TTV研究进展
西安医科大学第一临床医学院肝炎研究室 陕西省西安市 710061
项目负责人 陈天艳西安医科大学第一临床医学院肝炎研究室 陕西省西安市 710061
收稿日期 1999-01-03 接收日期 1999-03-01
Subject headings hepatitis/transmission; hepatitis C; transfusion; gene,viral
主题词 肝炎/传播；肝炎，丙型；输血；基因，病毒
输血传播病毒(transfusion-transmitted virus, TTV)是1997年底日本学者发现的一种被认为可引起人类输血后肝炎的新的DNA病毒. 目前国内外学者对不同地区、人群TTV感染状况及其致病性进行了初步探讨，现将有关情况综述如下.
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1 TTV基本特征
Nishizawa et al [1]利用代表性差异分析对一位输血后非甲一庚型肝炎患者(TT)的双份血清进行分析，一份为ALT高峰时血清，一份为既往ALT正常时血清，得到一条宽但清晰的500bp的电泳带，切下该产物提纯后连接至PT7BLue-T载体，再转化至大肠杆菌，从所得到的36个克隆中获得一DNA序列，根据其核苷酸的同源性分为13组，将每组的代表性克隆与基因库中已有序列进行同源分析后，得出4个克隆，再根据其序列合成特异性引物，通过PCR法，从ALT异常血清中检出一阳性克隆，命名为N22，N22长度为500bp，编码至少166个氨基酸，这是最早发现的TTV. 分子生物学研究表明，TTV为单股DNA病毒，全长3.7kb，无包膜，蔗糖浮力密度为1.26g/cm3，氯化铯浮力密度为1.31g/cm3～1.32g/cm3，有两个开放阅读框架(ORF)，ORF1位于该基因组的589～2898位核苷酸，编码770个氨基酸，ORF2位于107～712位核苷酸，编码202个氨基酸. TTV基因组全长3739个核苷酸，有12个TATA序列，两个以AATAAA为代表的多腺苷酸信号，与微小病毒科的某些特征相似[2].
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2 基因变异及基因分型
在Nishizawa et al所发现的3例TTV DNA阳性病例中，2例的DNA序列只有3个核苷酸的差异，1例则差异较大，约有46～47个核苷酸不同，其变异度较大. 而后进一步根据TTV1902-2257间的序列对日本78个分离株进行分析，76个分为一组(G1)，另2个分为一组(G2)，两组间核苷酸变异大于30%，两组可再分为2个亚型，即G1a,G2a,G1b,G2b[1,2]. Naoumov et al [3]对各型肝病中TTV DNA(+)的病例进行测序分析认为基因型与日本相似，其中G1的变异较小，G2的变异较大为15%～27%. Simmonds et al [4]的研究则认为除存在G1，G2外，还发现一种新的基因型G3. 国内研究与日本株部分基因片段同源性分析在66.2%～98%之间，变异度大于33%. 马为民et al [5]对深圳5例TTV DNA阳性的非甲-庚型肝炎基因分析结果表明以G2型为主，特别是G2b 型，提示我国流行的TTV基因型与日本可能不同. 但上述比较是部分基因片段的比较，如何明确其基因型、亚型、是否存在高变区，还需进行更多全基因序列的比较.
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3 流行病学特征
Okamoto et al [2]研究表明，TTV分布广泛. 在非甲-戊型重症肝炎中占47%，非甲-戊型慢性肝炎中占46%，其中慢性肝炎47%，肝硬变48%，肝癌39%，献血员12%. Simmonds et al [4]研究表明在苏格兰无偿献血员中TTV检出率为1.9%. Naoumov et al[3]的研究结果则显示各型肝炎中TTV DNA(+)占10%～38%，正常健康对照为10%. 国内学者对我国不同地区、人群进行了TTV的检测，TTV感染较广泛. 周育森et al[6]首次用PCR法证实我国人群中存在TTV感染. 马为民et al [5]则报告在一般人群、有偿献血者，静脉毒瘾者，非甲-庚型肝炎中TTV DNA阳性率分别为7.8%，9.0%，41.8%，48%，在乙型肝炎及丙型肝炎中检出率为27.8%，22%. 此外，在新西兰，北美也有TTV感染的报告[7，8]，在北美供血员中TTV阳性率为1%，在肝衰竭患者中占27%. 由此可见，TTV感染呈全球性分布，但各家报道阳性率不一，其原因可能是TTV分布存在地理性差异和TTV的变异，存在不同基因型以及检测方法有一定漏检率.TTV可通过输血而传播. 日本学者报告的3例TTV阳性患者均有明确的输血史. 在苏格兰的血友病患者及血制品中有较高的TTV检出率. Naoumov et al [3]也报告所检出的TTV DNA阳性者大多数有输血史及静脉毒瘾史，说明输血是TTV感染的重要途径. 但也有相当一部分TTV阳性患者无输血及血制品输入史，且在甲型肝炎中也有19%检出TTV DNA [9]，提示可能存在输血以外的其他传播途径如接触传播或消化道传播. 骆抗先et al[10]对武汉某职校一次以ALT升高为主的原因不明的肝炎流行调查时发现，通过特异性引物PCR法在患者急性期血清及潜伏期粪便中提取DNA后可扩增出与“TTV”相同的基因片段，提示这一病毒可能通过消化道传播. 由此看来，TTV可能存在多种传播途径.
