幽门螺杆菌对胃上皮细胞增殖的影响
浙江医科大学附属二院外科 浙江省杭州市 310009
项目负责人 梁刚,浙江医科大学附属二院外科 浙江省杭州市 310009 收搞日期 1997-07-10
Subject headings helicobacter pylori/pathogenicity; stomach/pathology; epithelium/pathology;
helicobacter infections/pathology
主题词 螺杆菌，幽门/致病力；胃/病理学；上皮/病理学；螺杆菌感染/病理学
, 百拇医药
梁刚, 朱德升, 朱永良. 幽门螺杆菌对胃上皮细胞增殖的影响. 华人消化杂志, 1998;6(1):89-90
1 材料和方法
1.1 材料 5′-溴-2′脱氧尿苷(中国科学院上海生物化学研究所)，抗Brdu单克隆抗体(美国Zymed公司)，RPMI 1640细胞培养液(美国Gibcow公司)PCNA MoAb(美国Dako公司)，链霉亲和素—生物素—HRP试剂盒(福建迈新公司)，脲酶试剂及Giemsa试剂(浙医二院消化实验室). 收集慢性浅表性胃炎胃粘膜69例，经Giemsa染色及脲酶试验2种方法检测，其中Hp阳性37例，男12例，女20例，平均年龄44.4岁±12.4岁(12岁～76岁)；Hp阴性32例，男22例，女15例，平均年龄42岁±13.4岁(23岁～76岁).
1.2 方法 采用活检胃粘膜组织体外Brdu掺入测定S期细胞标记率，方法按参考文献[1].
, 百拇医药
胃小凹下腺体阳性细胞数
LI%= ×100%.
500
PCNA指数测定按试剂盒说明书操作进行，细胞核PCNA阳性细胞数
PCNA指数= ×100%.
500
2 结果
2.1 体外Brdu掺入法检测胃粘膜中S期细胞标记率 结果表明：Hp阳性组(37例)胃窦胃小凹下腺体S期细胞标记率为13.97±6.93，Hp感染阴性者为3.88±2.80(32例)，两者比较有显著差异(P<0.01). 说明Hp体内感染可促进胃窦部上皮细胞的增殖.
, 百拇医药
2.2 Hp感染与胃粘膜细胞核PCNA关系 结果表明：Hp感染阳性者(37例)PCNA指数4.32±1.38显著高于Hp阴性者(32例)1.62±0.92
(P<0.01). 提示Hp感染可促进胃上皮细胞增殖.
3 讨论
检测S期细胞的方法很多，其中常用的有3H-TdR标记掺入，Brdu标记掺入和增殖细胞核抗原检测. 3H-TdR标记掺入和Brdu掺入都可有接标记S期细胞，但前者较复杂且需接触同位素. Brdu为DNA合成的前体物质，在DNA合成过程中掺入DNA，该方法简便、准确. 增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)是增殖期细胞核内表达的一种核蛋白，是DNA合成所必需的. PCNA表达与细胞增殖周期有关，在G期PCNA指数表达逐渐增加，S期达到最高峰，而G2/M期减少[2]. PCNA免疫组织化学染色检测S期细胞是一种更为简便的方法.
, 百拇医药
胃粘膜表层的上皮细胞一般为基因稳定细胞，难以增殖分裂，当胃上皮受损伤或脱落时，胃小凹下增殖区的未分化细胞增殖分裂并逐步迁移至胃腔表面，通常在迁移过程中失去其分裂增殖能力并行使成熟细胞的功能，因此各种理化因子主要影响胃小凹下未分化细胞的增殖. 对正常大鼠和人胃粘膜细胞研究表明，胃小凹下腺体S期细胞标记率最高[3]. 所以本文选择了该区计数S期细胞标记率；同时观察胃表层上皮细胞及深层腺体细胞，发现S期细胞标记率很低，这与国外文献报道相似[1]. 那么Hp感染时，Hp是否促进胃小凹下细胞增殖呢?本文用Brdu体外掺入检测S期细胞标记率及增殖细胞核抗原，研究Hp感染时胃上皮细胞增殖的影响. 结果发现Hp感染者胃粘膜增殖区S期细胞标记率及PCNA指数显著高于Hp阴性者(P<0.01)，证实 Hp体内感染可促进上皮细胞增殖. 可能Hp使细胞增殖加快，DNA复制差错发生率增加，对诱变剂更为敏感，Hp与其他致癌因子协同作用，引起细胞癌变. Cahill et al[4]研究胃炎、癌前病变及胃癌中Hp感染对胃粘膜上皮细胞增殖的影响，发现Hp可促进Hp相关性胃炎的胃上皮细胞增殖，但在癌前病变及胃癌中有无Hp感染对胃上皮细胞增殖并无影响. 说明Hp促细胞增殖作用可能只是细胞转化之前的一种早期反应，是胃癌发生的始动过程. 尽管多数研究认为Hp可促进胃粘膜上皮细胞增殖，但也有很多不同的结果. 如Chow et al[5]用检测S期细胞的方法研究表明Hp在体内并不能促进细胞增殖，产生这种差异的原因可能与体内胃粘膜上皮细胞增殖还受许多其他因素的影响.
