免疫复合物对溃疡性结肠炎的致病作用
项目负责人 何青雯,昆明医学院第一附属医院消化科 云南省昆明市 650032 收搞日期 1997-08-20 接收日期 1997-10-18
Subject headings colitis, ulcerative/immunology; antigen antibody complex/analysis; cditis, ulcerative/etiology
主题词 结肠炎，溃疡性/免疫学；抗原抗体复合物/分析；结肠炎，溃疡性/病因学
何青雯, 陈耀明, 贾友兰, 李晓燕, 蒋海燕. 免疫复合物对溃疡性结肠炎的致病作用. 华人消化杂志, 1998;6(1):87
, http://www.100md.com
免疫复合物(IC)在炎症性肠病(IBD)中的致病作用已受到重视[1，2]，国外学者相继在IBD者血清和肠粘膜中检测到循环免疫复合物(CIC)和补体复合物[3，4]，甚至用抗原过剩型IC诱发了兔的实验性肠炎，其病理特征相似于人类的溃疡性结肠炎(UC). 我们的研究旨在了解IC在UC中的致病作用.
1 对象和方法
1.1 对象 我院收治的10例UC为研究对象，男∶女=5∶5，平均年龄31.5岁. 患者有典型临床表现，肠镜及粘膜病理检查均支持UC诊断，多次大便细菌培养阴性. 正常对照54例采静脉血行CIC测定，正常对照5例做肠粘膜活检及石蜡切片，待行沉积的免疫复合物观察对照.
1.2 方法 ①CIC测定：CIC通过聚乙二醇(PEG)沉淀法测定，用许元初[5]方法稍加改良. PEG终浓度4%，血清稀释度1∶30，用721型分光光度计测出光密度(OD)值. ②结肠石蜡切片C3补体复合物观察：C3与其余补体成分，正常时均以无活性形式存在体液中，抗原抗体复合物等可活化补体，触发免疫性炎症，一旦组织中检出C3提示补体链已活化且有IC沉积. 免疫荧光法可使沉积的C3特异地借助抗C3荧光抗体显现出来. 直观又特异. (a)结肠活组织石蜡切片制备. 用手术方式或内镜活检钳采取所需结肠粘膜，4℃生理盐水充分洗涤，乙醇、中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋连续切片，常规脱蜡后用0.1%胰蛋白酶37℃消化30min后再用0.01mol/L PBS洗净，冷风吹干备用. 上述切片也平行做HE染色观察. (b)免疫荧光染色及观察：用羊抗人C3荧光抗体，常规直接染色后洗净[5]，短时内置荧光显微镜下专人观察，并记录或照相.
, 百拇医药
2 结果
2.1 UC者CIC水平下降 与正常对照组相比，差异非常显著. 正常组CIC值x-±s=0.070±0.034，UC组CIC值x-±s=0.037±0.053，P<0.05.
2.2 UC组中，8例患者于溃疡形成区域周围粘膜层中见到稀疏、密集不等的C3免疫复合物，呈耀眼颗粒状翠绿色荧光. 正常对照组中未见此现象. 而C3复合物密集区也是IgG细胞密集区.
3 讨论
CIC是一种生理性产物，主要由巨噬细胞、红细胞清除[1]. 若沉积于组织可引起免疫性炎症. 我们的实验表明，急性UC者CIC水平下降，并在病变肠粘膜层中发现C3复合物沉积，符合免疫复合物病特征. 这说明CIC的下降与其沉积于病变局部有关，IC的确参与了UC的发病过程；实验也表明，IC的致病性不在于其血中浓度，而在于它在组织中的沉积. 至于它以什么机制特异沉积于结肠组织，目前尚不清楚. 一些UC常继发于某种肠道感染之后也提示：发病前的结肠损害或炎症的存在，可能是UC的IC沉积和发病的条件之一.