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除了在特殊人群中检出TTV外，在ALT正常的献血员及一般人群中也有一定感染率，各家报道不一[5，8]，Naoumov et al [3]报告正常健康对照中约为10%，高于HGV 3倍，且无明显临床症状和体征，推测TTV可能存在类似HBV的“健康携带者”. TTV可与HBV、HCV重叠感染，但似不加重病情 [8].
4 TTV与肝损伤的关系
自TTV发现以来，其致病性就成为一个关注的热点. Nishizawa et al [1]观察了3例TTV阳性患者不同阶段ALT变化情况，2例病毒血症是一过性的，在血清ALT达高峰前TTV DNA为阳性，输血后4wk～6wk阴转，ALT即恢复正常. 另一例TTV DNA的出现则与ALT高峰出现一致，输血后17wk滴度达高峰，持续21wk并伴ALT中度升高，提示血中TTV滴度与ALT密切相关. 国内孟庆华et al [9]报告TTV在原因不明的重症肝炎中检出率高，其中急性重症肝炎66.7%(4/6)，慢性重症肝炎50%(3/6). Simmonds et al[4]报告的21例重症肝炎中4例TTV DNA(+)，其中3例不能排除TTV的致病作用，提示TTV可能是导致重症肝炎、肝衰竭的致病因子之一. 许德军et al [12]通过原位杂交对19例非甲-庚型肝炎肝组织中TTV DNA进行了检测，TTV DNA表达于肝细胞核或胞质内. 急性肝炎时，TTV阳性细胞弥漫分布于肝小叶内，慢性肝炎于汇管区附近较为密集，肝组织中与血清中TTV DNA检出结果大致相同，因此认为TTV是一种嗜肝病毒，可引起不同程度肝损伤. 但也有与此相反的研究结果，Naoumov et al [3]研究了不同类型慢性肝病血清TTV DNA阳性与肝功、肝组织学的关系，结果大多数TTV阳性患者肝功正常(14/24)，占58%，8例肝组织学无明显炎症改变，另6例仅有轻微的门静脉区炎症改变. 在两例ALT异常的TTV阳性病例中，1例无明显肝组织学损害，另一例有中度慢性肝炎改变，此项研究结果表明，TTV可能不是原因不明肝炎的致病因子，可能和HGV一样不导致或仅导致轻微肝损伤. 陈红松et al [11]对50例血透患者的研究发现TTV感染与ALT升高之间无统计学差异. 此外在普通人群及ALT正常献血员中TTV的检出率也不低，可见TTV是否具致病性尚是一个疑问.
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目前对TTV的研究尚处于起始阶段，现有检测方法也仅限于PCR法，尚无简便易行的ELISA法，无法进行大规模的人群调查，对其自然感染史，人体免疫状态也模糊不清. 最重要的是TTV是否真正是一个导致肝炎的致病因子，致病力如何，和各型肝病的关系怎样，均需进一步进行研究探讨.
