幽门螺杆菌cagA基因与致病性的研究
第三军医大学临床微生物学教研室 重庆市 400038
国家重点科技攻关计划课题，No.96-901-01-54
项目负责人 郭刚第三军医大学临床微生物学教研室 重庆市 400038
E-mail clinimmu@public.cta.cq.cn
收稿日期 1998-12-22 接收日期 1999-03-01
Subject headingsHelicobacter pylori; peptic ulcer; gastritis; CagA gene
, http://www.100md.com
主题词 螺杆菌，幽门；消化性溃疡；胃炎；cagA基因
1 材料和方法
1.1 材料 1997/1998我校附属医院消化科门诊和住院部患者. 通过临床和内镜镜检诊断为十二指肠溃疡病(DU)24例，胃溃疡病(GU)19例，慢性胃窦胃炎(GI)39例，无明显病变者20例. 年龄21岁～69岁，男女比例相当.
1.2 方法 ①Hp感染评估：每个患者均经内镜采取胃窦部活检组织3块，一块作Hp分离培养并直接涂片行姬姆萨染色，一块作尿素酶试验，另一块作PCR检测. 用培养、镜检、尿素酶试验及PCR鉴定结果对患者作Hp感染评估，4种结果中2种以上阳性者诊断为Hp感染. ②PCR扩增及鉴定：鉴定Hp DNA PCR诊断试剂盒及用于检测cagA基因的Hp cagA诊断试剂盒(上海复星高科技有限公司)；DNA扩增仪(PTC-100，美国MJ公司)凝胶成象系统(GDS7600S，美国UVP公司). ③DNA提取：取小块胃窦部活检组织在匀浆器中磨碎，加500μL生理盐水洗涤，离心弃上清，共2次. 在沉淀中加入50μL DNA 提取液，振荡均匀后加2μL蛋白酶K，55℃水浴1h，100℃沸水浴15min. 15000r/min离心10min. 分别取3.5μL上清加入DNA试剂盒和cagA试剂盒的反应液中，按要求进行扩增. ④产物鉴定：分别取产物10μL用10g/L琼脂糖凝胶电泳1h(电压5V/cm)，置凝胶成象分析系统观察，若标本中有Hp，则在220bp处出现橙黄色条带；若含cagA基因，则在350bp处出现橙黄色条带.
, 百拇医药
2 结果
经细菌培养、尿素酶试验、染色镜检及PCR检测的综合诊断Hp阳性，cagA基因阳性例数及cagA+ Hp阳性率见表1.
表1 胃病患者胃活检标本中Hp, cagA基因PCR检测结果
, 百拇医药
aP<0.05，vs 胃溃疡及慢性胃窦炎组，bP<0.01，vs 无明显病变组比较.
3 讨论
幽门螺杆菌细胞空泡毒素(VacA)和细胞毒相关蛋白(CagA)作为两种重要的毒力因子，已越来越受到重视. 虽然所有Hp菌株都具有vacA基因，但只有约60%的菌株分泌有活性的细胞毒素，而与细胞毒素产生密切相关的是CagA蛋白[1]. 临床上，根据是否产生VacA和CagA可将Hp分为两种类型，即Ⅰ型为产细胞毒素Hp菌株，Ⅱ型为不产细胞毒素Hp菌株[2]. 以往在假设Hp菌株具有相同毒力的基础上所进行的流行病学调查无法真实代表Hp的致病意义，而以基因分型检测为代表的第二代流行病学研究方法正倍受推崇. 本结果显示，Hp感染的胃病患者cagA基因阳性率大大高于无明显病变者，而DU患者最高，明显高于GU和慢性胃窦胃炎患者. 说明胃部病变与Hp是否带有cagA基因具有较大关系，而与DU的发生关系最密切.对cagA+Hp菌株的流行病学调查较多资料报道采用血清学试验[3]，它能测出机体对所有感染Hp的抗体应答，测出抗cagA则是cagA+菌株感染的标志. 采用PCR技术对cagA基因的鉴定则能较好监测体内Hp菌株所带cagA基因的情况，通过对细菌基因型的检测还可初步判断患者是以往感染复发还是新菌株的感染.
, 百拇医药
致谢 西南医院及新桥医院消化科罗志彬、张朋彬两位博士在采集标本中给予大力帮助，特此致谢!
4 参考文献
1 Owen RJ, Hurtado A, Banatvala N, Abdi Y, Davies GR, Feldman R, Hardie JM. Conservation of cytotoxin-associated (cagA) gene
of Helicobacter pylori and investigaion of association with vacuolating oytotoxin activity and gastroduodenal disease.
FEMS Immun Med Microbiol, 1994;9:307-316
, 百拇医药
2 Xiang Z, Censini S, Bayeli PF, Telford JL, Figura V, Rappuoli R, Covacci A. Analysis of expression of CagA and VacA virulence factors
in 43 strains of Helicobacter pylori reveals that clinical isolates can be divided into two major types and that cagA is
not necessary for expression of the vacuolating cytotoxin. Infect Immun, 1995;63:94-98
3 Crabtree JE, Taylor JD, Wyatt JI, Heatley RV, Shallcross TM, Tompkins DS, Rathbone BJ. Mucosal IgA recognition of
Helicobacter pylori 120 kDa protein, peptic ulceration, and gastric pathology. Lancet, 1991;338:332-335, 百拇医药(郭 刚 邹全明 解庆华 张卫军 鲁东水)
国家重点科技攻关计划课题，No.96-901-01-54
项目负责人 郭刚第三军医大学临床微生物学教研室 重庆市 400038
E-mail clinimmu@public.cta.cq.cn
收稿日期 1998-12-22 接收日期 1999-03-01
Subject headingsHelicobacter pylori; peptic ulcer; gastritis; CagA gene
, http://www.100md.com
主题词 螺杆菌，幽门；消化性溃疡；胃炎；cagA基因
1 材料和方法
1.1 材料 1997/1998我校附属医院消化科门诊和住院部患者. 通过临床和内镜镜检诊断为十二指肠溃疡病(DU)24例，胃溃疡病(GU)19例，慢性胃窦胃炎(GI)39例，无明显病变者20例. 年龄21岁～69岁，男女比例相当.
