胃癌和癌旁组织中Fas抗原表达与细胞凋亡的关系
第三军医大学西南医院消化科 重庆市 400038
刘海峰，男，1965-11-06生，河北省景县人，汉族. 1988年第三军医大学医学系本科毕业，1994年第三军医大学硕士，1995年博士，讲师，主治医师，主要从事消化系病诊治研究工作，发表论文16篇.
*军队医药卫生“九五”重点课题资助项目，No.962047.
项目负责人 刘海峰，400038，第三军医大学西南医院消化科，重庆市沙坪坝区高滩岩正街30号.
*Key project supported by the fund for Army Medical and Health 9th 5-year plan.
Correspondence to Hai-Feng Liu, Department of Gastroenterology, Southwest Hospital, Third Military Medical University, 30
, http://www.100md.com
Gaotanyan Zhengjie, Shapingba District, Chongqing 400038, China
Tel. +86·23·65318301-73049
收稿日期 1997-11-26
Relationship between Fas antigen expression and apoptosis in human gastric
carcinoma and adjacent noncancerous tissues
Hai-Feng Liu, Wei-Wen Liu, Dian-Chun Fang， and Rong-Pu Men
, 百拇医药
Department of Gastroenterology, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China
Abstract
AIM To determine the expression of Fas antigen and its relationship with apoptosis in human gastric carcinoma and adjacent noncancerous tissues.
METHODS Using immunohistochemical staining and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) technique, we observed the apoptotic cells and Fas antigen expression in 50 cases of gastric carcinoma tissues and 33 adjacent noncancerous tissues.
, 百拇医药
RESULTS Fas antigen expression in gastric carcinoma tissues (46.0%) was less frequent than that in noncancerous tissues (75.8%). Apoptotic index was significantly higher in noncancerous tissues (16.8%) than in gastric carcinoma tissues (5.8%) (t=8.63，P<0.01), and higher in Fas-positive tissues than in Fas-negative tissues (t=5.16 and t=3.71, P<0.05).
CONCLUSION The development of apoptosis in gastric carcinoma tissues and adjacent noncancerous tissues was related to Fas expression. The abnormal regulation of apoptosis may play an important role in the pathogenesis of gastric carcinoma.
, 百拇医药
Subject headings stomach neoplasms/immuno-logy; stomach neoplasms/pathology; apoptosis; antigens, CD95/metabolism
Liu HF, Liu WW, Fang DC, Men RP. Relationship between Fas antigen expression and apoptosis in human gastric carcinoma and adjacent noncancerous tissues. Huaren Xiaohua Zazhi,1998;6(4):321-322
摘要
目的 研究胃癌及癌旁组织中Fas抗原表达与细胞凋亡的关系，探讨Fas抗原及细胞凋亡在胃癌发病中的作用.
, http://www.100md.com
方法 采用免疫组织化学及脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术对胃癌组织50例及癌旁组织33例中Fas抗原表达状态及凋亡细胞进行原位观察和比较.
结果 胃癌组织Fas抗原表达率为46.0%，显著低于癌旁组织的75.8%(χ2=7.22，P<0.01). 胃癌组织凋亡细胞指数为5.8%，显著低于癌旁组织的16.8%(t=8.63，P<0.01)；Fas抗原表达阳性的胃癌和癌旁组织凋亡细胞指数显著高于Fas抗原阴性组(t=5.16和t=3.71，P<0.01).
结论 Fas抗原对胃癌及癌旁组织中的细胞凋亡具有促进性调控作用，细胞凋亡调控异常在胃癌发病中可能起重要作用.
主题词 胃肿瘤/免疫学；胃肿瘤/病理学；脱噬作用；抗原，CD95/代谢
, 百拇医药
刘海峰, 刘为纹, 房殿春, 门荣甫.胃癌和癌旁组织中Fas抗原表达与细胞凋亡的关系.华人消化杂志,1998;6(4):321-322
0 引言
细胞凋亡是机体发育和组织更新过程中清除细胞的主要途径，细胞凋亡过程的紊乱将导致发育异常和肿瘤形成[1]. Fas抗原是细胞凋亡的启动分子，可介导细胞发生凋亡[2]. 为了解Fas抗原在胃癌发病中的作用，我们采用免疫组织化学染色及脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术对胃癌及其相应的癌旁组织中Fas抗原表达状态及凋亡细胞进行观察和比较.