4 参考文献
1 Nishizawa T，Okamoto H, Konish K, Yoshizawa H, Miyakawa Y, Mayumi M. A novel DNA virus(TTV) associated with
elevated transaminase levels in posttransfusion hepatitis of unknow etiology. Biochem Biophys Res Commun, 1997；241：92-97
, http://www.100md.com
2 Okamoto H, Nishizawa T, Kato N, Ukita M, Ikeda K, Miyakawa Y, Mayumi M. Molecular cloning and characterization of a novel DNA
virus(TTV) associated with posttransfusion hepatitis of unknown etiology. Hepatol Res, 1998;10:1-16
3 Naoumov NV,Petrova EP,Thomas MG,Willians R. Presence of a newly described human DNA virus (TTV) in patients with liver
disease. Lancet, 1998;352:195-197
, 百拇医药
4 Simmonds P, Davidson F, Lycett C, Prescott LE, Mocdonald DM, Ellender J, Yap PL, Ludlam CA, Haydon GH. Detection of a novel
DNA virus (TTV) in blood donors and blood products. Lancet, 1998;352:191-195
5 马为民，周伯平，王火生，徐六妹，袁静，付涌水，孙彤. 一种新的可经血传播病毒(TTV)的分子流行病学研究.
中华肝脏病学杂志，1998；6：167-169
6 周育森，何忠平，董京芳，王海涛. 中国人TTV部分基因的克隆及序列测定. 军事医学院院刊，1998；22：81-83
, 百拇医药
7 GraemeWoodfield D, Gane E. Hepatitis TT Virus is present in New Zealand. NZ Med J, 1998;111:195-196
8 Charlton M, Hdjei P, Poterucha J, Zein N, Moore B, Therneau T, Krom R, Wiesner R. TT-Virus infection in North American
blood donors, patients with fulminant hepatic failure,and cryptogenic cirrhosis. Hepatology, 1998;28:839-842
9 孟庆华，周育森，刘德恭，王海涛. TTV在肝炎患者中的检测及临床意义探讨. 中华实验和临床病毒学杂志，1998；12：111-114
, 百拇医药
10 骆抗先，章廉，王珊珊，聂军，葛娅，陈志英，俞守义，刘银燕，杨守昌，梁尉英，何海棠，焦成松. 一种新型肠传性病毒性肝炎的临床
流行病学的初步研究. 中华肝脏病学杂志， 1998；6：161-163
11 陈红松，从旭，王宇. 经血传播病毒(TTV)在血液透析患者中的感染状况及基因分析. 中华肝脏病学杂志，1998；6：131-133
12 许德军，郎振为，王国玉，阎惠平，徐瑞平，李德芬，周育森，王海涛. 肝组织中TTV DNA原位检测及临床病理分析.
胃肠病学和肝病学杂志，1998；7：221-224, 百拇医药(陈天艳 张树林)
项目负责人 陈天艳西安医科大学第一临床医学院肝炎研究室 陕西省西安市 710061
收稿日期 1999-01-03 接收日期 1999-03-01
Subject headings hepatitis/transmission; hepatitis C; transfusion; gene,viral
主题词 肝炎/传播；肝炎，丙型；输血；基因，病毒
输血传播病毒(transfusion-transmitted virus, TTV)是1997年底日本学者发现的一种被认为可引起人类输血后肝炎的新的DNA病毒. 目前国内外学者对不同地区、人群TTV感染状况及其致病性进行了初步探讨，现将有关情况综述如下.
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1 TTV基本特征
Nishizawa et al [1]利用代表性差异分析对一位输血后非甲一庚型肝炎患者(TT)的双份血清进行分析，一份为ALT高峰时血清，一份为既往ALT正常时血清，得到一条宽但清晰的500bp的电泳带，切下该产物提纯后连接至PT7BLue-T载体，再转化至大肠杆菌，从所得到的36个克隆中获得一DNA序列，根据其核苷酸的同源性分为13组，将每组的代表性克隆与基因库中已有序列进行同源分析后，得出4个克隆，再根据其序列合成特异性引物，通过PCR法，从ALT异常血清中检出一阳性克隆，命名为N22，N22长度为500bp，编码至少166个氨基酸，这是最早发现的TTV. 分子生物学研究表明，TTV为单股DNA病毒，全长3.7kb，无包膜，蔗糖浮力密度为1.26g/cm3，氯化铯浮力密度为1.31g/cm3～1.32g/cm3，有两个开放阅读框架(ORF)，ORF1位于该基因组的589～2898位核苷酸，编码770个氨基酸，ORF2位于107～712位核苷酸，编码202个氨基酸. TTV基因组全长3739个核苷酸，有12个TATA序列，两个以AATAAA为代表的多腺苷酸信号，与微小病毒科的某些特征相似[2].
