幽门螺杆菌几种培养方法比较
南方医院全军消化病研究所 广州同和南方医院消化病研究所广东省广州市 510515
项目负责人 施理南方医院全军消化病研究所 广州同和南方医院消化病研究所广东省广州市 510515
收稿日期 1998-01-20 接收日期 1998-03-01
Subject headings gastric mucosa/microbiology; helicobacter infection/diagnosis; helicobacter py lori/isolation & purification
主题词 胃粘膜/微生物；螺杆菌感染/诊断；螺杆菌，幽门/分离和提纯
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 称取空肠弯曲菌选择性培养基(购自上海卫生防疫站)4.2g，溶于100ml蒸馏水中，121℃，15磅高压灭菌20min，待冷却至60℃时，加入冻融绵羊血8ml，浇培养皿. 厌氧培养箱(浙江义乌冷冻机厂)，烛缸(在干燥缸螺口处涂上凡士林).
1.2 方法 选择近期未服用过De-Nol,H2受体拮抗剂、质子泵抑制剂、抗生素等药物，接受内镜检查的患者，内镜下距幽门3cm～5cm沿胃大小弯各钳取3块粘膜；1块用于Hp尿素酶快速诊断；若为阳性，另1块送病理检查；若病理证实为Hp，则诊断为Hp感染；大、小弯各1块接种于上述培养基上，置厌氧培养箱内用抽气-换气方法使内含8% H2，5% O2，7% CO2，80% N2；另二块胃粘膜接种于上述培养基，放入烛缸内，点上蜡烛，密封. 培养4d后观察Hp生长情况，Hp菌落不明显者，再延长培养3d. 培养出来的菌落，经肉眼观察、涂片Grame染色、鞭毛染色、生化鉴定，鉴定是否是Hp.
, 百拇医药
2 结果
2.1 46例Hp阳性胃粘膜活检标本，用厌氧箱抽气-换气及烛缸方法，培养4d，Hp检出情况：用厌氧箱抽气-换气方法培养4d，Hp检出率为80.55%(37/46)，高于烛缸法的58.70%(27/46)，但没有统计学差异(χ2=0.844 4，P>0.05).
2.2 46例Hp阳性胃粘膜活检标本，用厌氧箱抽气-换气及烛缸法，培养7d，Hp检出情况：用厌氧箱抽气-换气方法培养7d，Hp检出率为91.35%(42/46)，高于烛缸法的78.30%(36/46)，但没有统计学差异(χ2=0.219 80，P>0.05).
3 讨论
, 百拇医药
我们的研究证实，不论是培养4d，还是培养7d，用厌氧箱抽气-换气方法培养Hp，Hp阳性率均高于用烛缸法培养Hp的阳性率. 表明厌氧箱抽气-换气方法优于烛缸法，与国外研究相符[1]. 厌氧箱抽气-换气方法是用人工的方法，使培养箱内的气体成分达到：O2 5%，CO2 7%，H2 8%，N2 80%，表明这种气体成分是Hp的最适生长条件，这种方法是国内外公认的Hp培养方法，但需要一定的设备不易在广大医院推广普及. 烛缸法是一种古老的制备厌氧或微需氧的方法；通过蜡烛燃烧，消耗氧气，产生二氧化碳来达到厌氧或微需氧的气体环境，产生的气体成分不如厌氧箱抽气-换气方法那么准确，Hp培养阳性率低于用厌氧箱抽气-换气方法Hp培养阳性率. 但烛缸法设备要求低，易于普及推广；而且培养4d，7d，Hp检出率仍可达到58.70%，78.30%；在缺乏厌氧箱抽气-换气装置的单位，有一定的使用价值. 同时也表明Hp是一种兼性微需氧菌，我们其他的实验也证实，在有氧环境下Hp生长不良，但完全厌氧也并不适合Hp生长. 即使在条件较好的单位，在将临床接种的平皿从病房送到实验室过程中，也使用烛缸法. 我们的研究还发现，不论是厌氧箱抽气-换气方法，还是烛缸法，Hp培养7d的检出率均高于培养4d的检出率；表明适当延长培养时间，可以提高Hp检出率. 我们认为从胃粘膜原代分离培养Hp，至少需3d～4d，若为阴性，延长培养3d；国外研究也显示，Hp一个重要的生物学特性，是其生长很缓慢[3]，临床分离培养Hp，一般需要3d～4d；只有在培养7d阴性，才能判定Hp培养阴性[4]. 总之，有条件的单位或用于研究目的，最好使用厌氧箱抽气-换气方法培养Hp；而条件较差的单位，采取一些诸如延长培养时间的改进措施，使用烛缸法，也不失为一个好方法.
