乳糖化清蛋白单磷酸阿糖腺苷的抗鸭乙型肝炎病毒作用
上海第二医科大学附属瑞金医院传染科 上海市 200025
谢青，女，1964-01-20生，上海市人，汉族. 1985年上海第二医科大学医学系毕业，1988年上海第二医科大学传染病学医学硕士，传染病科副主任医师，主要从事病毒性肝炎的基础和临床研究，发表论文10篇.
项目负责人 谢青，200025，上海第二医科大学附属瑞金医院传染科，上海市瑞金二路197号.
Correspondence to Qing Xie, Department of Infectious Diseases, Ruijin Hospital of Shanghai Second Medical University,197 Ruijin Erlu, Shanghai 200025, ChinaTel. +86·21·64311242
, 百拇医药
收稿日期 1998-07-26 接收日期 1998-11-16
Effect of adenine arabinosidemonophosphate coupled tolactosaminated human
serumalbumin on duck hepatitis B virus
Qing Xie, Qing Guo, Xia-Qiuand Zhou Rui-Ying Gu
Department of Infectious Diseases, Ruijin Hospital of Shanghai Second Medical University, Shanghai 200025, China
, 百拇医药
Abstract
AIM To study the effect of adenine arabinoside monophosphate coupled to lactosaminated human serum albumin (L-HSA-Ara-AMP) on duck hepatitis B virus (DHBV) in duck and to provide an experimental basis for clinical treatment of patients with hepatitis B.
METHODS The duck hepatitis B model was treated with L-HSA-Ara-AMP 25mg/(kg·d) once a day for 10 days. DHBV DNA and DHBsAg in serum were detected four times from the begining to the end (on day 0，5，10 and 13) of the treatment. The pathology of liver and the toxicity of this drug were examined simultaneously.
, http://www.100md.com
RESULTS L-HSA-Ara-AMP could significantly lower the serum DHBV DNA level. The effect on DHBsAg happened later than on DHBV DNA. No adverse effects of L-HSA-Ara-AMP were observed.
CONCLUSION The dosages of adenine arabinoside monophosphate required to inhibit DHBV replication can be sharply reduced by coupling the drug to lactosaminated human serum albumin and the conjugates have a more efficient anti-DHBV effect in duck accompanied by lower toxicity for other tissues.
, 百拇医药
Subject headings hepatitis B virus; albumin; adnine arabinoside monophosphate/therapeutic use; hepatitis B/therapy
Xie Q, Guo Q, Zhou XQ, Gu RY. Effect of adenine arabinoside monophosphate coupled to lactosaminated human serum albumin on duck hepatitis B virus. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi, 1999;7(2):125-126
摘要
目的 了解乳糖化清蛋白单磷酸阿糖腺苷(L-HAS-Ara-AMP)体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用,为临床治疗乙肝患者提供实验基础.
, 百拇医药
方法 采用麻鸭乙型肝炎动物模型,用L-HAS-Ara-AMP25mg/(kg·d),1次/d,治疗10d,观察用药前后(0,5,10及13d)血清中DHBVDNA,DHBsAg,肝脏组织病理学变化以及药物的毒副反应.
结果 L-HAS-Ara-AMP用药后能使血清DHBVDNA水平显著降低,对血清DHBsAg作用相对较缓,治疗过程中未见L-HAS-Ara-AMP的毒副反应.
结论 该药既降低了单磷酸阿糖腺苷(Ara-AMP)的使用剂量,避免了Ara-AMP的副反应,又能抑制DHBV的复制,在体内达到抗DHBV的作用.
