国产PⅢP试剂盒临床应用
1衡阳医学院第二附属医院消化疾病研究室 湖南省衡阳市 421001
2浙江医科大学传染病研究所肝纤维化实验室 浙江省杭州市 310003
项目负责人 阳学风衡阳医学院第二附属医院消化疾病研究室 湖南省衡阳市 421001
收稿日期 1998-07-06
Subject headings liver cirrhosis/diagnosis; procollagen Ⅲ petide; hyaluronic acid
主题词 肝硬化/诊断；Ⅲ型前胶原肽；透明质酸
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 对象 慢性肝病782例，年龄16岁～84岁，男614例，女168例. 按’95病毒性肝炎防治方案中诊断标准[1]，慢性肝炎442例，其中轻度153例，中度227例，重度62例；肝炎肝硬变300例. 原发性肝癌(诊断按1977年全国肝癌协作会议制订的临床标准)共40例，其中伴有肝硬变32例，不伴有肝硬变8例. 正常对照组67例.
1.2 方法 空腹抽血，分离血清贮存在-20℃冰箱中待测. PCⅢ试剂由重庆肿瘤研究所提供；HA，Ⅳ-C，LN由上海海军医学研究所提供，均为放免法，方法按试剂提供单位规定的操作程序进行，结果用中国科学院上海原子能研究所日环仪器厂生产ISN-682放射免疫γ计数器测定并自动记录. PⅢP试剂由福建京狮医药科技开发研究所提供，操作按其说明，结果用美国S-GMA960型酶标仪2IS-1000及多功能凝胶成像分析仪(进口)测定并自动记录结果. PCⅢ，HA，Ⅳ-C，LN，PⅢP结果以大于正常人x±2s值为上限值，大于上限值者为异常或称阳性，分别为120μg/L，110μg/L，62μg/L，150g/L，0.8kU/L，所获结果均以异常率表示. 54例慢性肝病进行肝活检，按’95方案肝纤维化程度(S)分0～4期，具体标准是：0期，正常；1期，汇管区扩大，纤维化；2期，汇管区周围纤维化，纤维隔离形成，小叶结构保留；3期，纤维隔离伴小叶紊乱，无肝硬变；4期，早期肝硬变或肯定的肝硬变.
, 百拇医药
统计学处理 多组间比较采用方差分析，因素间采用直线相关或Spearmann等级相关分析，χ2检验比较异常率.
2 结果
2.1 肝病血清PⅢP含量及异常率 慢性肝炎、肝硬变、原发性肝癌患者血清PⅢP含量与正常人比较，差异有显著性；与慢性肝炎相比，肝硬变、原发性肝癌PⅢP含量及异常率，差异有显著性；慢性肝炎轻、中、重度比较，PⅢP含量及异常率差异有显著性(P<0.05，表1)，伴有肝硬变的原发性肝癌血清PⅢP含量及异常率高于不伴有肝硬变者，两者差异有显著性(P<0.05，表1). 血清PⅢP含量与清蛋白(Alb)胆红素(TBil)，谷丙转氨酶(ALT)不具相关性(γ分别为-0.1685，0.0000，0.1490，-0.0043,P>0.05).
, 百拇医药
表1 肝病血清PⅢP及肝功能结果 (x±s，%)
, 百拇医药
aP<0.05，vs 正常对照；cP<0.05，vs 慢性肝炎.
2.2 肝纤维化分期与血清PⅢP含量的关系 不同分期血清PⅢP浓度差异有显著性(P<0.05，表2)，血清PⅢP含量与肝纤维化分期正相关(r=0.617，P<0.05).
表2 各期肝纤维化血清PⅢP含量 (x±s)
, 百拇医药
2.3 慢性肝炎中度患者肝纤维化指标 表3.