1.2 方法 ①Hp感染评估：每个患者均经内镜采取胃窦部活检组织3块，一块作Hp分离培养并直接涂片行姬姆萨染色，一块作尿素酶试验，另一块作PCR检测. 用培养、镜检、尿素酶试验及PCR鉴定结果对患者作Hp感染评估，4种结果中2种以上阳性者诊断为Hp感染. ②PCR扩增及鉴定：鉴定Hp DNA PCR诊断试剂盒及用于检测cagA基因的Hp cagA诊断试剂盒(上海复星高科技有限公司)；DNA扩增仪(PTC-100，美国MJ公司)凝胶成象系统(GDS7600S，美国UVP公司). ③DNA提取：取小块胃窦部活检组织在匀浆器中磨碎，加500μL生理盐水洗涤，离心弃上清，共2次. 在沉淀中加入50μL DNA 提取液，振荡均匀后加2μL蛋白酶K，55℃水浴1h，100℃沸水浴15min. 15000r/min离心10min. 分别取3.5μL上清加入DNA试剂盒和cagA试剂盒的反应液中，按要求进行扩增. ④产物鉴定：分别取产物10μL用10g/L琼脂糖凝胶电泳1h(电压5V/cm)，置凝胶成象分析系统观察，若标本中有Hp，则在220bp处出现橙黄色条带；若含cagA基因，则在350bp处出现橙黄色条带.
, 百拇医药
2 结果
经细菌培养、尿素酶试验、染色镜检及PCR检测的综合诊断Hp阳性，cagA基因阳性例数及cagA+ Hp阳性率见表1.
表1 胃病患者胃活检标本中Hp, cagA基因PCR检测结果
| 分组 | n | Hp阳性(n) | cagA基因阳性(n) | cagA+Hp(%) |
| 十二指肠溃疡 | 24 | 20 | 18 | 90.0ab |
| 胃溃疡 | 19 | 14 | 9 | 64.3b |
| 慢性胃窦炎 | 39 | 30 | 17 | 56.7b |
| 无明显病变 | 20 | 6 | 1 | 16.7 |
, 百拇医药
aP<0.05，vs 胃溃疡及慢性胃窦炎组，bP<0.01，vs 无明显病变组比较.
3 讨论
幽门螺杆菌细胞空泡毒素(VacA)和细胞毒相关蛋白(CagA)作为两种重要的毒力因子，已越来越受到重视. 虽然所有Hp菌株都具有vacA基因，但只有约60%的菌株分泌有活性的细胞毒素，而与细胞毒素产生密切相关的是CagA蛋白[1]. 临床上，根据是否产生VacA和CagA可将Hp分为两种类型，即Ⅰ型为产细胞毒素Hp菌株，Ⅱ型为不产细胞毒素Hp菌株[2]. 以往在假设Hp菌株具有相同毒力的基础上所进行的流行病学调查无法真实代表Hp的致病意义，而以基因分型检测为代表的第二代流行病学研究方法正倍受推崇. 本结果显示，Hp感染的胃病患者cagA基因阳性率大大高于无明显病变者，而DU患者最高，明显高于GU和慢性胃窦胃炎患者. 说明胃部病变与Hp是否带有cagA基因具有较大关系，而与DU的发生关系最密切.对cagA+Hp菌株的流行病学调查较多资料报道采用血清学试验[3]，它能测出机体对所有感染Hp的抗体应答，测出抗cagA则是cagA+菌株感染的标志. 采用PCR技术对cagA基因的鉴定则能较好监测体内Hp菌株所带cagA基因的情况，通过对细菌基因型的检测还可初步判断患者是以往感染复发还是新菌株的感染.
, 百拇医药
致谢 西南医院及新桥医院消化科罗志彬、张朋彬两位博士在采集标本中给予大力帮助，特此致谢!
4 参考文献
1 Owen RJ, Hurtado A, Banatvala N, Abdi Y, Davies GR, Feldman R, Hardie JM. Conservation of cytotoxin-associated (cagA) gene
of Helicobacter pylori and investigaion of association with vacuolating oytotoxin activity and gastroduodenal disease.
FEMS Immun Med Microbiol, 1994;9:307-316
, 百拇医药
2 Xiang Z, Censini S, Bayeli PF, Telford JL, Figura V, Rappuoli R, Covacci A. Analysis of expression of CagA and VacA virulence factors
in 43 strains of Helicobacter pylori reveals that clinical isolates can be divided into two major types and that cagA is
not necessary for expression of the vacuolating cytotoxin. Infect Immun, 1995;63:94-98
3 Crabtree JE, Taylor JD, Wyatt JI, Heatley RV, Shallcross TM, Tompkins DS, Rathbone BJ. Mucosal IgA recognition of
Helicobacter pylori 120 kDa protein, peptic ulceration, and gastric pathology. Lancet, 1991;338:332-335, 百拇医药(郭 刚 邹全明 解庆华 张卫军 鲁东水)