主题词 乙型肝炎病毒;白蛋白;腺苷阿检伯糖-磷酸/治疗应用;肝炎,乙型/治疗
, http://www.100md.com
谢青, 郭清, 周霞秋, 谷瑞瑛.乳糖化清蛋白单磷酸阿糖腺苷的抗鸭乙型肝炎病毒作用.世界华人消化杂志,1999;7(2):125-126
0 引言
已经证明阿糖腺苷和单磷酸阿糖腺苷能抑制乙肝病毒(HBV)复制，但剂量相关的神经肌肉疼痛综合征阻碍了该药的临床应用[1]. 空军广州医院肝病研究所[2]将单磷酸阿糖腺苷与含末端半乳糖残基的乳糖化血清清蛋白形成偶联物乳糖化清蛋白单磷酸阿糖腺苷(L-HSA-Ara-AMP),L-HSA是半乳糖末端糖蛋白，通过受体介导可选择性进入肝脏，提高了肝脏中单磷酸阿糖腺苷(Ara-AMP)的浓度，而且还因良好的靶向性而降低了药物的使用剂量[3]. 临床初步研究证明，慢性乙肝患者连续给予L-HSA-Ara-AMP，能抑制病毒复制. 我们对L-HSA-Ara-AMP在鸭HBV感染鸭内进行研究，旨在了解该药对抗病毒作用的影响.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 采用健康成年麻鸭蛋孵化一日龄雏鸭，经足静脉内接种0.5mL鸭HBV脱氧核糖核酸(DHBV DNA)阳性病毒血清，接种2wk后，分别颈外静脉抽血，用地高辛标记的DHBV DNA探针经斑点杂交检测筛选出感染阳性鸭作为试验动物，饲养至3周龄. Ara-AMP购于广东省药物研究所，L-HSA-Ara-AMP由广州空军医院研制生产，50mg/瓶，含Ara-AMP 4mg. DHBsAg酶联免疫试剂盒由上海医科大学提供，DHBV DNA由上海医科大学分子生物病毒实验室赠送的菌株提取. DHBV DNA采用德国Boehringer公司的Dig标记药盒.
1.2 方法 DHBV DNA阳性的3周龄鸭55只，随机分为3组：分别为生理盐水对照组(n=20)，Ara-AMP组(n=15)，L-HSA-Ara AMP组(n=20)，分别用生理盐水2mL，Ara-AMP 20mg/kg，L-HSA-Ara-AMP 25mg/kg(含Ara-AMP 20mg/kg), iv，1次/d×10d. 观察指标：用药0，5，10d及停药后3d颈外静脉抽血，分离血清于-20℃保存待检DHBV DNA. 采用斑点杂交法，用地高辛标记探针将用药前后的血清统一对比检测，以与探针同源的质粒DNA倍比稀释后点样于硝酸纤维薄膜上杂交显示的斑点颜色深浅为标准，与待检血清斑点杂交的斑点颜色深浅比较来半定量；用DHBsAg酶联免疫试剂盒检测DHBsAg，采用Dot EIA方法统一对比检测，并与标准DHBsAg作对照. 用药10d，停药后3d将实验动物分别剖杀，各取小块肝组织，作常规HE染色病理检查.
, http://www.100md.com
2 结果
2.1 血清DHBV DNA 生理盐水组、Ara-AMP组血清DHBV DNA无明显下降(P>0.05)，而L-HSA-Ara-AMP组用药5d血清DHBV DNA开始有明显降低(P<0.01)，停药后3d未见有血清DHBV DNA回升现象(表1).
表1 血清DHBV DNA动态变化 (x±s,μg/L)
, 百拇医药
bP<0.01，vs 用药前.
2.2 血清DHBsAg 各组用药前、用药5d,10d，停药3d无明显差异(表2).
表2 血清DHBsAg动态变化 (n)
, http://www.100md.com
2.3 肝组织病理检查 各组均有不同程度的肝细胞肿胀，空泡变性，小叶间隔及汇管区炎性细胞浸润. 用药组和对照组的肝脏病理改变无明显差异. 用药组未见药物对肝组织的毒性损害.
2.4 毒性反应观察 在Ara-AMP组，部分鸭子用药后3d～4d出现二下肢无力，站立不稳，而生理盐水组及L-HSA-Ara-AMP组未见此现象.
3 讨论
雏鸭感染DHBV DNA可维持长期病毒血症而无明显的自然转阴现象，该模型建立方便稳定，是目前抗病毒药物筛选最好的动物模型. 我们采用iv接种DHBV DNA阳性血清0.5mL感染鸭后2wk血清中即可检测出DHBV DNA，病毒的感染率可达70%～85%，病毒血症最长可维持2mo之久，且病毒血症水平较稳定. L-HSA-Ara-AMP以25mg/(kg·d)的剂量连续治疗10d，治疗5d，50%的鸭子血清DHBV DNA含量下降，并维持于停药后3d，而L-HSA-Ara-AMP对血清DHBsAg作用较迟缓，这与临床上慢性病毒性肝炎应用干扰素治疗后，首先出现血清HBeAg和血清HBV DNA含量下降，以后随着随访时间的延长，逐渐出现HBsAg的含量降低的现象保持一致. 因此可适当延长该药的治疗疗程以及停药后观察时间. 肝脏病理检查发现，L-HSA-Ara-AMP对肝脏组织无明显影响.