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2 基因变异及基因分型
在Nishizawa et al所发现的3例TTV DNA阳性病例中，2例的DNA序列只有3个核苷酸的差异，1例则差异较大，约有46～47个核苷酸不同，其变异度较大. 而后进一步根据TTV1902-2257间的序列对日本78个分离株进行分析，76个分为一组(G1)，另2个分为一组(G2)，两组间核苷酸变异大于30%，两组可再分为2个亚型，即G1a,G2a,G1b,G2b[1,2]. Naoumov et al [3]对各型肝病中TTV DNA(+)的病例进行测序分析认为基因型与日本相似，其中G1的变异较小，G2的变异较大为15%～27%. Simmonds et al [4]的研究则认为除存在G1，G2外，还发现一种新的基因型G3. 国内研究与日本株部分基因片段同源性分析在66.2%～98%之间，变异度大于33%. 马为民et al [5]对深圳5例TTV DNA阳性的非甲-庚型肝炎基因分析结果表明以G2型为主，特别是G2b 型，提示我国流行的TTV基因型与日本可能不同. 但上述比较是部分基因片段的比较，如何明确其基因型、亚型、是否存在高变区，还需进行更多全基因序列的比较.
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3 流行病学特征
Okamoto et al [2]研究表明，TTV分布广泛. 在非甲-戊型重症肝炎中占47%，非甲-戊型慢性肝炎中占46%，其中慢性肝炎47%，肝硬变48%，肝癌39%，献血员12%. Simmonds et al [4]研究表明在苏格兰无偿献血员中TTV检出率为1.9%. Naoumov et al[3]的研究结果则显示各型肝炎中TTV DNA(+)占10%～38%，正常健康对照为10%. 国内学者对我国不同地区、人群进行了TTV的检测，TTV感染较广泛. 周育森et al[6]首次用PCR法证实我国人群中存在TTV感染. 马为民et al [5]则报告在一般人群、有偿献血者，静脉毒瘾者，非甲-庚型肝炎中TTV DNA阳性率分别为7.8%，9.0%，41.8%，48%，在乙型肝炎及丙型肝炎中检出率为27.8%，22%. 此外，在新西兰，北美也有TTV感染的报告[7，8]，在北美供血员中TTV阳性率为1%，在肝衰竭患者中占27%. 由此可见，TTV感染呈全球性分布，但各家报道阳性率不一，其原因可能是TTV分布存在地理性差异和TTV的变异，存在不同基因型以及检测方法有一定漏检率.TTV可通过输血而传播. 日本学者报告的3例TTV阳性患者均有明确的输血史. 在苏格兰的血友病患者及血制品中有较高的TTV检出率. Naoumov et al [3]也报告所检出的TTV DNA阳性者大多数有输血史及静脉毒瘾史，说明输血是TTV感染的重要途径. 但也有相当一部分TTV阳性患者无输血及血制品输入史，且在甲型肝炎中也有19%检出TTV DNA [9]，提示可能存在输血以外的其他传播途径如接触传播或消化道传播. 骆抗先et al[10]对武汉某职校一次以ALT升高为主的原因不明的肝炎流行调查时发现，通过特异性引物PCR法在患者急性期血清及潜伏期粪便中提取DNA后可扩增出与“TTV”相同的基因片段，提示这一病毒可能通过消化道传播. 由此看来，TTV可能存在多种传播途径.
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除了在特殊人群中检出TTV外，在ALT正常的献血员及一般人群中也有一定感染率，各家报道不一[5，8]，Naoumov et al [3]报告正常健康对照中约为10%，高于HGV 3倍，且无明显临床症状和体征，推测TTV可能存在类似HBV的“健康携带者”. TTV可与HBV、HCV重叠感染，但似不加重病情 [8].