, 百拇医药
4 参考文献
1 Lynch DAF, Mapstone NP, Clarke AMT, Sobala GM, Jackson P, Morrison Iet al. Cell proliferation in helicobacter pylori
associated gastritis and the effect of eradication therapy. Gut,1995;36(3):345-350
2 Carcia RL, Coltrera MD, Gown AM. Analysis of proliferative grade using anti-PCNA/cyclin monoclonal antibodies in fixed,embed-ded tissues:comparison with flow cytometrie analysis. Am J Pathol,1989;134(4):733-739
, 百拇医药
3 Hallissey M, Dunn JA, Ward LC, Allum WH. The Second. Brotish shomach Cancer group trial of adjuvent radiotherapy
of chemotherapy in resectable gastric cancer: five year follow up. Lancet,1994;343(5):1309-1312
4 Cahill RJ, Kilgallen C, Bearrie S, Bulew S, Kelly KA. Gastric epithelial cell kinetics in the progression from normal mucosa to
gastric carcinoma. Gut, 1 996;38(1):177-181
5 Chow KW, Bank S, Ahn J, Robert J, Blumstein M, Kranz Vet al. Helicobacteri infection does not increase gastric antrum mucosal
cell proliferation. Am J Gastroenterol, 1995;90(1):64-69, 百拇医药(梁刚 朱德升 朱永良)
项目负责人 梁刚,浙江医科大学附属二院外科 浙江省杭州市 310009 收搞日期 1997-07-10
Subject headings helicobacter pylori/pathogenicity; stomach/pathology; epithelium/pathology;
helicobacter infections/pathology
主题词 螺杆菌，幽门/致病力；胃/病理学；上皮/病理学；螺杆菌感染/病理学
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梁刚, 朱德升, 朱永良. 幽门螺杆菌对胃上皮细胞增殖的影响. 华人消化杂志, 1998;6(1):89-90
1 材料和方法
1.1 材料 5′-溴-2′脱氧尿苷(中国科学院上海生物化学研究所)，抗Brdu单克隆抗体(美国Zymed公司)，RPMI 1640细胞培养液(美国Gibcow公司)PCNA MoAb(美国Dako公司)，链霉亲和素—生物素—HRP试剂盒(福建迈新公司)，脲酶试剂及Giemsa试剂(浙医二院消化实验室). 收集慢性浅表性胃炎胃粘膜69例，经Giemsa染色及脲酶试验2种方法检测，其中Hp阳性37例，男12例，女20例，平均年龄44.4岁±12.4岁(12岁～76岁)；Hp阴性32例，男22例，女15例，平均年龄42岁±13.4岁(23岁～76岁).
1.2 方法 采用活检胃粘膜组织体外Brdu掺入测定S期细胞标记率，方法按参考文献[1].
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胃小凹下腺体阳性细胞数
LI%= ×100%.
500
PCNA指数测定按试剂盒说明书操作进行，细胞核PCNA阳性细胞数
PCNA指数= ×100%.
500
2 结果
2.1 体外Brdu掺入法检测胃粘膜中S期细胞标记率 结果表明：Hp阳性组(37例)胃窦胃小凹下腺体S期细胞标记率为13.97±6.93，Hp感染阴性者为3.88±2.80(32例)，两者比较有显著差异(P<0.01). 说明Hp体内感染可促进胃窦部上皮细胞的增殖.