, 百拇医药
L-HSA-Ara-AMP的治疗剂量为25mg/(kg·d)，仅含Ara-AMP 2mg/(kg·d)，而在Ara-AMP单独应用时，往往需要20mg/(kg·d)～30mg/(kg·d)的剂量，才能达到抗病毒作用，但以此剂量治疗时，会出现严重的毒副作用. 用Ara-AMP与L-HSA偶联后形成L-HSA-Ara-AMP，由于受体导向作用，实际所采用的Ara-AMP剂量明显减少，但仍能达到抗病毒治疗效果又避免了毒副作用[4]. L-HSA-Ara-AMP在鸭肝炎病毒感染鸭的整个治疗过程中未出现任何毒副反应，使用安全，国外已经用于临床，并取得初步疗效. 因此在我国可作为慢性乙肝抗病毒药物，并作进一步探讨.
4 参考文献
1 Chien RN, Liaw YF. Drug therapy in patients with chronic type B hepatitis. J Formos Med Assoc, 1995;94(Suppl 1):S1-9
, 百拇医药
2 粟宽源，张宜俊，陈文吟，孔祥平，刘建中，周志发. 全国第四届促肝细胞生长素学术会议论文汇编. 1995：184-186
3 Fiume L, Busi C, Di SG, Mattioli A, Torrani CM, Bonino F et al. Liver targeting of adenine arabinoside monophosphate (ara-AMP)
by coupling to lactosaminated human serum albumin. Ital J Gastroenterol, 1995;27:189-192
4 Torrani CM, Fiume L, Bernardi DVM, Lavezzo B, Brunetto MR, Ponzetto A. Adenine arabinoside monophosphate coupled
to lactosaminated human albumin administered for 4 weeks in patients with chronic type B hepatitis decreased viremia
without producing significant side effects. Hepatology, 1996;23:657-661, http://www.100md.com(谢青 郭清 周霞秋 谷瑞瑛)
谢青，女，1964-01-20生，上海市人，汉族. 1985年上海第二医科大学医学系毕业，1988年上海第二医科大学传染病学医学硕士，传染病科副主任医师，主要从事病毒性肝炎的基础和临床研究，发表论文10篇.
项目负责人 谢青，200025，上海第二医科大学附属瑞金医院传染科，上海市瑞金二路197号.
Correspondence to Qing Xie, Department of Infectious Diseases, Ruijin Hospital of Shanghai Second Medical University,197 Ruijin Erlu, Shanghai 200025, ChinaTel. +86·21·64311242
, 百拇医药
收稿日期 1998-07-26 接收日期 1998-11-16
Effect of adenine arabinosidemonophosphate coupled tolactosaminated human
serumalbumin on duck hepatitis B virus
Qing Xie, Qing Guo, Xia-Qiuand Zhou Rui-Ying Gu
Department of Infectious Diseases, Ruijin Hospital of Shanghai Second Medical University, Shanghai 200025, China
, 百拇医药
Abstract
AIM To study the effect of adenine arabinoside monophosphate coupled to lactosaminated human serum albumin (L-HSA-Ara-AMP) on duck hepatitis B virus (DHBV) in duck and to provide an experimental basis for clinical treatment of patients with hepatitis B.
METHODS The duck hepatitis B model was treated with L-HSA-Ara-AMP 25mg/(kg·d) once a day for 10 days. DHBV DNA and DHBsAg in serum were detected four times from the begining to the end (on day 0，5，10 and 13) of the treatment. The pathology of liver and the toxicity of this drug were examined simultaneously.
, http://www.100md.com
RESULTS L-HSA-Ara-AMP could significantly lower the serum DHBV DNA level. The effect on DHBsAg happened later than on DHBV DNA. No adverse effects of L-HSA-Ara-AMP were observed.
CONCLUSION The dosages of adenine arabinoside monophosphate required to inhibit DHBV replication can be sharply reduced by coupling the drug to lactosaminated human serum albumin and the conjugates have a more efficient anti-DHBV effect in duck accompanied by lower toxicity for other tissues.
, 百拇医药
Subject headings hepatitis B virus; albumin; adnine arabinoside monophosphate/therapeutic use; hepatitis B/therapy
Xie Q, Guo Q, Zhou XQ, Gu RY. Effect of adenine arabinoside monophosphate coupled to lactosaminated human serum albumin on duck hepatitis B virus. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi, 1999;7(2):125-126
摘要
目的 了解乳糖化清蛋白单磷酸阿糖腺苷(L-HAS-Ara-AMP)体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用,为临床治疗乙肝患者提供实验基础.