1 对象和方法
, 百拇医药
1.1 对象 胃癌组织50例及相应的癌旁组织33例均为我院1995/1997外科手术切除标本. 胃癌患者在接受手术前均未接受化疗、放疗或免疫治疗. 所有标本均经100ml/L福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，并经HE染色病理诊断证实.
1.2 方法
1.2.1 Fas抗原免疫组化染色 兔抗人Fas多克隆抗体(SC-715)及免疫组化试剂盒(Immunostain SP Kit)均为美国Santa Cruz公司产品. 石蜡切片常规脱蜡、水化，继以免疫组化试剂盒检测，步骤按说明书进行. Fas多克隆抗体1∶100稀释. 最后常规DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，封片. 以PBS替代第一抗体作阴性对照.
, 百拇医药
1.2.2 TUNEL染色 细胞凋亡原位检测试剂盒(In situ cell death detection Kit, POD)购自德国Boehringer Mannheim公司. 染色步骤： ①切片二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化；②3ml/L H2O2封闭30min；③20mg/L蛋白酶K消化液作用20min～25min; ④滴加TUNEL反应液，37℃孵育60min；⑤滴加过氧化物酶连接的抗荧光素抗体，37℃孵育30min；⑥DAB显色，苏木素复染，脱水透明，封片. 以PBS替代TUNEL反应液作阴性对照.
1.2.3 观察指标 光镜下观察Fas抗原免疫组化染色及TUNEL染色切片的显色反应，数5个以上高倍视野，不少于1000个细胞，计数阳性细胞数并以百分数表示，分别作为Fas抗原阳性细胞密度值及细胞凋亡指数. Fas抗原表达阳性细胞数≥10%为阳性，<10%判为阴性. 所得数据按不同分组用χ2检验或t检验进行统计处理.
, http://www.100md.com
2 结果
Fas抗原阳性信号呈棕黄色，主要位于细胞浆内和(或)细胞膜上，未见核内表达(图1). 胃癌组织50例中，Fas抗原表达阳性23例，阳性率为46.0%；癌旁组织33例中，Fas抗原表达阳性25例，阳性率为75.8%，两组之间存在显著性差异(P<0.01，表1).
表1 Fas抗原在胃癌及癌旁组织中的表达率
, http://www.100md.com
bP<0.01 vs 胃癌组织.
TUNEL阳性反应物质呈棕黄色，主要位于细胞核内，浓缩的核质紧贴于核膜，或核质呈现均匀的染色，少数细胞胞浆亦呈淡着色. 多数癌旁组织中的凋亡细胞在胃粘膜全层均有分布，少数癌旁组织中的凋亡细胞仅分布于粘膜表面上皮内，胃癌组织中的凋亡细胞呈单个散在分布和(或)呈簇状分布倾向(图2). 癌旁组织细胞凋亡指数显著高于胃癌组织(P<0.01). Fas抗原表达阳性的胃癌及癌旁组织细胞凋亡指数显著高于Fas抗原阴性组(P<0.01，表2). 经连续切片观察，胃癌及癌旁组织中Fas抗原表达与凋亡细胞在大多数病例具有同域性.
表2 胃癌及癌旁组织中Fas抗原表达与细胞凋亡的关系
, 百拇医药
bP<0.01 vs 胃癌组织；dP<0.01 vs Fas -组.
图1 胃癌组织，Fas抗原阳性反应物质位于胃癌细胞胞浆内，Fas阳性细胞呈弥漫性分布 SP法×200
图2 胃癌组织中的凋亡细胞，呈簇状分布倾向TUNEL染色×200
3 讨论
Fas抗原是一跨膜表面蛋白，属于TNFR/NGFR超家族的成员[3]. 晚近研究发现，Fas抗原在肝脏、心脏、肺、肾、卵巢组织中有表达[4，5]，而Fas抗原在胃癌及其相应的癌旁组织中的表达状态及其与细胞凋亡的关系，尚未见文献报道. 本研究发现，胃癌及癌旁组织中均有不同程度的Fas抗原表达，Fas抗原在癌旁组织中的表达率显著高于胃癌组织，Fas抗原表达阳性的胃癌及癌旁组织中的凋亡细胞指数均显著高于Fas抗原阴性组，表明Fas抗原对胃癌及癌旁组织中的细胞凋亡具有促进性调控作用，Fas抗原可能参与了对胃粘膜细胞恶性转化过程中的细胞凋亡的调控，Fas抗原异常表达在胃癌发生中可能具有重要意义.