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4 参考文献
1 粕川礼司. 免疫复合物病[日]. 科学文献出版社重庆分社，1986：10-30
2 Hodgson HJF, Potter BJ, Kinnet JS, Jewell DP. Immunecomplex mediated colitis in rabbits. Gut, 1978;19(3):225-232
3 Kemler BJ, Alpert E. IBD associated CIC. Gut,1980;21(3):195-201
4 Halstenson TS, Mollnes TE, Fausa O. Deposits of terminal complement complex in muscularis mucosae and submucosal vessels in
UC and CD of the colon. Gut,1989;30(3):361-369
5 许元初. 影响聚乙二醇沉淀试验的因素探讨. 上海免疫学杂志，1982；2(4)：36-39, 百拇医药(何青雯 陈耀明 贾友兰 李晓燕 蒋海燕)
Subject headings colitis, ulcerative/immunology; antigen antibody complex/analysis; cditis, ulcerative/etiology
主题词 结肠炎，溃疡性/免疫学；抗原抗体复合物/分析；结肠炎，溃疡性/病因学
何青雯, 陈耀明, 贾友兰, 李晓燕, 蒋海燕. 免疫复合物对溃疡性结肠炎的致病作用. 华人消化杂志, 1998;6(1):87
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免疫复合物(IC)在炎症性肠病(IBD)中的致病作用已受到重视[1，2]，国外学者相继在IBD者血清和肠粘膜中检测到循环免疫复合物(CIC)和补体复合物[3，4]，甚至用抗原过剩型IC诱发了兔的实验性肠炎，其病理特征相似于人类的溃疡性结肠炎(UC). 我们的研究旨在了解IC在UC中的致病作用.
1 对象和方法
1.1 对象 我院收治的10例UC为研究对象，男∶女=5∶5，平均年龄31.5岁. 患者有典型临床表现，肠镜及粘膜病理检查均支持UC诊断，多次大便细菌培养阴性. 正常对照54例采静脉血行CIC测定，正常对照5例做肠粘膜活检及石蜡切片，待行沉积的免疫复合物观察对照.
1.2 方法 ①CIC测定：CIC通过聚乙二醇(PEG)沉淀法测定，用许元初[5]方法稍加改良. PEG终浓度4%，血清稀释度1∶30，用721型分光光度计测出光密度(OD)值. ②结肠石蜡切片C3补体复合物观察：C3与其余补体成分，正常时均以无活性形式存在体液中，抗原抗体复合物等可活化补体，触发免疫性炎症，一旦组织中检出C3提示补体链已活化且有IC沉积. 免疫荧光法可使沉积的C3特异地借助抗C3荧光抗体显现出来. 直观又特异. (a)结肠活组织石蜡切片制备. 用手术方式或内镜活检钳采取所需结肠粘膜，4℃生理盐水充分洗涤，乙醇、中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋连续切片，常规脱蜡后用0.1%胰蛋白酶37℃消化30min后再用0.01mol/L PBS洗净，冷风吹干备用. 上述切片也平行做HE染色观察. (b)免疫荧光染色及观察：用羊抗人C3荧光抗体，常规直接染色后洗净[5]，短时内置荧光显微镜下专人观察，并记录或照相.
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2 结果
2.1 UC者CIC水平下降 与正常对照组相比，差异非常显著. 正常组CIC值x-±s=0.070±0.034，UC组CIC值x-±s=0.037±0.053，P<0.05.
2.2 UC组中，8例患者于溃疡形成区域周围粘膜层中见到稀疏、密集不等的C3免疫复合物，呈耀眼颗粒状翠绿色荧光. 正常对照组中未见此现象. 而C3复合物密集区也是IgG细胞密集区.
3 讨论
CIC是一种生理性产物，主要由巨噬细胞、红细胞清除[1]. 若沉积于组织可引起免疫性炎症. 我们的实验表明，急性UC者CIC水平下降，并在病变肠粘膜层中发现C3复合物沉积，符合免疫复合物病特征. 这说明CIC的下降与其沉积于病变局部有关，IC的确参与了UC的发病过程；实验也表明，IC的致病性不在于其血中浓度，而在于它在组织中的沉积. 至于它以什么机制特异沉积于结肠组织，目前尚不清楚. 一些UC常继发于某种肠道感染之后也提示：发病前的结肠损害或炎症的存在，可能是UC的IC沉积和发病的条件之一.
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4 参考文献
1 粕川礼司. 免疫复合物病[日]. 科学文献出版社重庆分社，1986：10-30
2 Hodgson HJF, Potter BJ, Kinnet JS, Jewell DP. Immunecomplex mediated colitis in rabbits. Gut, 1978;19(3):225-232
3 Kemler BJ, Alpert E. IBD associated CIC. Gut,1980;21(3):195-201
4 Halstenson TS, Mollnes TE, Fausa O. Deposits of terminal complement complex in muscularis mucosae and submucosal vessels in
UC and CD of the colon. Gut,1989;30(3):361-369
5 许元初. 影响聚乙二醇沉淀试验的因素探讨. 上海免疫学杂志，1982；2(4)：36-39, 百拇医药(何青雯 陈耀明 贾友兰 李晓燕 蒋海燕)