPV)E6癌基因蛋白阳性食管鳞癌的超微结构特性，探讨食管鳞状细胞癌与E6癌基因蛋白的关系.
方法 采用微波免疫组化技术，对53例食管鳞癌HPV阳性病例进行HPVE6蛋白检测，同时进行电镜观察.
结果 45例阳性的食管鳞癌中，高分化鳞癌2例(4.4%)，中分化鳞癌18例(40.0%)，低分化鳞癌25例(55.6%). 电镜观察：HPV阳性的食管鳞癌主要呈低度分化. 除显示核质比例增加，核外形不规则以外，核小体及染色质间、染色质周围颗粒显著增加.超微结构中未见病毒颗粒.
, 百拇医药
结论 食管鳞状细胞癌中HPVE6蛋白与食管癌细胞的异常增生、代谢旺盛有一定的关系.
主题词 癌基因蛋白质类，病毒性/代谢；食管肿瘤/超微结构；食管肿瘤/代谢；癌，鳞状细胞/超微结构；癌，鳞状细胞/代谢
邹赛英, 刘旭明, 唐新萍, 王萍. 人乳头瘤病毒阳性食管鳞癌E6癌基因蛋白免疫组化检测及超微结构观察. 华人消化杂志, 1998;6(1):47-48
0 引言
在近年乳头瘤病毒与人类鳞状细胞癌的研究中，高危HPV16/18DNA的早期转化基因E6蛋白与鳞癌的密切关系已开始得到证明[1，2]，食管鳞状细胞癌中HPVE6的表达及超微结构变化尚未见报道. 我们采用免疫组化技术，对53例经多重PCR检测人乳头瘤病毒阳性的食管鳞癌标本进行HPVE6蛋白检测，同时进行电镜观察，结合资料特点予以探讨分析.
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 对象 HPV阳性食管鳞癌53例，将手术切除的食管鳞状细胞癌标本肿瘤区域组织10%福尔马林固定，常规石蜡切片2张，一张HE染色，病理诊断分型. 另一张进行免疫组化E6蛋白检测.
1.2 方法 ①免疫组化检测：使用浙江产YWY781型医用微波炉. 先进行抗原修复，然后进行微波ABC免疫组化法. 光镜观察：以胞核内出现棕黄色颗粒计为阳性，设正常胎儿食管粘膜和非癌食管组织为阴性对照. ②电镜观察：食管鳞癌标本经3.75%戊二醛及1%锇酸双重固定，梯度丙酮脱水，低粘度包埋剂浸透并包埋. 半薄切片定位于鳞状细胞癌组织，超薄切片经铅铀双重染色，用JEM-1010电镜观察.
, 百拇医药
2 结果
多重引物PCR检测HPV阳性的53例食管鳞癌中，HPVE6癌基因蛋白免疫组化检测阳性45例，其中高分化鳞癌2例(4.4%)，中分化鳞癌18例(40.0%)，低分化鳞癌25例(55.6%)；其表达特征为：阳性颗粒位于胞核内，呈点灶状或片状、全层性分布，以低分化鳞癌的表达强度最高. 正常胎儿和非癌食管鳞状上皮呈阴性.
食管鳞癌的电镜样品10例中，HPVE6阳性6例，电镜观察：癌巢外层的基底膜基本消失，细胞间隙变窄，部分出现微突及绒毛样结构并出现假腺腔；桥粒明显减少甚至消失. 胞浆内张力原纤维束减少，杂乱排列，偶见桥粒；游离核糖体及糖元颗粒呈片状湖状区域性分布；滑面内质网及粗面内质网或明显减少或明显增多，分布不均匀；线粒体较少者胞浆呈空泡状，多者则呈明显畸形、拥挤肿胀状态. 胞核增大，畸形、核突起明显增多，核浆比例明显失调；常染色质及异染色质增多、分布异常；核小体及染色质间、染色质周围颗粒增多；核仁增多、增大，常见核内包含体. 核内未见到病毒颗粒；间质内淋巴细胞及浆细胞浸润显著.
, http://www.100md.com
3 讨论
人乳头瘤病毒是一种具有异质性的致瘤病毒，在高危HPV16/18DNA读码框架早期区列的亚基因片段中，E6属于早期转化基因，编码一种158个氨基酸的核蛋白. 近年的研究证实，HPV16及18E6基因所编码的E6蛋白属于肿瘤早期特异转化蛋白，是具有生物活性的病毒癌蛋白，表达于与HPV有关的癌细胞中；889%的HPV16DNA阳性宫颈癌病例中可以检出E6基因. 在HPV16导致宫颈癌的过程 中，E6基因多位点整合在宿主细胞基因组DNA上，始终完整保留并活跃转录，从而构成宫颈鳞状细胞转化为癌的关键因素[1-3]. 本组资料检测结果表明在HPV阳性的食管鳞癌标本中，HPVE6有明显的表达，HPVE6基因存在于食管鳞癌细胞核内，进行转录编码，生成E6蛋白表达，并参与食管鳞癌的发生发展过程.
我们在HPVE6蛋白阳性的食管鳞癌电镜观察中，未查见病毒颗粒，其主要的超微结构变化为核常染色质明显增多，核内小体及染色质间、染色质周围颗粒增多等核物质代谢旺盛的表现；核内小体的出现在HPV16DNAE6阳性表达者中多见，二者呈正相关的关系；各细胞器的变化表现为低分化鳞癌的特征. 提示HPV16感染宿主的鳞状细胞后，E6基因在核内整合、复制，从而干扰细胞的正常代谢，核物质异常增殖，导致细胞发生恶性转化，尤其与低分化鳞癌的发生发展可能有密切的关系，有待于深入研究.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 Chang FJ, Syrianen S, Shen Q, Ji HX, Syrjianen K. Human papilloma virus (HPV) DNA in the esophageal precancer lesions and
squamous cell carcinomas from China. Int J Cancer, 1990;45(1):21-25
2 Si JY, Lee K, Han R, Zhang W, Tan BB, Song GX et al. A research for the relationship between human papillomavirus and
human uterine cervical carcinoma. I. The identification of viral genome and subgenomic sequences in biopsies of Chinese patients.
J Cancer Res Clin Oncol, 1991;117(5):454-459, 百拇医药(邹赛英 刘旭明 唐新萍 王萍)