, 百拇医药
细胞凋亡是由基因调控的细胞主动死亡过程，是程序性细胞死亡的主要形式，此过程的异常与肿瘤的发生有密切关系[6]. 本结果显示，胃癌组织凋亡细胞指数显著低于癌旁组织，提示在胃粘膜细胞恶性转化过程中可能存在细胞凋亡的抑制，而Fas抗原表达减产可能是细胞凋亡被抑制的重要机制之一. Fas抗原在胃癌发病中的生物学意义及其对细胞凋亡的调控机制有待深入研究.
4 参考文献
1 Thompson CB. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease. Science,1995;267(5203):1456-1462
2 Itoh N, Yonehara S, Ishii A, Yonehara M, Mizushima SI, Sameshima M et al. The polypeptide encoded by the cDNA for human
, 百拇医药
cell surface antigen Fas can mediate apoptosis. Cell, 1991;66(2):233-243
3 Martin SJ, Green DR. Protease activation during apoptosis death by a thousand cuts.Cell, 1995;82(2):345-351
4 Ryo K, Kamogawa Y, Ikeda I, Kimura T, Miyazono Y, Shimizu T et al. Fas and Fas ligand strongly expressed in liver of fulminant
hepatitis patients. Hepatology, 1995;22(4):230A
, 百拇医药 5 Leithauser F, Dhein J, Mechtersheimer G, Koretz K, Bruderlein S, Henne C et al. Constitutive and induced expression of APO1,A new member of the nerve growth factor/?tumor necrosis factor receptor superfamily, in normal and neoplastic cells.
Lab Invest, 1993;69(4):415-429
6 刘海峰，刘为纹. 细胞凋亡与肿瘤. 科学，1997;221(1):85-86, http://www.100md.com(刘海峰 刘为纹 房殿春 门荣甫)
刘海峰，男，1965-11-06生，河北省景县人，汉族. 1988年第三军医大学医学系本科毕业，1994年第三军医大学硕士，1995年博士，讲师，主治医师，主要从事消化系病诊治研究工作，发表论文16篇.
*军队医药卫生“九五”重点课题资助项目，No.962047.
项目负责人 刘海峰，400038，第三军医大学西南医院消化科，重庆市沙坪坝区高滩岩正街30号.
*Key project supported by the fund for Army Medical and Health 9th 5-year plan.
Correspondence to Hai-Feng Liu, Department of Gastroenterology, Southwest Hospital, Third Military Medical University, 30
, http://www.100md.com
Gaotanyan Zhengjie, Shapingba District, Chongqing 400038, China
Tel. +86·23·65318301-73049
收稿日期 1997-11-26
Relationship between Fas antigen expression and apoptosis in human gastric
carcinoma and adjacent noncancerous tissues
Hai-Feng Liu, Wei-Wen Liu, Dian-Chun Fang， and Rong-Pu Men
, 百拇医药
Department of Gastroenterology, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China
Abstract
AIM To determine the expression of Fas antigen and its relationship with apoptosis in human gastric carcinoma and adjacent noncancerous tissues.
METHODS Using immunohistochemical staining and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) technique, we observed the apoptotic cells and Fas antigen expression in 50 cases of gastric carcinoma tissues and 33 adjacent noncancerous tissues.
, 百拇医药
RESULTS Fas antigen expression in gastric carcinoma tissues (46.0%) was less frequent than that in noncancerous tissues (75.8%). Apoptotic index was significantly higher in noncancerous tissues (16.8%) than in gastric carcinoma tissues (5.8%) (t=8.63，P<0.01), and higher in Fas-positive tissues than in Fas-negative tissues (t=5.16 and t=3.71, P<0.05).
CONCLUSION The development of apoptosis in gastric carcinoma tissues and adjacent noncancerous tissues was related to Fas expression. The abnormal regulation of apoptosis may play an important role in the pathogenesis of gastric carcinoma.
, 百拇医药
Subject headings stomach neoplasms/immuno-logy; stomach neoplasms/pathology; apoptosis; antigens, CD95/metabolism
Liu HF, Liu WW, Fang DC, Men RP. Relationship between Fas antigen expression and apoptosis in human gastric carcinoma and adjacent noncancerous tissues. Huaren Xiaohua Zazhi,1998;6(4):321-322
摘要
目的 研究胃癌及癌旁组织中Fas抗原表达与细胞凋亡的关系，探讨Fas抗原及细胞凋亡在胃癌发病中的作用.