, 百拇医药
4 参考文献
1 Quciroz DMM, Tich M, Humir R, Jait L, Sleit H, Deni G et al. Indicator medium for isolation of Campylobacter pylori.
J Clin Microbiol,1987;25(8):2378-2380
2 Buck GE, Shirota J, Koudo L, Nsem B, Hopd I et al. Medium supplementation for grow of Campylobacter pylori.
J Clin Microbiol, 1987;25(3):597-599
, 百拇医药
3 Cover TL, Vcofe L, Lekce K, Hcod K, Msak F, Fets G et al. The pathobiology of campylobacter infections.
Annu Rev Med, 1989;40(4):269-285
4 Goodwin CS, Jibas G, Cergi F, Jesna U, Yiet E, Swen F et al. Evaluation of culture techniques for isolation Campylobacter pylori
from endoscopic biopsies of gastric mucosa.J Clin Pathol, 1985;38(6):1127-1131, 百拇医药(施 理 徐智民 王立生 孙 勇 张亚历 张万岱 周殿元)
项目负责人 施理南方医院全军消化病研究所 广州同和南方医院消化病研究所广东省广州市 510515
收稿日期 1998-01-20 接收日期 1998-03-01
Subject headings gastric mucosa/microbiology; helicobacter infection/diagnosis; helicobacter py lori/isolation & purification
主题词 胃粘膜/微生物；螺杆菌感染/诊断；螺杆菌，幽门/分离和提纯
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1 材料和方法
1.1 材料 称取空肠弯曲菌选择性培养基(购自上海卫生防疫站)4.2g，溶于100ml蒸馏水中，121℃，15磅高压灭菌20min，待冷却至60℃时，加入冻融绵羊血8ml，浇培养皿. 厌氧培养箱(浙江义乌冷冻机厂)，烛缸(在干燥缸螺口处涂上凡士林).
1.2 方法 选择近期未服用过De-Nol,H2受体拮抗剂、质子泵抑制剂、抗生素等药物，接受内镜检查的患者，内镜下距幽门3cm～5cm沿胃大小弯各钳取3块粘膜；1块用于Hp尿素酶快速诊断；若为阳性，另1块送病理检查；若病理证实为Hp，则诊断为Hp感染；大、小弯各1块接种于上述培养基上，置厌氧培养箱内用抽气-换气方法使内含8% H2，5% O2，7% CO2，80% N2；另二块胃粘膜接种于上述培养基，放入烛缸内，点上蜡烛，密封. 培养4d后观察Hp生长情况，Hp菌落不明显者，再延长培养3d. 培养出来的菌落，经肉眼观察、涂片Grame染色、鞭毛染色、生化鉴定，鉴定是否是Hp.
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2 结果
2.1 46例Hp阳性胃粘膜活检标本，用厌氧箱抽气-换气及烛缸方法，培养4d，Hp检出情况：用厌氧箱抽气-换气方法培养4d，Hp检出率为80.55%(37/46)，高于烛缸法的58.70%(27/46)，但没有统计学差异(χ2=0.844 4，P>0.05).
2.2 46例Hp阳性胃粘膜活检标本，用厌氧箱抽气-换气及烛缸法，培养7d，Hp检出情况：用厌氧箱抽气-换气方法培养7d，Hp检出率为91.35%(42/46)，高于烛缸法的78.30%(36/46)，但没有统计学差异(χ2=0.219 80，P>0.05).
3 讨论
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我们的研究证实，不论是培养4d，还是培养7d，用厌氧箱抽气-换气方法培养Hp，Hp阳性率均高于用烛缸法培养Hp的阳性率. 表明厌氧箱抽气-换气方法优于烛缸法，与国外研究相符[1]. 厌氧箱抽气-换气方法是用人工的方法，使培养箱内的气体成分达到：O2 5%，CO2 7%，H2 8%，N2 80%，表明这种气体成分是Hp的最适生长条件，这种方法是国内外公认的Hp培养方法，但需要一定的设备不易在广大医院推广普及. 烛缸法是一种古老的制备厌氧或微需氧的方法；通过蜡烛燃烧，消耗氧气，产生二氧化碳来达到厌氧或微需氧的气体环境，产生的气体成分不如厌氧箱抽气-换气方法那么准确，Hp培养阳性率低于用厌氧箱抽气-换气方法Hp培养阳性率. 但烛缸法设备要求低，易于普及推广；而且培养4d，7d，Hp检出率仍可达到58.70%，78.30%；在缺乏厌氧箱抽气-换气装置的单位，有一定的使用价值. 同时也表明Hp是一种兼性微需氧菌，我们其他的实验也证实，在有氧环境下Hp生长不良，但完全厌氧也并不适合Hp生长. 即使在条件较好的单位，在将临床接种的平皿从病房送到实验室过程中，也使用烛缸法. 我们的研究还发现，不论是厌氧箱抽气-换气方法，还是烛缸法，Hp培养7d的检出率均高于培养4d的检出率；表明适当延长培养时间，可以提高Hp检出率. 我们认为从胃粘膜原代分离培养Hp，至少需3d～4d，若为阴性，延长培养3d；国外研究也显示，Hp一个重要的生物学特性，是其生长很缓慢[3]，临床分离培养Hp，一般需要3d～4d；只有在培养7d阴性，才能判定Hp培养阴性[4]. 总之，有条件的单位或用于研究目的，最好使用厌氧箱抽气-换气方法培养Hp；而条件较差的单位，采取一些诸如延长培养时间的改进措施，使用烛缸法，也不失为一个好方法.
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4 参考文献
1 Quciroz DMM, Tich M, Humir R, Jait L, Sleit H, Deni G et al. Indicator medium for isolation of Campylobacter pylori.
J Clin Microbiol,1987;25(8):2378-2380
2 Buck GE, Shirota J, Koudo L, Nsem B, Hopd I et al. Medium supplementation for grow of Campylobacter pylori.
J Clin Microbiol, 1987;25(3):597-599
, 百拇医药
3 Cover TL, Vcofe L, Lekce K, Hcod K, Msak F, Fets G et al. The pathobiology of campylobacter infections.
Annu Rev Med, 1989;40(4):269-285
4 Goodwin CS, Jibas G, Cergi F, Jesna U, Yiet E, Swen F et al. Evaluation of culture techniques for isolation Campylobacter pylori
from endoscopic biopsies of gastric mucosa.J Clin Pathol, 1985;38(6):1127-1131, 百拇医药(施 理 徐智民 王立生 孙 勇 张亚历 张万岱 周殿元)