4 TTV与肝损伤的关系
自TTV发现以来，其致病性就成为一个关注的热点. Nishizawa et al [1]观察了3例TTV阳性患者不同阶段ALT变化情况，2例病毒血症是一过性的，在血清ALT达高峰前TTV DNA为阳性，输血后4wk～6wk阴转，ALT即恢复正常. 另一例TTV DNA的出现则与ALT高峰出现一致，输血后17wk滴度达高峰，持续21wk并伴ALT中度升高，提示血中TTV滴度与ALT密切相关. 国内孟庆华et al [9]报告TTV在原因不明的重症肝炎中检出率高，其中急性重症肝炎66.7%(4/6)，慢性重症肝炎50%(3/6). Simmonds et al[4]报告的21例重症肝炎中4例TTV DNA(+)，其中3例不能排除TTV的致病作用，提示TTV可能是导致重症肝炎、肝衰竭的致病因子之一. 许德军et al [12]通过原位杂交对19例非甲-庚型肝炎肝组织中TTV DNA进行了检测，TTV DNA表达于肝细胞核或胞质内. 急性肝炎时，TTV阳性细胞弥漫分布于肝小叶内，慢性肝炎于汇管区附近较为密集，肝组织中与血清中TTV DNA检出结果大致相同，因此认为TTV是一种嗜肝病毒，可引起不同程度肝损伤. 但也有与此相反的研究结果，Naoumov et al [3]研究了不同类型慢性肝病血清TTV DNA阳性与肝功、肝组织学的关系，结果大多数TTV阳性患者肝功正常(14/24)，占58%，8例肝组织学无明显炎症改变，另6例仅有轻微的门静脉区炎症改变. 在两例ALT异常的TTV阳性病例中，1例无明显肝组织学损害，另一例有中度慢性肝炎改变，此项研究结果表明，TTV可能不是原因不明肝炎的致病因子，可能和HGV一样不导致或仅导致轻微肝损伤. 陈红松et al [11]对50例血透患者的研究发现TTV感染与ALT升高之间无统计学差异. 此外在普通人群及ALT正常献血员中TTV的检出率也不低，可见TTV是否具致病性尚是一个疑问.
, http://www.100md.com
目前对TTV的研究尚处于起始阶段，现有检测方法也仅限于PCR法，尚无简便易行的ELISA法，无法进行大规模的人群调查，对其自然感染史，人体免疫状态也模糊不清. 最重要的是TTV是否真正是一个导致肝炎的致病因子，致病力如何，和各型肝病的关系怎样，均需进一步进行研究探讨.
4 参考文献
1 Nishizawa T，Okamoto H, Konish K, Yoshizawa H, Miyakawa Y, Mayumi M. A novel DNA virus(TTV) associated with
elevated transaminase levels in posttransfusion hepatitis of unknow etiology. Biochem Biophys Res Commun, 1997；241：92-97
, http://www.100md.com
2 Okamoto H, Nishizawa T, Kato N, Ukita M, Ikeda K, Miyakawa Y, Mayumi M. Molecular cloning and characterization of a novel DNA
virus(TTV) associated with posttransfusion hepatitis of unknown etiology. Hepatol Res, 1998;10:1-16
3 Naoumov NV,Petrova EP,Thomas MG,Willians R. Presence of a newly described human DNA virus (TTV) in patients with liver
disease. Lancet, 1998;352:195-197
, 百拇医药
4 Simmonds P, Davidson F, Lycett C, Prescott LE, Mocdonald DM, Ellender J, Yap PL, Ludlam CA, Haydon GH. Detection of a novel
DNA virus (TTV) in blood donors and blood products. Lancet, 1998;352:191-195
5 马为民，周伯平，王火生，徐六妹，袁静，付涌水，孙彤. 一种新的可经血传播病毒(TTV)的分子流行病学研究.
中华肝脏病学杂志，1998；6：167-169
6 周育森，何忠平，董京芳，王海涛. 中国人TTV部分基因的克隆及序列测定. 军事医学院院刊，1998；22：81-83
, 百拇医药
7 GraemeWoodfield D, Gane E. Hepatitis TT Virus is present in New Zealand. NZ Med J, 1998;111:195-196
8 Charlton M, Hdjei P, Poterucha J, Zein N, Moore B, Therneau T, Krom R, Wiesner R. TT-Virus infection in North American
blood donors, patients with fulminant hepatic failure,and cryptogenic cirrhosis. Hepatology, 1998;28:839-842
9 孟庆华，周育森，刘德恭，王海涛. TTV在肝炎患者中的检测及临床意义探讨. 中华实验和临床病毒学杂志，1998；12：111-114
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10 骆抗先，章廉，王珊珊，聂军，葛娅，陈志英，俞守义，刘银燕，杨守昌，梁尉英，何海棠，焦成松. 一种新型肠传性病毒性肝炎的临床
流行病学的初步研究. 中华肝脏病学杂志， 1998；6：161-163
11 陈红松，从旭，王宇. 经血传播病毒(TTV)在血液透析患者中的感染状况及基因分析. 中华肝脏病学杂志，1998；6：131-133
12 许德军，郎振为，王国玉，阎惠平，徐瑞平，李德芬，周育森，王海涛. 肝组织中TTV DNA原位检测及临床病理分析.
胃肠病学和肝病学杂志，1998；7：221-224, 百拇医药(陈天艳 张树林)