, http://www.100md.com
方法 采用免疫组织化学及脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术对胃癌组织50例及癌旁组织33例中Fas抗原表达状态及凋亡细胞进行原位观察和比较.
结果 胃癌组织Fas抗原表达率为46.0%，显著低于癌旁组织的75.8%(χ2=7.22，P<0.01). 胃癌组织凋亡细胞指数为5.8%，显著低于癌旁组织的16.8%(t=8.63，P<0.01)；Fas抗原表达阳性的胃癌和癌旁组织凋亡细胞指数显著高于Fas抗原阴性组(t=5.16和t=3.71，P<0.01).
结论 Fas抗原对胃癌及癌旁组织中的细胞凋亡具有促进性调控作用，细胞凋亡调控异常在胃癌发病中可能起重要作用.
主题词 胃肿瘤/免疫学；胃肿瘤/病理学；脱噬作用；抗原，CD95/代谢
, 百拇医药
刘海峰, 刘为纹, 房殿春, 门荣甫.胃癌和癌旁组织中Fas抗原表达与细胞凋亡的关系.华人消化杂志,1998;6(4):321-322
0 引言
细胞凋亡是机体发育和组织更新过程中清除细胞的主要途径，细胞凋亡过程的紊乱将导致发育异常和肿瘤形成[1]. Fas抗原是细胞凋亡的启动分子，可介导细胞发生凋亡[2]. 为了解Fas抗原在胃癌发病中的作用，我们采用免疫组织化学染色及脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术对胃癌及其相应的癌旁组织中Fas抗原表达状态及凋亡细胞进行观察和比较.
1 对象和方法
, 百拇医药
1.1 对象 胃癌组织50例及相应的癌旁组织33例均为我院1995/1997外科手术切除标本. 胃癌患者在接受手术前均未接受化疗、放疗或免疫治疗. 所有标本均经100ml/L福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，并经HE染色病理诊断证实.
1.2 方法
1.2.1 Fas抗原免疫组化染色 兔抗人Fas多克隆抗体(SC-715)及免疫组化试剂盒(Immunostain SP Kit)均为美国Santa Cruz公司产品. 石蜡切片常规脱蜡、水化，继以免疫组化试剂盒检测，步骤按说明书进行. Fas多克隆抗体1∶100稀释. 最后常规DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，封片. 以PBS替代第一抗体作阴性对照.
, 百拇医药
1.2.2 TUNEL染色 细胞凋亡原位检测试剂盒(In situ cell death detection Kit, POD)购自德国Boehringer Mannheim公司. 染色步骤： ①切片二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化；②3ml/L H2O2封闭30min；③20mg/L蛋白酶K消化液作用20min～25min; ④滴加TUNEL反应液，37℃孵育60min；⑤滴加过氧化物酶连接的抗荧光素抗体，37℃孵育30min；⑥DAB显色，苏木素复染，脱水透明，封片. 以PBS替代TUNEL反应液作阴性对照.
1.2.3 观察指标 光镜下观察Fas抗原免疫组化染色及TUNEL染色切片的显色反应，数5个以上高倍视野，不少于1000个细胞，计数阳性细胞数并以百分数表示，分别作为Fas抗原阳性细胞密度值及细胞凋亡指数. Fas抗原表达阳性细胞数≥10%为阳性，<10%判为阴性. 所得数据按不同分组用χ2检验或t检验进行统计处理.
, http://www.100md.com
2 结果
Fas抗原阳性信号呈棕黄色，主要位于细胞浆内和(或)细胞膜上，未见核内表达(图1). 胃癌组织50例中，Fas抗原表达阳性23例，阳性率为46.0%；癌旁组织33例中，Fas抗原表达阳性25例，阳性率为75.8%，两组之间存在显著性差异(P<0.01，表1).
表1 Fas抗原在胃癌及癌旁组织中的表达率
| 组织 | n | Fas表达 | 表达率(%) | |
| - | + | |||
| 胃癌 | 50 | 27 | 23 | 46.0 |
| 癌旁 | 33 | 8 | 25 | 75.8b |
, http://www.100md.com
bP<0.01 vs 胃癌组织.