表3 慢性肝炎中度患者84例肝纤维化指标
3 讨论
, 百拇医药
肝纤维化是一切慢性肝病共同病理学基础，是发展到肝硬变的必经阶段. 现认为肝纤维化尚有逆转至正常肝的可能，而肝硬变则否，认为阻止或延缓肝纤维化的发生和发展就能治愈大部分慢性肝病患者. 因此，人们期望对肝纤维化作出早期诊断. 目前肝纤维化的诊断仍以肝活组织检查而确诊，因其属损伤性检查，患者多不愿接受，作为抗肝纤维化药物疗效考核指标更难，因需多次活检、穿刺部位及样本大小等有其局限性，故肝病工作者迫切需要非损伤性、能反映肝纤维化活动程度又能反映间质沉积程度、不受全身疾病影响的血清学指标. 多数学者认为肝纤维化指标仍以PⅢP为首选，此项检查沿用已多年，现知血清PⅢP是PCⅢ分泌到细胞外并沉积时，被端肽酶切下而进入血液循环中的末端肽，血清PⅢP增高反映肝组织的炎症和肝纤维化形成的活动性[3,4]. 本结果说明，随着肝组织病变的慢性化、胶原纤维不断沉积，血清PⅢP含量呈上升趋势，血清PⅢP含量是与肝纤程度相一致.
本组84例中度慢性肝炎患者，是科研对象，根据既往157例肝活检与临床表现不同病例对比研究资料[2]及’95病毒性肝炎防治方案[1]中规定，再结合PCⅢ，HA，Ⅳ-C和LN的检查结果，这类患者肝纤维化程度多属S3. 1996-11武汉中华医学会第八次全国肝炎学术会议，北京市肝炎协作组报道127例肝活检确诊为慢性肝炎患者，肝纤维化程度为S2-4，用德国进口PⅢP放免试剂盒测定血清PⅢP水平，以>0.8kU/L为异常(阳性)，异常率为61.9%. 本组PⅢP异常率为78.6%，高于前者，其他肝纤维化指标Ⅳ-C，LN，HA本组的异常率亦高于前者，说明本组肝纤维化程度较重，肝纤维化指标的异常率与受检者病情有关，虽然不能认为国产酶标PⅢP试剂盒优于德国进口试剂，但至少说明福建京狮研制的PⅢP试剂盒经过3+a多的努力已达到较好水平，可考虑推广使用.
, 百拇医药
4 参考文献
1 病毒性肝炎防治方案(试行). 中华内科杂志，1995；34：788-791
2 蔡卫民. 肝纤维化血清学指标的检测. 见：叶维法主编. 肝胆病诊断学. 第1版. 天津：天津科学技术出版社，1997：190-202
3 陈峰，蔡卫民. 近3年来肝纤维化血清学诊断与治疗. 新消化病学杂志，1997；5：69-71
4 杨耀娴，康交阳. 肝纤维化的机制与血清学诊断. 新消化病学杂志，1997；5：119-120, 百拇医药(阳学风1 蔡卫民2 翁红雷2 刘荣华2 张明亮1 曾 斌1)
2浙江医科大学传染病研究所肝纤维化实验室 浙江省杭州市 310003
项目负责人 阳学风衡阳医学院第二附属医院消化疾病研究室 湖南省衡阳市 421001
收稿日期 1998-07-06
Subject headings liver cirrhosis/diagnosis; procollagen Ⅲ petide; hyaluronic acid
主题词 肝硬化/诊断；Ⅲ型前胶原肽；透明质酸
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 对象 慢性肝病782例，年龄16岁～84岁，男614例，女168例. 按’95病毒性肝炎防治方案中诊断标准[1]，慢性肝炎442例，其中轻度153例，中度227例，重度62例；肝炎肝硬变300例. 原发性肝癌(诊断按1977年全国肝癌协作会议制订的临床标准)共40例，其中伴有肝硬变32例，不伴有肝硬变8例. 正常对照组67例.