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2.2 Hp感染与胃粘膜细胞核PCNA关系 结果表明：Hp感染阳性者(37例)PCNA指数4.32±1.38显著高于Hp阴性者(32例)1.62±0.92
(P<0.01). 提示Hp感染可促进胃上皮细胞增殖.
3 讨论
检测S期细胞的方法很多，其中常用的有3H-TdR标记掺入，Brdu标记掺入和增殖细胞核抗原检测. 3H-TdR标记掺入和Brdu掺入都可有接标记S期细胞，但前者较复杂且需接触同位素. Brdu为DNA合成的前体物质，在DNA合成过程中掺入DNA，该方法简便、准确. 增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)是增殖期细胞核内表达的一种核蛋白，是DNA合成所必需的. PCNA表达与细胞增殖周期有关，在G期PCNA指数表达逐渐增加，S期达到最高峰，而G2/M期减少[2]. PCNA免疫组织化学染色检测S期细胞是一种更为简便的方法.
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胃粘膜表层的上皮细胞一般为基因稳定细胞，难以增殖分裂，当胃上皮受损伤或脱落时，胃小凹下增殖区的未分化细胞增殖分裂并逐步迁移至胃腔表面，通常在迁移过程中失去其分裂增殖能力并行使成熟细胞的功能，因此各种理化因子主要影响胃小凹下未分化细胞的增殖. 对正常大鼠和人胃粘膜细胞研究表明，胃小凹下腺体S期细胞标记率最高[3]. 所以本文选择了该区计数S期细胞标记率；同时观察胃表层上皮细胞及深层腺体细胞，发现S期细胞标记率很低，这与国外文献报道相似[1]. 那么Hp感染时，Hp是否促进胃小凹下细胞增殖呢?本文用Brdu体外掺入检测S期细胞标记率及增殖细胞核抗原，研究Hp感染时胃上皮细胞增殖的影响. 结果发现Hp感染者胃粘膜增殖区S期细胞标记率及PCNA指数显著高于Hp阴性者(P<0.01)，证实 Hp体内感染可促进上皮细胞增殖. 可能Hp使细胞增殖加快，DNA复制差错发生率增加，对诱变剂更为敏感，Hp与其他致癌因子协同作用，引起细胞癌变. Cahill et al[4]研究胃炎、癌前病变及胃癌中Hp感染对胃粘膜上皮细胞增殖的影响，发现Hp可促进Hp相关性胃炎的胃上皮细胞增殖，但在癌前病变及胃癌中有无Hp感染对胃上皮细胞增殖并无影响. 说明Hp促细胞增殖作用可能只是细胞转化之前的一种早期反应，是胃癌发生的始动过程. 尽管多数研究认为Hp可促进胃粘膜上皮细胞增殖，但也有很多不同的结果. 如Chow et al[5]用检测S期细胞的方法研究表明Hp在体内并不能促进细胞增殖，产生这种差异的原因可能与体内胃粘膜上皮细胞增殖还受许多其他因素的影响.
, 百拇医药
4 参考文献
1 Lynch DAF, Mapstone NP, Clarke AMT, Sobala GM, Jackson P, Morrison Iet al. Cell proliferation in helicobacter pylori
associated gastritis and the effect of eradication therapy. Gut,1995;36(3):345-350
2 Carcia RL, Coltrera MD, Gown AM. Analysis of proliferative grade using anti-PCNA/cyclin monoclonal antibodies in fixed,embed-ded tissues:comparison with flow cytometrie analysis. Am J Pathol,1989;134(4):733-739
, 百拇医药
3 Hallissey M, Dunn JA, Ward LC, Allum WH. The Second. Brotish shomach Cancer group trial of adjuvent radiotherapy
of chemotherapy in resectable gastric cancer: five year follow up. Lancet,1994;343(5):1309-1312
4 Cahill RJ, Kilgallen C, Bearrie S, Bulew S, Kelly KA. Gastric epithelial cell kinetics in the progression from normal mucosa to
gastric carcinoma. Gut, 1 996;38(1):177-181
5 Chow KW, Bank S, Ahn J, Robert J, Blumstein M, Kranz Vet al. Helicobacteri infection does not increase gastric antrum mucosal
cell proliferation. Am J Gastroenterol, 1995;90(1):64-69, 百拇医药(梁刚 朱德升 朱永良)