TUNEL阳性反应物质呈棕黄色，主要位于细胞核内，浓缩的核质紧贴于核膜，或核质呈现均匀的染色，少数细胞胞浆亦呈淡着色. 多数癌旁组织中的凋亡细胞在胃粘膜全层均有分布，少数癌旁组织中的凋亡细胞仅分布于粘膜表面上皮内，胃癌组织中的凋亡细胞呈单个散在分布和(或)呈簇状分布倾向(图2). 癌旁组织细胞凋亡指数显著高于胃癌组织(P<0.01). Fas抗原表达阳性的胃癌及癌旁组织细胞凋亡指数显著高于Fas抗原阴性组(P<0.01，表2). 经连续切片观察，胃癌及癌旁组织中Fas抗原表达与凋亡细胞在大多数病例具有同域性.
表2 胃癌及癌旁组织中Fas抗原表达与细胞凋亡的关系
| n | 细胞凋亡指数(%) | |
| 胃癌组织 | 50 | 5.76±3.96 |
| Fas + | 23 | 8.71±4.69d |
| Fas - | 27 | 3.25±2.11 |
| 癌旁组织 | 33 | 16.83±6.63b |
| Fas + | 25 | 18.51±6.06d |
| Fas - | 8 | 11.70±5.15 |
, 百拇医药
bP<0.01 vs 胃癌组织；dP<0.01 vs Fas -组.
图1 胃癌组织，Fas抗原阳性反应物质位于胃癌细胞胞浆内，Fas阳性细胞呈弥漫性分布 SP法×200
图2 胃癌组织中的凋亡细胞，呈簇状分布倾向TUNEL染色×200
3 讨论
Fas抗原是一跨膜表面蛋白，属于TNFR/NGFR超家族的成员[3]. 晚近研究发现，Fas抗原在肝脏、心脏、肺、肾、卵巢组织中有表达[4，5]，而Fas抗原在胃癌及其相应的癌旁组织中的表达状态及其与细胞凋亡的关系，尚未见文献报道. 本研究发现，胃癌及癌旁组织中均有不同程度的Fas抗原表达，Fas抗原在癌旁组织中的表达率显著高于胃癌组织，Fas抗原表达阳性的胃癌及癌旁组织中的凋亡细胞指数均显著高于Fas抗原阴性组，表明Fas抗原对胃癌及癌旁组织中的细胞凋亡具有促进性调控作用，Fas抗原可能参与了对胃粘膜细胞恶性转化过程中的细胞凋亡的调控，Fas抗原异常表达在胃癌发生中可能具有重要意义.
, 百拇医药
细胞凋亡是由基因调控的细胞主动死亡过程，是程序性细胞死亡的主要形式，此过程的异常与肿瘤的发生有密切关系[6]. 本结果显示，胃癌组织凋亡细胞指数显著低于癌旁组织，提示在胃粘膜细胞恶性转化过程中可能存在细胞凋亡的抑制，而Fas抗原表达减产可能是细胞凋亡被抑制的重要机制之一. Fas抗原在胃癌发病中的生物学意义及其对细胞凋亡的调控机制有待深入研究.
4 参考文献
1 Thompson CB. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease. Science,1995;267(5203):1456-1462
2 Itoh N, Yonehara S, Ishii A, Yonehara M, Mizushima SI, Sameshima M et al. The polypeptide encoded by the cDNA for human
, 百拇医药
cell surface antigen Fas can mediate apoptosis. Cell, 1991;66(2):233-243
3 Martin SJ, Green DR. Protease activation during apoptosis death by a thousand cuts.Cell, 1995;82(2):345-351
4 Ryo K, Kamogawa Y, Ikeda I, Kimura T, Miyazono Y, Shimizu T et al. Fas and Fas ligand strongly expressed in liver of fulminant
hepatitis patients. Hepatology, 1995;22(4):230A
, 百拇医药 5 Leithauser F, Dhein J, Mechtersheimer G, Koretz K, Bruderlein S, Henne C et al. Constitutive and induced expression of APO1,A new member of the nerve growth factor/?tumor necrosis factor receptor superfamily, in normal and neoplastic cells.
Lab Invest, 1993;69(4):415-429
6 刘海峰，刘为纹. 细胞凋亡与肿瘤. 科学，1997;221(1):85-86, http://www.100md.com(刘海峰 刘为纹 房殿春 门荣甫)