, 百拇医药
方法 采用麻鸭乙型肝炎动物模型,用L-HAS-Ara-AMP25mg/(kg·d),1次/d,治疗10d,观察用药前后(0,5,10及13d)血清中DHBVDNA,DHBsAg,肝脏组织病理学变化以及药物的毒副反应.
结果 L-HAS-Ara-AMP用药后能使血清DHBVDNA水平显著降低,对血清DHBsAg作用相对较缓,治疗过程中未见L-HAS-Ara-AMP的毒副反应.
结论 该药既降低了单磷酸阿糖腺苷(Ara-AMP)的使用剂量,避免了Ara-AMP的副反应,又能抑制DHBV的复制,在体内达到抗DHBV的作用.
主题词 乙型肝炎病毒;白蛋白;腺苷阿检伯糖-磷酸/治疗应用;肝炎,乙型/治疗
, http://www.100md.com
谢青, 郭清, 周霞秋, 谷瑞瑛.乳糖化清蛋白单磷酸阿糖腺苷的抗鸭乙型肝炎病毒作用.世界华人消化杂志,1999;7(2):125-126
0 引言
已经证明阿糖腺苷和单磷酸阿糖腺苷能抑制乙肝病毒(HBV)复制，但剂量相关的神经肌肉疼痛综合征阻碍了该药的临床应用[1]. 空军广州医院肝病研究所[2]将单磷酸阿糖腺苷与含末端半乳糖残基的乳糖化血清清蛋白形成偶联物乳糖化清蛋白单磷酸阿糖腺苷(L-HSA-Ara-AMP),L-HSA是半乳糖末端糖蛋白，通过受体介导可选择性进入肝脏，提高了肝脏中单磷酸阿糖腺苷(Ara-AMP)的浓度，而且还因良好的靶向性而降低了药物的使用剂量[3]. 临床初步研究证明，慢性乙肝患者连续给予L-HSA-Ara-AMP，能抑制病毒复制. 我们对L-HSA-Ara-AMP在鸭HBV感染鸭内进行研究，旨在了解该药对抗病毒作用的影响.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 采用健康成年麻鸭蛋孵化一日龄雏鸭，经足静脉内接种0.5mL鸭HBV脱氧核糖核酸(DHBV DNA)阳性病毒血清，接种2wk后，分别颈外静脉抽血，用地高辛标记的DHBV DNA探针经斑点杂交检测筛选出感染阳性鸭作为试验动物，饲养至3周龄. Ara-AMP购于广东省药物研究所，L-HSA-Ara-AMP由广州空军医院研制生产，50mg/瓶，含Ara-AMP 4mg. DHBsAg酶联免疫试剂盒由上海医科大学提供，DHBV DNA由上海医科大学分子生物病毒实验室赠送的菌株提取. DHBV DNA采用德国Boehringer公司的Dig标记药盒.
1.2 方法 DHBV DNA阳性的3周龄鸭55只，随机分为3组：分别为生理盐水对照组(n=20)，Ara-AMP组(n=15)，L-HSA-Ara AMP组(n=20)，分别用生理盐水2mL，Ara-AMP 20mg/kg，L-HSA-Ara-AMP 25mg/kg(含Ara-AMP 20mg/kg), iv，1次/d×10d. 观察指标：用药0，5，10d及停药后3d颈外静脉抽血，分离血清于-20℃保存待检DHBV DNA. 采用斑点杂交法，用地高辛标记探针将用药前后的血清统一对比检测，以与探针同源的质粒DNA倍比稀释后点样于硝酸纤维薄膜上杂交显示的斑点颜色深浅为标准，与待检血清斑点杂交的斑点颜色深浅比较来半定量；用DHBsAg酶联免疫试剂盒检测DHBsAg，采用Dot EIA方法统一对比检测，并与标准DHBsAg作对照. 用药10d，停药后3d将实验动物分别剖杀，各取小块肝组织，作常规HE染色病理检查.
, http://www.100md.com
2 结果
2.1 血清DHBV DNA 生理盐水组、Ara-AMP组血清DHBV DNA无明显下降(P>0.05)，而L-HSA-Ara-AMP组用药5d血清DHBV DNA开始有明显降低(P<0.01)，停药后3d未见有血清DHBV DNA回升现象(表1).
表1 血清DHBV DNA动态变化 (x±s,μg/L)
| 组别 | n | Log DHBV DNA | |||
| 0d | 5d | 10d | 13d | ||
| L-HSA-Ara-AMP | 20 | 3.25±0.67 | 2.55±0.67b | 2.30±0.50b | 2.1±0.61b |
| NS | 20 | 2.9±0.64 | 2.7±0.61 | 2.6±0.80 | 2.4±0.76 |
| Ara-AMP | 15 | 2.75±0.41 | 2.63±0.45 | 2.57±0.48 | 2.77±0.35 |
, 百拇医药
bP<0.01，vs 用药前.