1.2 方法 空腹抽血，分离血清贮存在-20℃冰箱中待测. PCⅢ试剂由重庆肿瘤研究所提供；HA，Ⅳ-C，LN由上海海军医学研究所提供，均为放免法，方法按试剂提供单位规定的操作程序进行，结果用中国科学院上海原子能研究所日环仪器厂生产ISN-682放射免疫γ计数器测定并自动记录. PⅢP试剂由福建京狮医药科技开发研究所提供，操作按其说明，结果用美国S-GMA960型酶标仪2IS-1000及多功能凝胶成像分析仪(进口)测定并自动记录结果. PCⅢ，HA，Ⅳ-C，LN，PⅢP结果以大于正常人x±2s值为上限值，大于上限值者为异常或称阳性，分别为120μg/L，110μg/L，62μg/L，150g/L，0.8kU/L，所获结果均以异常率表示. 54例慢性肝病进行肝活检，按’95方案肝纤维化程度(S)分0～4期，具体标准是：0期，正常；1期，汇管区扩大，纤维化；2期，汇管区周围纤维化，纤维隔离形成，小叶结构保留；3期，纤维隔离伴小叶紊乱，无肝硬变；4期，早期肝硬变或肯定的肝硬变.
, 百拇医药
统计学处理 多组间比较采用方差分析，因素间采用直线相关或Spearmann等级相关分析，χ2检验比较异常率.
2 结果
2.1 肝病血清PⅢP含量及异常率 慢性肝炎、肝硬变、原发性肝癌患者血清PⅢP含量与正常人比较，差异有显著性；与慢性肝炎相比，肝硬变、原发性肝癌PⅢP含量及异常率，差异有显著性；慢性肝炎轻、中、重度比较，PⅢP含量及异常率差异有显著性(P<0.05，表1)，伴有肝硬变的原发性肝癌血清PⅢP含量及异常率高于不伴有肝硬变者，两者差异有显著性(P<0.05，表1). 血清PⅢP含量与清蛋白(Alb)胆红素(TBil)，谷丙转氨酶(ALT)不具相关性(γ分别为-0.1685，0.0000，0.1490，-0.0043,P>0.05).
, 百拇医药
表1 肝病血清PⅢP及肝功能结果 (x±s，%)
| 组别 | n | PⅢP(kU/L) | Alb(g/L) | TBil(μmol/L) | ALT(U/L) | PⅢP异常率(%) |
| 正常对照 | 67 | 0.43±0.16 | 40.5±5.0 | 12.3±4.6 | 10.1±2.8 | |
| 慢性肝炎 | 442 | 1.73±1.54a | 38.5±5.9 | 48.9±35.0a | 92.3±67.2a | 52.5 |
| 轻度 | 153 | 1.20±1.05 | 40.7±4.3 | 22.6±20.5 | 51.8±20.6 | 30.1 |
| 中度 | 227 | 2.03±1.56 | 37.2±2.6 | 45.8±12.4 | 110.9±73.9 | 62.2 |
| 重度 | 62 | 2.41±1.98 | 27.4±3.3 | 107.8±10.4 | 245.0±55.0 | 75.8 |
| 肝硬变 | 300 | 3.75±2.50ac | 31.3±6.8ac | 49.8±35.3a | 37.1±19.3ac | 77.8c |
| 原发性肝癌 | 40 | 2.46±1.39ac | 35.3±4.7ac | 47.6±38.0a | 58.3±56.8ac | 70.0c |
| 伴肝硬变 | 32 | 3.12±2.08 | 34.8±5.5 | 48.2±35.5 | 79.8±69.0 | 78.1 |
| 不伴肝硬变 | 8 | 1.24±1.12 | 36.2±2.6 | 42.7±22.9 | 31.5±2.6 | 37.5 |
, 百拇医药
aP<0.05，vs 正常对照；cP<0.05，vs 慢性肝炎.
2.2 肝纤维化分期与血清PⅢP含量的关系 不同分期血清PⅢP浓度差异有显著性(P<0.05，表2)，血清PⅢP含量与肝纤维化分期正相关(r=0.617，P<0.05).