2.2 血清DHBsAg 各组用药前、用药5d,10d，停药3d无明显差异(表2).
表2 血清DHBsAg动态变化 (n)
| 分组 | n | 治疗时间(t/d) | |||||||||||
| 0 | 5 | 10 | 13 | ||||||||||
| - | + | ++ | - | + | ++ | - | + | ++ | - | + | ++ | ||
| NS | 20 | 0 | 2 | 18 | 0 | 2 | 18 | 0 | 4 | 16 | 0 | 2 | 18 |
| Ara-AMP | 15 | 0 | 4 | 11 | 0 | 1 | 14 | 0 | 2 | 13 | 0 | 0 | 15 |
| L-HSA-Ara-AMP | 20 | 0 | 7 | 13 | 2 | 3 | 15 | 0 | 4 | 16 | 0 | 2 | 18 |
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2.3 肝组织病理检查 各组均有不同程度的肝细胞肿胀，空泡变性，小叶间隔及汇管区炎性细胞浸润. 用药组和对照组的肝脏病理改变无明显差异. 用药组未见药物对肝组织的毒性损害.
2.4 毒性反应观察 在Ara-AMP组，部分鸭子用药后3d～4d出现二下肢无力，站立不稳，而生理盐水组及L-HSA-Ara-AMP组未见此现象.
3 讨论
雏鸭感染DHBV DNA可维持长期病毒血症而无明显的自然转阴现象，该模型建立方便稳定，是目前抗病毒药物筛选最好的动物模型. 我们采用iv接种DHBV DNA阳性血清0.5mL感染鸭后2wk血清中即可检测出DHBV DNA，病毒的感染率可达70%～85%，病毒血症最长可维持2mo之久，且病毒血症水平较稳定. L-HSA-Ara-AMP以25mg/(kg·d)的剂量连续治疗10d，治疗5d，50%的鸭子血清DHBV DNA含量下降，并维持于停药后3d，而L-HSA-Ara-AMP对血清DHBsAg作用较迟缓，这与临床上慢性病毒性肝炎应用干扰素治疗后，首先出现血清HBeAg和血清HBV DNA含量下降，以后随着随访时间的延长，逐渐出现HBsAg的含量降低的现象保持一致. 因此可适当延长该药的治疗疗程以及停药后观察时间. 肝脏病理检查发现，L-HSA-Ara-AMP对肝脏组织无明显影响.
, 百拇医药
L-HSA-Ara-AMP的治疗剂量为25mg/(kg·d)，仅含Ara-AMP 2mg/(kg·d)，而在Ara-AMP单独应用时，往往需要20mg/(kg·d)～30mg/(kg·d)的剂量，才能达到抗病毒作用，但以此剂量治疗时，会出现严重的毒副作用. 用Ara-AMP与L-HSA偶联后形成L-HSA-Ara-AMP，由于受体导向作用，实际所采用的Ara-AMP剂量明显减少，但仍能达到抗病毒治疗效果又避免了毒副作用[4]. L-HSA-Ara-AMP在鸭肝炎病毒感染鸭的整个治疗过程中未出现任何毒副反应，使用安全，国外已经用于临床，并取得初步疗效. 因此在我国可作为慢性乙肝抗病毒药物，并作进一步探讨.
4 参考文献
1 Chien RN, Liaw YF. Drug therapy in patients with chronic type B hepatitis. J Formos Med Assoc, 1995;94(Suppl 1):S1-9
, 百拇医药
2 粟宽源，张宜俊，陈文吟，孔祥平，刘建中，周志发. 全国第四届促肝细胞生长素学术会议论文汇编. 1995：184-186
3 Fiume L, Busi C, Di SG, Mattioli A, Torrani CM, Bonino F et al. Liver targeting of adenine arabinoside monophosphate (ara-AMP)
by coupling to lactosaminated human serum albumin. Ital J Gastroenterol, 1995;27:189-192
4 Torrani CM, Fiume L, Bernardi DVM, Lavezzo B, Brunetto MR, Ponzetto A. Adenine arabinoside monophosphate coupled
to lactosaminated human albumin administered for 4 weeks in patients with chronic type B hepatitis decreased viremia
without producing significant side effects. Hepatology, 1996;23:657-661, http://www.100md.com(谢青 郭清 周霞秋 谷瑞瑛)