表2 各期肝纤维化血清PⅢP含量 (x±s)
| 分期 | n | 血清PⅢP(kU/L) |
| 0 | 4 | 0.39±0.16 |
| 1 | 9 | 1.21±1.02 |
| 2 | 12 | 2.15±1.27 |
| 3 | 14 | 2.70±2.05 |
| 4 | 15 | 3.41±2.20 |
, 百拇医药
2.3 慢性肝炎中度患者肝纤维化指标 表3.
表3 慢性肝炎中度患者84例肝纤维化指标
| 指标 | 异常率(%) |
| PⅢP | 78.6(66/84) |
| PCⅢ | 75.0(63/84) |
| Ⅳ-C | 86.4(73/84) |
| LN | 84.5(71/84) |
| HA | 81.0(68/84) |
3 讨论
, 百拇医药
肝纤维化是一切慢性肝病共同病理学基础，是发展到肝硬变的必经阶段. 现认为肝纤维化尚有逆转至正常肝的可能，而肝硬变则否，认为阻止或延缓肝纤维化的发生和发展就能治愈大部分慢性肝病患者. 因此，人们期望对肝纤维化作出早期诊断. 目前肝纤维化的诊断仍以肝活组织检查而确诊，因其属损伤性检查，患者多不愿接受，作为抗肝纤维化药物疗效考核指标更难，因需多次活检、穿刺部位及样本大小等有其局限性，故肝病工作者迫切需要非损伤性、能反映肝纤维化活动程度又能反映间质沉积程度、不受全身疾病影响的血清学指标. 多数学者认为肝纤维化指标仍以PⅢP为首选，此项检查沿用已多年，现知血清PⅢP是PCⅢ分泌到细胞外并沉积时，被端肽酶切下而进入血液循环中的末端肽，血清PⅢP增高反映肝组织的炎症和肝纤维化形成的活动性[3,4]. 本结果说明，随着肝组织病变的慢性化、胶原纤维不断沉积，血清PⅢP含量呈上升趋势，血清PⅢP含量是与肝纤程度相一致.
本组84例中度慢性肝炎患者，是科研对象，根据既往157例肝活检与临床表现不同病例对比研究资料[2]及’95病毒性肝炎防治方案[1]中规定，再结合PCⅢ，HA，Ⅳ-C和LN的检查结果，这类患者肝纤维化程度多属S3. 1996-11武汉中华医学会第八次全国肝炎学术会议，北京市肝炎协作组报道127例肝活检确诊为慢性肝炎患者，肝纤维化程度为S2-4，用德国进口PⅢP放免试剂盒测定血清PⅢP水平，以>0.8kU/L为异常(阳性)，异常率为61.9%. 本组PⅢP异常率为78.6%，高于前者，其他肝纤维化指标Ⅳ-C，LN，HA本组的异常率亦高于前者，说明本组肝纤维化程度较重，肝纤维化指标的异常率与受检者病情有关，虽然不能认为国产酶标PⅢP试剂盒优于德国进口试剂，但至少说明福建京狮研制的PⅢP试剂盒经过3+a多的努力已达到较好水平，可考虑推广使用.
, 百拇医药
4 参考文献
1 病毒性肝炎防治方案(试行). 中华内科杂志，1995；34：788-791
2 蔡卫民. 肝纤维化血清学指标的检测. 见：叶维法主编. 肝胆病诊断学. 第1版. 天津：天津科学技术出版社，1997：190-202
3 陈峰，蔡卫民. 近3年来肝纤维化血清学诊断与治疗. 新消化病学杂志，1997；5：69-71
4 杨耀娴，康交阳. 肝纤维化的机制与血清学诊断. 新消化病学杂志，1997；5：119-120, 百拇医药(阳学风1 蔡卫民2 翁红雷2 刘荣华2 张明亮1 曾 斌1)